免疫组化免疫组化
1. 尽量取新鲜组织,组织块不要过大,过大可适当延长固定时间,根据要固定的组织选择
不同的固定液。
2. 先向容器中加入适量固定液,为组织块5-10倍,再投入组织块,以避免组织块粘附在容
器壁上
3. 梯度脱水,70%乙醇1 X 1h;
4. 80%乙醇2 X 1h;
5. 90%乙醇 1X 1h;
6. 100%乙醇 3X 1h或30min
7. 二甲苯 3X 20min
8. 58-60度石蜡浸蜡,2X 1h;或第二道过夜
9. 包埋,脱模,可保存在室温或4度冰箱
10. 切片,贴片
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免疫组化
1. 尽量取新鲜组织,组织块不要过大,过大可适当延长固定时间,根据要固定的组织选择
不同的固定液。
2. 先向容器中加入适量固定液,为组织块5-10倍,再投入组织块,以避免组织块粘附在容
器壁上
3. 梯度脱水,70%乙醇1 X 1h;
4. 80%乙醇2 X 1h;
5. 90%乙醇 1X 1h;
6. 100%乙醇 3X 1h或30min
7. 二甲苯 3X 20min
8. 58-60度石蜡浸蜡,2X 1h;或第二道过夜
9. 包埋,脱模,可保存在室温或4度冰箱
10. 切片,贴片
11. 60度烤片过夜
12. 二甲苯 15min,二甲苯5min
13. 100%乙醇 2X 2min
14. 90%乙醇 1X 2min
15. 80%乙醇 1X 2min
16. 70%乙醇 1X 2min
17. 水洗 1X 5min
18. 苏木素 染色,根据苏木素配制方法不同,染色时间不同
19. 水洗1X 10min
20. 1%盐酸酒精 摇6-8下,至蓝色消失
21. 水洗1X 10min
22. 70%乙醇 1X 2min
23. 80%乙醇 1X 2min
24. 90%乙醇溶解的酚红 染色 5-10秒,根据酚红配制时间决定
25. 90%乙醇 1X 2min
26. 100%乙醇 2X 2min
27. 二甲苯5min,二甲苯15min
28. 用中性树脂封片
冰冻切片
1. 讲冷冻切片机降温,冷冻室温-20度,刀架-20度,根据组织的要求调整 2. 取新鲜组织,组织块不要过大,如果立即做可以直接把组织块加OCT包埋在-20度切片
机内速冻,OCT全部变白后即可,如果因组织块过大有部分暴漏,要再补OCT将组织
块全部包埋在OCT中,可适当冻久点,冻得时间长组织容易切不容易碎;如果不立即
做,可将组织块加OCT后冻在-80冰箱,如果组织有外膜,可加OCT后在室温适当放
置一段时间,以利于OCT浸透(如果切片时发现组织碎裂或内部破碎可能因为OCT浸
透不好或冷冻不好,可放在室温融化后重新冷冻)
3. 将模块涂上一层OCT,冻硬后将组织放在上面,加OCT包埋整个组织,放在冷冻切片
机内,OCT全白后可切片
4. 选择适当厚度,切片
5. 切片展开后,用室温的玻片直接平行压在切片上,OCT接触到室温玻片会融化,讲组织
贴在玻片上
6. 切好的玻片可在室温放置30min-1h左右,可使组织贴的更牢 7. 切好的片子放在-80冰箱保存
8. 剩余的组织块可用锡纸包好冻在-80度冰箱。
9. 如果组织切片前没有固定,可将片子浸在固定液中固定片刻,根据自己组织特点及要做
的实验选择固定液和固定时间。
10. 染色观察
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