一株不表达K88,K99,987P粘附因子的鸽源产毒素性大肠杆菌？…

一株不达K88,K99,987P粘附因子的鸽源产毒素性大肠杆菌？… 一株不表达K88,K99,987P粘附因子的鸽源 产毒素性大肠杆菌,… 第214第2期 1999年3月 中国预防兽医 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Vol21,No2 Mar.1999 一 株不表达K88,K99,987P粘附因子 1一,的 , (喀什动植物检疫局,喀什8440【Jo一 2fz 摘要从病鸽尸体中分离出一株大肠杆菌.通过生化试验,血清学鉴定及动物致病眭 试验,表明该苗是一株具 有很强致病力的不表达K88,K99,987P牯附素的鸽源产毒素性大肠轩菌 关键词旦辛g笔良 中图分类号Q78$85265文献标识码A文章编号1008.0589(1999】02—0087.02 IsolationandIdentificationofaK88,K99.987PAdherenceFactors-negative E.coliStrainthatProducesEnterotoxinfromPigeon WeM\'GXingfu.Gere6.DENGXiulangdol {Khg丑『Ani~]andplantOu~.ndneB~am[Chim.Kashgaf844000} AbstractAEco/*"strainwasisolatedfromC8/'C8SF-,eSofPigeonItshowedthattheJ~latew ashighlypathogenic,K88,K99 987Pedher~lcefactorsnegativeandenlem,oxinproducingbybiochemistry.sero-testsandp athogenicitytests KeywnrdsE.ca/iPigeon 1997年6月,喀什市某个体户送检病鸽4只,病 鸽精神不佳,头向土翻转,站立不稳,有神经症状,废 食,拉黄绿色水样粪便,观察2天后,病鸽全部脱水死 亡.剖检尸体,肝脏质脆,肿大,小肠大面积出血.该 个体户反映,鸽群前后两次发病,死亡20多只,均在 饮水后出现以上症状,我们从4只病鸽中分离到一抹 大肠杆菌,通过生化试验,血清学鉴定及动物回归试 验,确定该菌为一株不表达K88,K99,987P粘附素 的产毒性大肠杆菌,现将结果如下. 1材料和 1.1菌婊该菌株分离自4只病鸽尸体的肝眭及 肠遭内. 1.2诊断血清肠道致病性大肠埃希氏菌诊断血清 (卫生部兰州生物制品研究所,批号961102);K88, K99,987P单因子冻干血清(新辐畜牧科学院兽医研 究所提供),大肠杆菌0157单因子血清(卫生部兰州 生物制品研究所970301) 1.3其它微量生化试管培养基(浙江省军区后 勤部卫生防疫检验所950320),试验动物:小鼠,豚 *乌鲁木齐动擅物棱疫局 **新疆喀什地区兽药诃料监察站 收稿日期}1998—05—28 鼠,家兔,雏鸡,鸽等均来自乌鲁木齐动植物检疫局动 物. 1.4培养特?}生将分离到的菌株用普通肉汤,SS, 麦康凯和伊红美蓝培养基进行反复挑取符合大肠杆 菌培养特征的菌株.然后将该菌株接种于半固体培养 基,置4?冰箱备用. 1.5生化试验按常规方法将纯化的菌株作V—P, MR,靛基质,产硫化氰,亚硝酸盐产气,枸橡酸盐和 藻朊酸盐利用及发酵各种糖试验. 1.6血清学鉴定挑取经连续8次传代纯化后的黄 豆芽普通培养基上的细小,光滑的小菌落2,3个.与 OK多价,OK单价及O157单因子血清作玻片凝集 试验;将K88,K99,987P单因子冻干血清用生理盐 水作1:10稀释后,取一滴于玻片上,挑取经传代纯化 后的可疑小菌落2,3个与血清混匀,1分钟后出现 凝集块且液体清亮者判为阳性.将提纯的菌毛抗原 与其相直的K88,K99,987P因子血清作琼脂扩散试 验,观察有无沉淀线出现. 1.7动物回归试验将该菌接种于普通肉汤培养基 中.经37?,培养l8,24小时.分别取该培养菌液 0.5ml,1,Oral,1.Oml,0,2ml,0.25ml腹腔接种小鼠, 豚鼠,家兔,皮下注射鸽子和雏鸡.同时,以无菌普通 肉汤同剂量作相应对照,观察24小时以上.死亡者判 为阳性,并确定该菌有致病性. 中国预防兽医学撤 1.8肠毒素测定按照参考文献所述免回肠结扎肠 试验和乳鼠胃内投服试验分别进行LT和ST毒素测 定. 19电镜观察将黄豆芽肉汤培养物作4000r/ min30分钟离心,取菌泥,加生理盐水悬浮后再离心, 将经洗涤后的菌泥用生理盐水适当稀释后滴于附有 Formvar膜的200目铜网上,吸附30秒,1分钟,用 小滤纸片从网边吸去多余菌液,不等干燥,立即滴上 pl-r7.2.0.2%磷钨酸负染约1分钟,用滤纸片吸去染 液,自然干燥,电镜观察. 2结果 2.1培养特性普通肉汤中该菌呈均匀混浊状态生 长,在ss,麦康凯培养基上均形成红色菌落,伊红美 蓝培养基上呈绿色金属光泽的菌落. 2.2生化试验MR,靛基质阳性;V—P,亚硝酸盐产 气,产硫化氰;枸椽酸盐,藻朊酸盐利用阳性;蕈糖,甜 醇,鼠李糖,麦芽糖,葡萄糖,乳糖,木糖,卫茅醇,果 糖,棉子糖,甘露醇阳性;水杨素,蔗糖,菊糖,肌醇阴 性. 2.3血清学鉴定该菌均不与各种OK及OK单价 血清,O157单价血清发生凝集反应,与K88,K99, 987P单因子血清也不发生凝集反应,将提纯的菌毛 抗原与相应的K88,K99,987P因子血清作双向琼脂 扩散试验,结果也未见沉淀线出现. 2.4动物试验该菌对各种动物的致死率分别为小 鼠33.3%(1/3),豚鼠100%(3/3),家兔0%(0/3), 雏鸡33.3%(1/3),鸽子100%(3/3),且各对照组动 物健康存活,从死亡鸽体肝脏中再次获得与初次分离 完全一致的细菌. 2.5肠毒素剐定该菌既产LT毒素又产ST毒素. 2.6电镜观察在电镜下,菌体周身带有密集的菌 毛,长度约7.0,9.0nm,直径约在0.5,2.0nm之 间. 3小结和讨论 3l根据培养特性及生化试验,确定该菌为一株大 肠杆菌. 3.2试验表明:该菌具有广泛的致病性,不仅对鸽, 而且对豚鼠,雏鸡,小鼠等均具有致病性,该菌是 强毒株,在生物学上应值得注意. 3.3毒素源性大肠杆菌(E?)是人畜急性腹泻的主 要致病菌,它通过菌体表面的一种纤细,丝状菌毛,即 定居抗原(colonizationantigen)或粘附素(如K88,K99 等)粘附到宿主小肠粘膜表面,在那里繁殖,分泌肠毒 素,引起腹泻.在腹泻大肠杆菌中常见的菌毛抗原有 CFA/I,CFA/II,K88,K99,F41和987P.我们通过血清 学和肠毒素试验,表明该菌不仅产ST毒素,且产LT 毒素,而GL~ee等报道,仅K88可同时产LT和ST毒 素.而且电镜观察菌体带有较为密集的菌毛抗颞.且与 K88,K99,987P单因子血清均不发生凝集,提纯的菌毛 抗原与K88,K99,987P单因子血清作琼脂扩散试验, 也未见沉淀线出现.说明此菌为一株不表达K88, K99,987P粘附素的产毒素致病性大肠杆菌,这与 Thorrt~sACavey等报道的相一致. 3.41961年K88首次被发现来.K99,987P,F41, CFA/I,CFA/II等具有粘附因子的大肠杆菌相继被 发现,我们在分离到该菌株的同时.分离到一株O44: K88菌株(另文报道),这在国内外尚属首次.其中 044,K88抗原在鸽体内均属首次发现,进一步证明 具有K88因子的大肠杆菌不仅存在于家畜,苍鹰体 内,而且存在于鸽体内,这在生物学上具有重要意义, 其菌的生物学特性有待进一步研究. 3.5病鸽在腹泻的同时,已形成菌血症,造成全身感 染.我们从肝毗中分离出该菌和044,K88致病性大 肠杆菌,说明该菌群多样化.鸽子死亡可能是由多种 血清型大肠杆菌混合感染而致,水源是否是鸽子致病 菌的传染源,还有待进一步证实.