纳米辅酶Q10抗皮肤光老化及其抗氧化作用研究(可编辑)

纳米辅酶Q10抗皮肤光老化及其抗氧化作用研究(可编辑) 纳米辅酶Q10抗皮肤光老化及其抗氧化作用研究 东北林业大学 硕士学位论文 纳米辅酶Q10抗皮肤光老化及其抗氧化作用研究 姓名:王富济 申请学位级别:硕士 专业:生药学 指导教师:杨磊;杨琳 201006 洲 摘要 摘要 辅酶是线粒体的能量来源,是体内天然的抗氧化剂,具有重要的生理作用和临 床应用价值。但是,辅酶是脂溶性的物质,生物利用度低,限制了其应用。 纳米悬浮液制剂是近年来提出的的新剂型,是纳米载药系统的一种,能够提高药物 溶解性、稳定性和生物利用度,还可以实现药物的靶向给药、控制药物释放、增加药物 稳定性、降低不良反应、减少用药剂量等特点。 因此,本论文旨评价辅酶,纳米混悬液载药系统极其机理,进行了纳米制剂的表 征,大鼠体内药代动力学实验,口服辅酶.纳米混悬液体内抗氧化实验;还进行了体 外鼠皮渗透试验,抗皮肤光老化能力实验。本论文研究成果如下: 、研究了纳米辅酶质量评价和稳定性通过电镜和激光粒度仪显示辅酶 ,分散性和稳定性良好的体 为球形颗粒,粒径在,电位为. 系。射线衍射和均显示辅酶以无定形形式存在于纳米悬浮液中。辅酶纳 米悬浮液冻干粉中辅酶的饱和溶解度和体外溶出速率都远高于辅酶原药 .; 显著小于辅 、研究了纳米辅酶药代动力学特性结果表明,.:. 酶原药的值.,表明辅酶经纳米后在大鼠体内的吸收加快,达峰 时间提前。纳米化后药物的.:圭. /显著高于原药的值尸 .,值也大于原药的,表明辅酶经纳米化后在大鼠体内能达到更高的 血浆浓度,机体生物利用度也显著增加,以原药作为参比制剂,纳米混悬液的相 对生物利用度为?%; 结果表明,较原药组和阳性对照组,纳 、研究了纳米辅酶体内抗氧化活性 米组显著升高血浆、和.活力和肝脏的活力.,并明显降 低小鼠血浆和肝脏含量.,并呈现剂量依赖性,辅酶纳米混悬液对小 鼠肝脏和肾脏组织超微结构无任何病理学影响,是安全可靠的新剂型; 通过体外皮肤渗透实验研 、研究了纳米辅酶透皮能力和抗皮肤老化 究,表明辅酶纳米混悬液具有优良的透皮能力,稳态渗透率以为.?. ?~,是市售商品的.倍。在皮肤光老化实验中,较原药组和美丽加芬阳 性对照组,纳米混悬液组显著升高血浆和皮肤中、和.活力俨 .,并明显降低小鼠血浆和皮肤中含量.,提高了皮肤中羟脯氨酸的含 量俨.。 综上所述,辅酶纳米混悬液是辅酶无定形分散体系,载药量高,粒子形态 大多为圆球形,分散性良好,粒径约为 ,具有良好的稳定性。辅酶 纳米 混悬液能够提高药物溶解性、稳定性和生物利用度,增强了药效、 降低不良反应、减少 用药剂量等特点。东北林业大学硕士学位论文 关键词辅酶弼纳米混悬液;药代动力学;抗氧化;皮肤渗透;光老 化‘ , . , , ., ? . . , ,? ,, . ; ; ,? ; , ? , , ., . , , :。、 .? ,?. ,?, ,, , ;、 . . 尸., .. / .. ., 烬/?”, ; 、 ..东北林业大学硕士学位论文 ., 俨., ., ; 、 吨 ?.. ., , .., .,. ., , , .?, ..;;; ; ; .. 绪论 . .引言 辅酶 ,又称泛醌,简称,是生物体内广泛存在的脂溶性醌 类化合物,同时,是一种类维生素类物质,因此也称为维?。它主要参与线粒体内 膜呼吸链的组成,并作为一种维持人体生命的必需物质之一,可作为细胞代谢和细胞呼 吸激活剂,能够清楚体内自由基,改善细胞膜的恢复,稳定膜电位以及保护膜结构的完 整性。在临床、保健和化妆品上有广泛运用,近期,尤其在心脏病治疗和保健 方面,研究发现有治疗心力衰竭、预防和治疗心绞痛、心律失常以及缓解高血压 方面功效卓越’ 纳米技术被公认为是世纪最有前途的高新技术,为生物医药领域带来了革命性 的巨变和发展。其中,纳米制剂技术的出现,是纳米技术与现代药物制剂技术相结合的 产物。与传统制剂技术相比,纳米制剂可以实现靶向给药、控制药物释放、提高药物生 物利用度、增加药物稳定性、降低不良反应、减少用药剂量等目的。所以,纳米载药系 统或者纳米制剂技术,已经成为众多跨国制药企业和药物研究机 构竞争的热点,是现代 药剂学研究的前沿?】。 是脂溶性的物质,不用于人体吸收,生物利用度低,稳定性差,对其剂型和 应用都构成了一定瓶颈。纳米悬浮液制剂是近年来提出的的新剂型,是纳米载药系统的 一种。因此,本课旨在通过质量控制和药效学方面来评价纳米混悬液载药系统,证实 是否改变了的所存在生物体利用的缺点,是否提高溶解性、稳定性以及生 物利用度,能否实现靶向给药、控制药物释放、增加药物稳定性、降低不良反 应、减少用药剂量等目的。从而,为在临床应用、保健品、食品和化妆品等领域 的广泛利用,开辟美好前景。 .辅酶文献综述 辅酶的简介 年,美国的教授在牛心脏线粒体中发现了,同年英国的 教授从患有维生素缺乏症的小鼠肝脏中也得到了这种化合物,并将其命名为泛醌,意 即广泛存在的醌【】。年,等不仅阐明了的化学结构,还进行了 的化学全合成,并首次通过发酵手段获得了辅酶。 年,意大利的教授证明缺乏是引发心脏病等疾病的原因之一 【钔。年,教授用化学渗透假说理论,揭示了生物体内能量的转换以及 在能量转换体系中重要的质子传递作用】。年代初,瑞典教授揭示出 的抗氧化作用和自由基清除作用【】.年,教授的研究表明具东北林业大学硕士学位论文 有类维生素性质【】。年代,?随着日本实现了批量生产纯品的工业技术,极大 地满足了大量临床试验对的需求,有力地促进了临床研究的进展。 分子式:,分子量:.,结构式:如图? 化学名:一,,,,,,,,,一十甲基,,,,,,,,,四十碳十 烯基.,.二甲氧基..甲基..苯醌 英文化学名:,,,,,,,,,,,,,,,, ,,一,一, 图辅酶的分子式 室温下为橙黄色晶体,熔点.,无臭无味。易溶于氯仿、苯、四氯化 碳,溶于丙酮、石油醚及乙醚,微溶于乙醇,不溶于水和甲醇。在光照下易分解成微红 色,对温度和湿度较稳定【】。具有醌的性质,其侧链含有个异戊 二烯单元, 如图.,其功能作用主要来自于醌基的氧化还原化学特性与侧链的物理特性。醌分子 中虽然存在着碳碳双链间的共轭体系,但射线证明醌环不是芳香烃,不属于芳香 族化合物【。它具有典型的烯烃和羰基化合物的反应性能,可以进行多种形式的加成反 应与氧化还原反应。在氧化条件下以醌的形式存在,在无氧条件下,可还原为对 苯二酚,具有可逆的氧化还原特性【?. ..辅酶抗氧化药理作用及临床运用 ...稳定细胞膜和提供线粒体能量 在细胞线粒体呼吸链即电子传递系统中起递氢体作用,是细胞呼吸链的重要 组成部分,参与的合成,它也是一种公认的氧自由基清除剂,如果线粒体中 含量不足,则多种酶活力均明显下降。帕金森症患者的部分病因是线粒体功能障碍,线 粒体呼吸链中任何部分受损都会引起合成障碍,氧化应急反应增强,自由基增多 【】。补充能改善病变组织的缺乏状态,减少由于细胞脂质过氧化损伤引起 的细胞凋亡,或者通过稳定细胞膜结构,维持钙离子通道的完整性以减少细胞损伤,减 缓多巴胺对线粒体的损伤,从而起到保护神经的作用【。每日补充,能在减慢帕 金森症发展的同时减轻症状【】. ...抗心衰作用 外源性进入心肌线粒体内膜,参与线粒体呼吸作用,显著提高线粒体膜磷脂绪论 保护和损伤修复效应,提高射血分数和增加心输出量。通过临床心脏疾病患者的血液 测定研究,发现充血性心力衰竭患者心肌含量较正常人低,证实了充血性心力衰 竭患者心肌内源性含量低于正常水平;并通过对心肌活检表明,心衰程度越严重 的患者,其心肌含量越低。通过对充血性心力衰竭患者每天口服治疗后发 现,半数以上的病人呼吸困难和疲劳等临床症状显著改善,口服组病人每搏容量 和左室射血分数明显增加。同时,统计结果表明,治疗效果与外源补充量成正 比,与心衰程度成正比,而且无论对特发性扩张型心肌病或原因不明的心力衰竭, 的疗效和安全性都是显著的【例。 ...抗再灌注损伤的作用 手术过程中,可明显降心脏低线粒体氧耗,减少细胞三磷酸腺苷消耗清除缺氧下产 生过量的自由基。术前给予,在心脏缺血停跳期间,提供更为充分的心肌保护; 另外】有一定预防再灌注损伤的作用,因此可使术后血液动力学方面得到较快恢 复,可作为心肌保护的辅助手段【。 ...舒缓高血压 减少内皮细胞和血管平滑肌细胞的超氧化物,保护并减轻血管内皮细胞的损伤,因 为可以增加的合成,可作为自由基清除剂降低血管的过氧化状态,促进血管 内皮细胞释放可以保持血管张力的活性物质,舒张外周血管并降低外周阻力,起到舒缓 ,对某些原发性 高血症状的作用【?。经临床证明,每日,疗程 ‘ 及肾血管性高血压常能奏效. ...保护缺血心肌降低心绞痛 用于治疗冠心病心纹痛患者的理论基础是因缺血心肌的含量减 少,补 充外源性后可防止由于缺血所致的线粒体功能障碍,使合成增加并降低氧自 由基产生,从而改善缺血状态下心肌细胞能量代谢及其功能,使缺血心肌耐受较多的能 量消耗,并对心肌细胞膜起到直接的保护作用。实验研究结果证实,稳定型冠心病 ,大部分患者感到胸部压迫感、气短和心 心纹痛患者口服 ?~,疗程? 悸等症状得到改善,心绞痛发作次数减少,含服硝基甘油量较对照组少,运动耐量显著 提高,对稳定型心绞痛具有很好疗效【习。 ...治疗皮肤性疾病 通过研究发现,光老化的发生与内源性抗氧化剂的含量减少有关,能 显著抑制人皮成纤维细胞内胶原激酶的表达,从而减少皮肤内胶原的降解,可阻断光老 化引起的多方面的损伤【】。补充外源性后,可以保护因紫外损伤的人角质形成细 胞,促进表皮细胞增殖。持续光照造成的皮肤光敏反应、光老化和皮肤癌等光损伤,是 由于光照产生大量活性氧簇,皮肤氧化和抗氧化系统失衡造成 的。等【】对 在黑色素瘤的预测转移危险性和无转移期间方面作用的前瞻性研究结果显示, 可作为黑色素瘤进展的一个有效的独立预后因子。 除以上所述常见的临床应用外,尚可用于肌营养不良、糖尿病、支气管炎、东北林业大学硕士学位论文 哮喘、斑秃、耳聋、面瘫等【引,在某些疾病如线粒体脑肌病等,为首选药物 。另外,可提高癌症患者生存率,并发现能提高癌症患者体内含量,详细 机理尚在进一步研究中【。亦试用于原发性和继发性醛固酮增多症、颈部外伤后遗症、 脑血管障碍、出血性休克及肝炎等【确】。 ..辅酶。。在食品、保健品和化妆品上的应用 作为生化药物及保健品使用已经有多年历史。世纪年代中期,国外 市场出现了含有添加成分的保健食品,由于其使用的安全性,的用途逐渐 广泛,其产品类别也愈来愈多。如将用于牙膏配方中用于预防牙病和牙龈炎等作 用;人体补充改善肌肉营养状况,解除疲劳、提高运动能力的效果,因此部分功 能性饮料的生产中已经开始添加删。 国外已有公司开发了含有及多种复合维生素、矿物质的运动型饮料,研究显 示,采用功能性营养成分强化的运动型饮料能够更好地补充运动中损失的电解质、体液 和能量物质,延缓疲劳的产生,从而提高运动能力。其中添加抗氧化剂的运动型饮料通 过补充外源性抗氧化剂可减少运动时氧自由基的损伤。国外多家公司开发了添加 的营养强化型饮料,如 公司以三氯蔗糖作为甜味剂的系列产品中 的一款苏打饮料添加了营养素氨基酸、、维生素、矿物质和草本植物。法国的 公司,开发上市了一种新饮料,是一种有助于防止皮肤老化的 产品,添加有等成分【。 在西方国家还被广泛用于生产低脂减肥食品。在丹麦、挪威和荷兰等乳制 品出口大国,厂商将直接添加于乳酪、酸奶和牛奶等大宗乳制品里,以此增加产 品的抗肥胖作用。瑞士雀巢公司将%淀粉稳定剂加入到液体奶配方中,并作为 新型“能量饮料上市。法国梅森公司 在其婴儿配方奶粉中选 用膳食纤维,益生菌,等有益非营养素成分。瑞士营养食品公司年推 出一系列产品,使用淀粉粉末作为%纯度的载体,使正常的脂溶性配料在组成 液体饮料、奶制品或能量补充饮料的配方中保持稳定【】。 日本学者首次将运用到于化妆品,现有多种品牌化妆品含功能性成 分,有有抗皮肤皱纹和延缓皮肤衰老效果。有效浓度.~%。机理:促进皮肤 新陈代谢,促进面、手部上皮细胞呼吸链传递和产生;同时,抑制皮肤脂质过氧 化,对皮肤起滋养和活化作用,而且无皮肤刺激性和毒性【】。另外,有抗色素沉 着之功效,动物试验还表明,的抗色素沉着效果比氢醌霜更为显著,且无任 何不良反应。 .自由基与人类健康 ..自由基及其产生机制 自由基是人体组织中许多生化反应的中间代谢产物,指具有未配对价电子的原子、绪论 原子团、分子和离子等。正常情况下,体内自由基的产生和消除处于动态平衡中,但若 是体内自由基产生过多或消除过慢,自由基就会在分子水平、细胞水平以及器官水平产 生毒害作用,损伤细胞成分、破坏细胞的结构和功能,给机体造成损伤,这个过程称之 为氧化应激或氧胁迫 鲥。自由基的生成体系有许多种。以体内和体外来 划分,体外因素有紫外线、高能电离辐射如,射线、吸收臭氧等,体内主要源于生化 反应,包括线粒体的电子传递、微粒体细胞色素氧化、一些酶促反应包括 氧化酶途径、线粒体系统、黄嘌呤氧化酶系统、环加氧酶和脱氧合酶系统等及 吞噬细胞的呼吸爆发等删。 内源性自由基的主要来源包括前氧化酶系统脂氧合酶、药物及其代谢产物、污 染物及其他化学品和毒素。一些物质本身具有毒性,而有些物质产生自由基则是通过特 定的解毒代谢作用产生的。诸如阳光和不同形式的辐射等外部因素也可能促成内源性自 由基的产生,进而导致多种疾病。生物体在代谢过程中,主要通过三种途径产生自由 基:分子氧的单电子还原途径。正常情况下,体内%的氧经单电子 还原过程产 生过氧化氢、羟自由基、超氧阴离子和单线态氧等;酶促催化产生自由基。机体细 胞中的可溶性酶,如黄嘌呤酶、醛氧化酶、脂氧合酶等都可催化产生自由基;某些 生物物质的自氧化。如一些蛋白质、脂类、低分子化合物发生自氧化,以及过氧化物与 某些金属离子的氧化还原反应等均可产生自由基【椰】。 生物体内常见的自由基包括超氧阴离子?、羟自由基?、过氧化氢 、烷氧基?、烷过氧基?、氢过氧化物和单线态氧、等,统 称为活性氧族 ,;其他常见自由基多是以氮为中心的自由 基,如一氧化氮?、二氧化氮??和过氧亚硝酸阴离子删。 ..自由基的生物学意义 在生命过程中所产生的自由基,是行使生理功能及介导其生化反应所必需的。机体 在进化过程中形成对活性氧自由基的防御体系,使其生理过程中产生的有害自由基得以 清除,以保证生命活动正常地进行。体内能量代谢和新陈代谢是生命活动的基础,只要 新陈代谢在进行,就会伴随着自由基的产生。因此,自由基和自由基的反应遍及于生命 系统。如果说没有蛋白质就没有生命,那么没有自由基和自由基 反应生命亦会停止【。 自由基的产生、猝灭、利用和损伤作用是在生命活动中几乎同时进行的对立统一过程。 正常生理状态下,生物体内的酶、抗氧化剂以及修复系统构成了天然防御体系,恰好消 除了这些活性氧及其他自由基的毒害作用,使机体内自由基与其防御体系之间处于动态 平衡中。在此情况下,具有高活性的活性氧不仅不会损伤机体,而且还最大限度地直接 或间接发挥对机体的有益生物效应,如解毒功能、吞噬细胞杀菌作用、环核苷酸的合 成、植物的光合作用等削。 ..自由基对生物机体的损伤 生物体内自由基不断的通过非酶反应与酶反应产生,在正常生理情况下自由基可维东北林业大学硕士学位论文 持于有利无害的极低水平,维持生物体基本技能,通过抗氧化酶及外源性和内源性抗氧 化剂的协同作用下不断的被清除。在衰老、胁迫及某些病理情况下活性氧产生增多或清 除能力减弱,从而发生活性氧对机体的损伤。此时机体对损伤生物分子的修复或重新合 成的能力可能降低,而且即使修复,也可能出现差误,其后果必然 是自由基对机体的损 伤加剧【,稻】。 ...损伤生物脂质膜 生物膜是细胞的重要组分,具有特殊的功能,可以参与物质运输、信息传递、能量 转换、细胞识别。自由基对生物膜质膜、线粒体膜、高尔基体膜和内质网膜等的损 伤主要涉及组成成分中磷脂,磷脂含有大量的多不饱和脂肪酸。活性氧对不饱和共价键 具有一种特殊的亲和力,因此,在机体内,活性氧最容易攻击生物膜磷脂中的多不饱和 脂肪酸,从而引起膜脂质过氧化反应【】。 多不饱和脂肪酸的氧化会造成膜的迅速破坏,改变镶嵌与膜系统上的许多酶空间构 型,膜的孔隙扩大,通透性增加,出现退行性变化,从而使生物膜系统的液体镶嵌状态 发生改变,导致广泛性损害及病【。脂质过氧化产物使膜的坚固性破坏,溶酶体中的水 解酶有可能从膜内漏到膜外其它细胞中,造成进一步损伤。脂质过氧化产物丙二醛 ,可进一步与蛋白质的.和州基发生交联,从而使必须依 赖一和基来维持活性的酶和受体抑制。因此,的含量常作为评价 脂质过氧 化指标。 ...氧化性损伤蛋白质和酶 活性氧对蛋白质的主要作用是修饰氨基酸残基,引起结构和构象的改变,造成肽链 断裂、聚合、交联等损伤。蛋白质本身,或组成蛋白质的氨基酸都是活性氧攻击的靶分 子,电子顺磁共振分析证实,蛋白质中的甘氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸、修饰酪 氨酸和色氨酸能够形成稳定的和瞬时的氨基酸自由基。活性氧对蛋白质的伤害作用, 主要可以分为:使蛋白质的肽链断裂,一是肽链水解,另一是从.碳原子处直接 断裂;使蛋白质分子发生交联聚合而生成交性的高聚物,例如半胱氨酸的.基可 被氧化成二硫键..、酪氨酸可被氧化成二酪氨酸;使蛋白质结构上的氨基酸发生 氧化脱氨之类反应;攻击酶蛋白,使蛋白质的二级、三级和四级结构破坏,折叠减 少,无规律卷曲增加使其结构改变,而导致酶活力的丧失:由脂类氧化裂解所产生 的丙二醛,与蛋白质上的氨基产生分子间的交联而受到破坏,从 而使原有结构改变,功 能衰失哪】。在蛋白质氧化修饰中会有羰基的生成,如赖氨酸可在?作用下转变为含 有羰基的产物。测定羰基可以作为判断蛋白质受到活性氧损伤的指标。 ...损伤分子结构 多聚核苷酸也是活性氧和其他自由基攻击的靶分子。双螺旋外侧的嘌呤和嘧 啶对自由基最为敏感,被损伤后会导致碱基被修饰,氢键断裂,双链或单链也发生断 裂。当细胞受损时,轻者可引起细胞的生物学活性改变,重者造成基因突变、致 癌和细胞死亡。虽然修复系统可修复活性氧对的氧化性损伤,但修复过的绪论 突变率却远远大于正常的突变,有时也出现永久性破坏。结构研究表明,上 结合的金属离子如和与发生反应产生的?是造成链断裂 的主要原因。氧应激时细胞内增多,核苷酸因此会发生羟化反应,从而导致细胞凋 一 ...自由基与疾病 多年来,人们关于自由基与人体疾病的研究越来越多,也显示出 自由基与人体一些 重大疾病有一定的相关性,自由基与多种疾病有关,在神经退行性疾病、动脉粥样硬 化、糖尿病、冠心病、皮肤病、呼吸道疾病等疾病中,自由基都起着重要作用,尤其是 在癌症和心血管疾病等发病率日益增高的疾病中的作用,引起当今各国科学家的关注 【。自由基除了与上述几种疾病以外,还与其他系统的疾病有密切关系。如消化系统疾 病中的胃炎、消化性溃疡、胃癌、原发性肝癌、肠炎等;呼吸系统疾病中的上呼吸道感 染、支气管哮喘、呼吸衰竭、成人呼吸窘迫综合征、阻塞性肺气肿、慢性肺源性心脏 病、肺水肿等;泌尿系统疾病中的肾小球。肾炎、肾中毒性病变、急性肾功能衰竭,慢性 肾功能衰竭和肾移植后排异反应掣弼;血液系统疾病中的巨幼细胞贫血、再生障碍性贫 血、急性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等;神经系统疾病中的脑水肿、颅脑损伤、高 血压脑出血、脑梗塞等;代谢内分泌疾病中的糖尿病、肝豆状核变性、慢性淋巴细胞性 甲状腺炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等:与活性氧相关 的新生儿疾病有新生儿 窒息、新生儿缺血缺氧性脑病、新生儿肺炎、支气管肺发育不良等;妇产科疾病有流 产、胎膜早破、子宫内膜异位症、妊娠高血压综合征、子宫颈癌、子宫内膜癌等【?。此 外自由基还与眼科疾病、内风湿性关节炎、克山病及各种休克有关。 ...自由基与衰老 衰老是机体的一个正常而又复杂的生物学现象,涉及面很广。从不同侧面研究生命 衰老过程,形成了种种学说,如衰老的有害物质累积学说,内分泌功能减低学说,器官 功能减退学说,衰老的免疫学说,大分子交联学说与衰老的基因学说,微量元素学说以 及衰老的自由基学说与衰老线粒体学说。自由基学说是现代抗衰老学说中的较受重视的 . 一种【。 在年就提出了衰老的自由基学说【删,认为体内过量的自由基及其所诱 导的氧化反应长期使细胞受到损害,导致人体衰老和死亡。目前认为自由基引起衰老的 机制有:随着年龄的增长,人体就不能维持自由基产生和清除之间的动态平衡,使得人 体内有大量过剩的自由基积累。过多的自由基可引发细胞膜脂质氧化,脂质过氧化的产 物,也造成细胞内核酸变性及功能障碍,当这些损害物积累时机体就向老化发 展。褐脂素在人的手、脸部皮肤上沉积,形成“老年斑”,是衰老的基本特征,脂褐素 的形成涉及脂质过氧化,并与生成的脂质过氧化物.蛋白质共聚物以及促进蛋白质 等生物大分子交联有关【。 世纪年代和提出细胞分化导致线粒体自由基增加是衰老的最 初事件,衰老是细胞分化的代价,线粒体受到活性氧和自由基的攻击性氧化损伤,导致东北林业大学硕士学位论文’ 衰老的出现,因此提出了“衰老的氧自由基.线粒体损伤的二阶段学说【】。不管是衰 老的线粒体学说,还是衰老的自由基学说都可归结为:和自由基有关的线粒体损 伤和缺失以及线粒体内能量消耗的不断累积,又引起线粒体自由基的积累增加,导致线 粒体功能的缺失,由此导致机体的不断衰老过程【。 .自由基的防御和清除 生物体内除了极微量自由基被利用外,几乎所有的自由基都应及时被清除,否则自 由基会损伤生物大分子,引起细胞或组织损伤,从而产生更多自由基,加重损伤【】。在 长期进化过程中,生命有机体内必然会产生一些物质能清除这些自由基,称之为内源性 清除剂。随着人们年龄的增大及受到外源性刺激,机体内产生自由基清除剂的能力逐渐 下降,从而削弱了对自由基损害的防御能力,因此,必须向生命机体中引入一些外源性 的自由基清除剂从而达到抵抗疾病的目的,这就是外源性清除剂。 ..体内抗氧化防御系统 生物体内的抗氧化防御系统能有效清除各种内源性和外源性自由基,从而起到保护 机体用。它包括抗氧化酶和低分子量抗氧化物,能清除细胞内生成的活性自由基,构成 对自由基的防御体系。 ...自由基防御系统分类 内源性活性氧清除剂分酶类和非酶类,机体的各种抗氧化酶包括:超氧化物歧化酶 、谷胱甘肽过氧化物酶.、过氧化氢酶、谷胱甘肽转硫酶 、髓过氧化酶、胸腺过氧化物酶、细胞色素过氧化物酶和抗坏血酸过氧 化物酶等,除了抗氧化酶外,体内还存在一些非酶性的小分子抗氧化剂,这些抗氧化剂 包括:抗坏血酸、维生素、谷胱甘肽、辅酶、尿酸、胆红 素、退黑激素、硫辛酸,微量元素如、、、和等删。 ‘ ...超氧化物岐化酶 , 在体内以‘?为底物,催化?发生歧化反应生成。通过歧化反应消 除超氧阴离子自由基,阻止.?大量生成,是生物防护机制的中心酶。而可在 或作用下分解为和。属于金属酶,其性质不仅取决于蛋白质 部分,而且还取决于结合到活性部位的金属离子。按照结合的金属离子种类不同,主要 有.,.,.三种。 ...过氧化氢酶, 过氧化氢酶是一种可诱导酶,保护生物体抵抗活性氧的作用。它的主要作用是配合 的作用,催化分解为和,使得不致与在铁螯合作用下反应 生成?。在微体中,尿酸酶、氨基酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶、羧酸氧化酶的反应都 可产生,但可被过氧化氢酶及时清除。细胞内其它细胞器如线粒 体产生?都可 经过超氧化物歧化酶的催化转变为和,而可能进入微体内被过氧化氢酶 清除。绪论 ...谷胱甘肽过氧化物酶 , .是机体内已知的一种含硒的酶,与过氧化氢酶类一样都可清除生物体内产 生的和有机氢过氧化物,催化氧化其他底物后产生。?还可使还 原型的谷胱甘肽转变为氧化型的谷胱甘肽。 , ...还原型谷胱甘肽 属于一种低分子量的抗氧化物,是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽。 它的重要功能之一是通过巯基与体内的自由基结合,从而加速自由基的排泄,通过 其还原作用来对受损的组织细胞进行修复。由于和体内很多具有氧化还原性质的 化合物发生反应,因此它具有多种功能,对细胞有多种生化作用,有很强的亲和力,能 够与多种化学物质及其代谢物结合,能清除体内活性氧及其他自由基,具有保护肝细胞 膜、促进肝脏酶活性、抗氧化、解毒等作用,显示出在机体调节 过程中的重要地 位。 ..外源性清除剂 ’外源性清除剂包括人工合成抗氧化剂和天然抗氧化剂。主要使用的人工合成抗氧化 剂有丁基羟基茴香醚、.二叔丁基对甲酚、特丁基对苯二酚 和没食子酸丙酯,合成抗氧化剂具有诸多副作用,如对人体的肝、 脾、肺均有不利影响,其使用的安全问题成为人们关注的焦点【。天然植物是一种很有 潜力的天然抗氧化剂资源,目前研究较多的天然植物的抗氧化活性成分主要有酚类有 机酸、黄酮、鞣质、皂甙类、生物碱、香豆素及萜类吲。 ..外源性抗氧化剂作用机理 抗氧化剂在体内的抗氧化作用基本上是通过下列途径来实现: 直接清除自由基以阻断自由基反应链。在各种由物理或化学因素引发的自由基链 式反应中,抗氧化剂可通过直接清除自由基来阻断自由基链的传递过程,从而终止自由 基链的扩增。这一类的天然产物有黄酮、多酚类、单宁、木脂素、维生素和一胡萝 ‘ 卜素等类化合物唧; 作用于与自由基有关的酶。天然抗氧化剂在体内的抗氧化作用可经这一途径实 现,如大多数黄酮醇能抑制黄嘌呤氧化酶、细胞色素的活性,多酚类能提高谷胱 甘肽过氧化物酶的活性【剐; 与诱导氧化的过渡金属离子络合。许多氧化过程都是在金属离子的参与下进行 的,抗氧化剂通过钝化金属离子抑制其催化的氧化作用,终止高活性羟自由基和烷氧自 由基的产生而达到抗氧化的目的。这类物质如去铁敏、、黄酮类、芦丁、磷脂、 肽、柠檬酸和植酸等;一般这些螯合剂单独使用效果不佳,但与其它抗氧化剂共同使用 时有加合作用明; “再生高效抗氧剂。抗氧化剂除了直接作用于氧化过程外,还可以与其它高效抗氧 化剂交换电子,再生高效抗氧化剂,使其维持一定水平,如维生素、鸡油菌黄质、一东北林业大学硕士学位论文 羟色胺、.羟吲哚、多巴胺等阿; 协同作用。由于各抗氧化剂在抗氧化的不同方面发挥作用。若将这些具有不同抗 氧化性能的物质混合在一起,抗氧化的整体效果则大大增强,即 协同增效作用,如有报 道与有协同作用【。 . 临致皮肤老化机制概述 ..皮肤光老化 近年来,大气污染,臭氧层破坏,紫外辐射成为皮肤受损的主要原因。皮肤长期受 日光照射后可以引起光老化,皮肤光老化临床上表现为皮肤粗糙变薄,松弛下垂,皮纹 加深及各种反应能力减弱,导致皮肤细胞和组织损伤和修复能力下降或皮肤功能永久性 丧失,严重时可导致皮肤良性或恶性肿瘤【】。紫外线根据其生物效应的不同可分为三种 波段:短波紫外线~,可被大气层过滤掉不对人体造成伤害:中波紫外 线.,主要由表皮吸收,损伤表皮;长波紫外线,可 到达真皮上部作用于血管和其它组织,仅对具有光敏感的个体发生作用。日光对正常人 的皮肤所产生红斑的光谱波长是中波紫外线。大量的流行病学资料表明,是 与皮肤光老化发生最为密切相关的【。 . . . ..皮肤光老化的机制 紫外线引起皮肤老化不仅累及表皮也损伤真皮。经长期紫外线照射可以引起皮肤表 皮增厚或萎缩,表皮角化不良,极性改变。真皮胶原纤维减少,弹性纤维异常沉积。紫 外线引起皮肤老化的分子生物学机制非常复杂,主要有以下几种: 紫外线照射可诱导皮肤中的细胞如表皮中的角质形成细胞、郎格罕细胞、黑素 细胞,真皮中的成纤维细胞及内皮细胞等产生各种因子,如.、.、、、 等,这些细胞因子会抑制角质形成细胞增殖,降低表皮对外界刺激的反应性【.硼; 紫外线照射诱导产生的因子可促进或抑制真皮基质中基质金属酶的合成及活 性,引起胶原网破坏及异常弹性物质的堆积【】; 氧化应激产生大量的氧自由基,后者引起细胞凋亡。 . 目前较为公认的是第三种损伤机制。皮肤受到紫外线辐射后,造成氧化应激,产生 高度反应的,破坏皮肤的抗氧化系统,其中最常见的有超氧阴离子?、 羟基?、单线氧态’、过氧化氢。这些通过氧化和交联作用,使细 胞、蛋白质、脂类及辅酶受损,造成复制错误,细胞膜受损及细胞酶类破坏 【。因此,当皮肤中氧自由基流量超过抗氧化剂的再生时则损伤细胞,出现细胞凋亡, 造成皮肤老化。 ..抗氧化剂在预防和治疗皮肤光老化中的作用 皮肤中自身存在有强大的抗氧化系统,主要包括抗氧化酶和低分子抗氧化剂。前者 包括过过氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等;绪论 后者主要为维生素、维生素、等。因为紫外辐射造成这些物质减少,因而给 皮肤补充外源性抗氧化剂,以对抗氧自由基的损伤,可以减轻和延缓光老化的发生。在 抗氧化剂的研究中,维生素和维生素研究的较多,且在实验室研究和临床应用上 都取得了较好的效果。而同样作为皮肤天然抗氧化剂的,一直以来被作为营养心 肌及改善心肌代谢的药物被广泛用于心脑血管科,而对于其在美容护肤,防止皮肤光老 化的应用方面却研究较少。有文献】报道,与维生素在抗氧化作用方面有协同 作用。因此,如能给机体补充,可能将有助于延缓皮肤光老化的发生。 .纳米药物 ..纳米药物概述 纳米技术是世纪年代末期刚刚诞生并正在崛起的新科技,其在生物领域的渗 透形成了纳米生物技术,而纳米药物的研究是纳米生物技术的重点和热点。在药剂学中 纳米粒的尺寸界定在~纳米之间。药剂学中的纳米药物基本可以分为两类:纳米 晶体药物和纳米载药系统。纳米晶体药物是指通过纳米粉体技术直接将原料药物加工成 纳米级别即纳米粉,这实际上是微粉化技术、超细粉技术的再发展。而纳米载药系统 是指通过某些物理化学方法间接制得的药物一聚合物载体系统即纳米粒,如纳米脂质 体、聚合物纳米囊、纳米球等【硼。 纳米材料具有一些有别于宏观材料的新的理化特性,如硬度高、可塑性强、高导电 率和扩散性等等。由于其性质的奇特性和优越性,赋予了纳米药物新的优点:改变药物 的释放和分布过程,实现药物可控性、缓释性和靶向性;改变难溶 性药物吸收过程,提 高药物的生物利用度以及体内的稳定性、降低用药量增强药效、减少药物毒副作用等 。目前研究中的纳米载药系统有很多种体系,包括纳米颗粒,聚合物一 药物结合体 ,纳米乳液,脂质体,纳 米粒混悬液,圆体脂质纳米粒 ,,以及纳 米结构脂质载体 ,. ..纳米混悬液 ...纳米混悬液特性 纳米混悬液是利用表面活性剂的稳定作用,将药物颗粒分散在水 中,通过粉碎或者控制析晶技术形成稳定的纳米胶态分散体。纳米混悬液具有多种优 点:增加了药物的溶出速率:增加了药物的饱和溶解度;纳米混悬液的药物粒子对体内 的黏膜组织具有黏附性,延长了药物在体内的滞留时间,提高了药物的生物利用度;可 改变药物的晶型,增加药物中无定型态晶型的比例或完全转换成无定型态,提高药物的 溶解度;可通过对药物粒子的表面修饰,达到定位释放给药的目的;增加了物理稳定 性;可通过冷冻干燥或者喷雾干燥等后处理工艺进行固化,根据 不同给药途径进一步制 备成多种剂型,如片剂、丸剂、胶囊、栓剂、凝胶剂及气雾剂;适用范围广,尤其适用东北林业大学硕士学位论文 于多种难溶性药物,且可实现工业化大生产【】。 ...纳米混悬液制备方法 目前国内外制各纳米混悬液的方法按照粒子形成方式的不同可分为两个大类: .法和.法。?即自下而上,也就是从药物的分子水平组建纳 米粒子的方法,主要包括:乳化法/微乳法、超临界流体法、溶剂注入法等。? 即自上而下,也就是将粒径较大的粒子通过机械力的作用破坏成为纳米级的粒子的方 法,主要包括:高压匀质法和介质研磨法。 超临界流体法是通过超临界流体的临界特性,与药物相互作用,控制药物析晶过 程,来实现药物从分子水平重新组建,目前,主要分为超临界流体快速膨胀技术,辽和超临界流体抗溶剂结晶技术 . ‘删。 高压匀质法是先将药物微粉化制成混悬液,然后在高压匀质机高压泵的作用下强行 高速通过匀化阀的狭缝,制得纳米混悬液,可一步完成,适于放大 生产。本法适用于既 难溶于水也难溶于油的药物,可避免有机溶剂的加入,而且工艺的重现性较好【。 由于超临界流体法避免了有机溶剂污染问题,因此,现已与高压均质法共同成为纳 米混悬液制备的两种主要方法。 . . .辅酶。。制剂研究现状 国内药品主要存在形式有片剂、胶囊和注射剂。为脂溶性化合 物,其片剂和胶囊剂都存在人体吸收利用率差的问题。片剂制备储藏不当会逐渐变质, 以至影响在胃肠道的崩解;由于压制颗粒的表面积减少,使药物释放速度减慢的缺点。 其胶囊剂的囊材主要是明胶,具有脆性和可溶性,囊壁可能发生脆裂,不能到达有效部 位。其注射剂存在储运不方便,水性制剂易霉变,在放置过程中易产生沉淀、变色等, 从而导致澄明度不合格,对包装材料要求高,.本身化学性质不稳定,.更容易引起 的药物失效等问题。 近年来国外对开展了各种技术研究,把速释技术、固体分散体技术、环糊精 包合技术、乳化技术、自微乳化技术及脂质体技术充分应用于新剂型的研制工艺墨 中。所有新技术都是通过改变物理性质的途径,希望提高辅酶的生物利用度、增强其稳 定性和丰富其使用途径。体外释放度研究或动物模型的药代动力学研究显示,固体分散 体技术、环糊精包合技术、乳化技术、自微乳化技术及脂质体技术均能不同程度地提高 的生物利用度。由于在药品、保健食品、化妆品等领城应用的日益广泛, 简单有效的使用途径也是研究者考虑的重要因素。 .辅酶.纳米混悬液制剂优势 辅酶的理化性质、作用靶点药效特征决定其应采用纳米混悬液,具有下列优 势:绪论 辅酶属于脂溶性药物?.制成纳米混悬液可以增加药物的溶解度;‘ 以纳米混悬液口服方式给药可以提高的生物利用度,加快药物在体内 分布过程; 受光易分解,制成纳米混悬液后被表面活性剂包裹于水相中,可以折射 消除一部分光线对药物的分解作用,相对增加了的稳定性; 可使实现缓释,延长药效,较少用药量; 采用纳米混悬液可以增加药物对淋巴系统定向性、靶组织的滞留性、对组织 和细胞膜的渗透性,使药物在靶组织中维持较高的浓度,提高药物在靶组织疗效,同时 减少了药物在其他组织引起的副作用。 是副作用小、治疗作用及辅助治疗作用广泛的药物,以其显著的保健和医疗 功效得到世人的青睐,纳米混悬液可以解决溶解性、稳定性以及生物利用度,必定为 的开发应用提供广阔的前景。 .选题依据与研究内容 ..选题依据与意义 辅酶以其显著的保健和医疗功效得到世人的青睐。但的推广与应用迫 切需要解决以下三个主要问题:溶解性、稳定性以及生物利用度。首先,不溶于 水中,这一特性也极大的限制了它广泛应用;其次,分子结构中含有不饱和双 键,易受空气中的氧、光线氧化和分解,导致产品中含量降低;第三,由于 价格高昂,但其为水不溶性化合物,很难分散,机体内细胞吸收困难,故要尽量 提高其在体内的生物利用度。 针对上述这些问题,选择纳米混悬液为载体,解决生物利用度,达到有效治 疗的血药浓度,为临床运用创造更广阔的空间;能够提高药物水溶性,为其在食品和化 妆品领域解决了瓶颈。其在食品方面的应用可填补国内食品市场上的空白,具有很大的。 社会效益、经济效益和广阔应用前景。 稳定性有所增强,便于运输和长期贮存,并 采用冷冻干燥方法研制纳米粉, 可为高温灭菌提供了一条行之有效的途径, 易于巍工业化生产。因此,纳米混 悬液的研制是一个具有重要意义的课题。 、,. ..研究内容 本课题将纳米混悬液作为口服制剂,应用于临床提高机体的抗氧化能力。研 究纳米混悬液新剂型的表征、稳定性以及其质量控制,进行了药代动力学方面的研究, 并就其对小鼠的抗氧化作用进行了探讨。同时,纳米混悬液通过 喷雾剂方式,运用到皮 肤护理方面,研究了其对所致小鼠光老化的影响。不但从质量控制方面研究了纳 米混悬液的特性,还从药代动力学和药效学上评价了纳米混悬液。旨在为 实现工业化生产和广泛利用提供可能。东北林业大学硕士学位论文本论文的主要研究内容包括: 通过微观形貌观察、晶型结构、溶解度、稳定性等方面考察纳米混悬 液特性,为其生产质量控制提供理论依据; 通过大鼠体内的药代动力学,考察纳米混悬液在体内的吸收和代谢, 与原药进行了生物利用度上的比较研究: 通过小鼠体内的抗氧化实验,考察纳米混悬液的药效学特性,同时通 过小鼠的肝脏和肾脏超微结构,评价其器官损伤特性; 通过体外皮肤渗透试验,考察纳米混悬液的透皮能力,以及其喷雾剂 对所致皮肤光老化的影响。纳米辅酶质量评价和稳定性研究 纳米辅酶。。质量评价和稳定性研究 粒径、电位、晶体形态、溶解度及溶出度、稳定性等指标,是纳米悬浮液表征研究 中最为重要的方面,本部分进行了纳米混悬液质量研究和稳定性 研究,为 质量标准制定、产品包装选择和贮存条件控制打下了基础。 .材料与仪器 ..材料 本实验室纳米课题组提供 纳米混悬液 本实验室纳米课题组提供 纳米混悬液冻干粉 , 陕西森弗生物技术有限公司 纯度.% 原药 标准品 纯度.% 美国公司 磷钨酸 分析纯 北京化工制品厂 分析纯 天津市东丽区天大化学试剂厂 无水硫酸钠 甲醇’‘ 色谱纯 北京百灵威化学技术有限公司 乙醇 色谱纯 北京百灵威化学技术有限公司 ..仪器 意大利 公司 型高压匀质机 威宇机电设备有限公司 高剪切混和乳化机 美国公司 冷冻干燥机 型光学显微镜 日本册,公司 激光粒度仪 英国马尔文公司 型原子力显微镜 美国 公司 .差示扫描量热仪 美国公司 /眦粉末射线衍射仪 日本公司 赛默飞世尔公司 傅立叶红外光谱仪 天津天大天发公司 .智能药物溶出仪 台湾路昌公司 照度计 日本公司 高效液相色谱仪 . 瑞典?汜公司 ,四 .实验方法 ..辅酶。。纳米混悬液液的制备概述 的溶 利用超临界快速膨胀法制备超微粉体,操作条件为选择东北林业大学硕士学位论文 解压力,喷嘴直径可在~岬范围内,温度在?范围内。把制备好的 ,转速为 ,分散在蒸馏水中,高剪切预分散 。加入高压匀质机中, 压力下匀质次, 压力下匀质次,即得纳米混悬液。 取 纳米混悬液的样品,加入冻干保护剂,混合均匀后,放入?超 低温冰箱中冷冻 ,充分冰冻后转入冷冻干燥机中干燥 ,温度为?,压力为 ×~,得到纳米悬浮液的冻干粉。本工艺和供试品均由本实验室纳米课 题组提供。 ..形貌和粒径观察 使用公司生产的 氮 扫描头及 /。 模式下成像,像素密度为,扫描速率为. 化硅探针在 探针力常数为 /,共振频率为 。操作条件是室温、气相。除了取平 的命令用于消除背景的倾斜,本文中的图片均为原始的数据。图 像由仪器自带 ..和..商用软件进行分析,检测方法准确,精密。 光学显微镜采用生产的型光学显微镜观测,.放大范围×? ×倍。 ..纳米混悬液粒径分布及电位的测量 取纳米混悬液适当稀释,于激光粒度仪上测量纳米粒粒径、多分 散系数及 电位。测量条件:兰?,入 ,激光为光源,入身虫角为。 .. 傅里叶变换红外光谱测定 型红外傅立叶红外光谱仪, 红外吸收测试采用赛默飞世尔公司生产的 。 压片法制样,扫描波长范围. .. 射线衍射测定 分别对原药和冻干的混悬液进行射线分析。工作条件为靶,管压 ,管流 。扫描速度/,扫描范围.。 ‘ ..差示扫描量热法测定 石英坩埚为样品池;参比物为;升温速率:/升温范围:.一 ?:气氛:,分别对原药和冻干的混悬液进行分析。 ..纳米混悬液中辅酶。。含量的测定 ..色谱条件 色谱柱为 . , .,流动相为乙醇.甲醇 /,检测波长 :,/,流速为 ,柱温,进样量皿。 ...标准曲线的绘制 容量瓶中,用色谱乙醇定容至刻度,溶解 精密称取标准品 ,置纳米辅酶质量评价和稳定性研究 摇匀,得浓度扯:/ 贮备液,置冰箱中保存,临用时稀释至所需浓 度。 容量瓶中,用乙醇稀释至刻度,配制 分别准确吸取适量肛/贮备液置 成.、.、、、、肛/的标准溶液。在上述色谱条件下,分别进样?, 记录峰面积,利用峰面积对溶液浓度作线性回归,求得回归方程 和计算线性范围。 于 容量瓶中,然后加入纳米混悬液处方比例 取己知浓度的溶液 的表面活性剂,用蒸馏水定容,计算回收率。取高低浓度的标准品 溶液分别连续 进样次,计算日内精密度,同一样品每天测一次,连续测定天,计算日间精密度。 ...供试品测定 乙醇溶解残留物,以 取纳米混悬液供试品溶液,于?下吹干, . 微孔滤膜过滤,测定。 ..冻千辅酶。纳米粉的溶解度测定 将过量的原药及纳米混悬液千粉分别加入双蒸水中,?连续搅拌 。达到溶解平衡以后,迅速取各饱和溶液,以.岬微孔滤膜过滤,滤液于 ?下吹干, 乙醇溶解残留物,测定。 ..冻干辅酶。纳米粉堆密度测定 制作一柱状容器,上端开口,称重。通过已知密度液体水测定其体积,配置漏 洞,‘将底部长颈去除,用铁架台将其固定柱状容器上方,通过漏斗,匀速加入粉体使其 自然下落,每次加量都达到漏斗下沿以固定高度,后用直尺去掉柱状容器高出部分粉 体,称重,重复次测试以增加准确。 以单位体积的质量来表示样品的堆密度 ? 式中:?容器与样品的总质量;厂空容器的质量;容器的体积。 .辅酶。纳米粉体外溶出度的测定 用.%十二烷基硫酸钠溶液做溶出介质,转速为 /,温度为?.?。 精密称取原料药和制备纳米粉末相当于含 ,.均匀撒在介质液面 上,当药物粉末接触液面时开始计时,分别于,,,,,, ,取棒 ,同时补加等量介质,所取样品经. 滤膜过滤,吸取滤液 进样,按 “..项的色谱条件测定,计算出溶出介质中的含量。 .. 辅酶。纳米混悬液光稳定性测定 取一份纳米混悬液,用乙醇溶解的溶液作为原药对照组,置于 光照,于、、、、、、、、、、 ,取样,按“..项”的色 谱条件测定。用光稳定系数来表示药物光稳定性。 % 光稳定系数样品浓度/初始浓度东北林业大学硕士学位论文 ..辅酶。。纳米混悬液的物理稳定性测定 采用室温留样考察法,纳米混悬液,密封,室温放置,定期取样观 察,并测 定药物纳米粒粒径及多分散系数。 .结果与讨论 ..辅酶。。纳米粒的粒径和形貌观察 由图可知,纳米粒为规则的球形或近球形颗粒,粒径在士左右,有 较高的均一稳定性,而且分散性好,体系未出现明显的团聚现象, 体系中未见原药之针 状结晶存在;原药的光镜图,如图,其颗粒较大,在~ 。 图 原药光镜图×纳米辅酶质量评价和稳定性研究 啪 湖 啪锄 锄 湖 栅 湖 伽 咖 湖,. 踟,.姗咖 锄;咖?一湖:.型『量『.《季 娜一、抛一。鹾枷一勰伽。。季一 , 萏 ????????露吾:、卜 图.纳米混悬液原子力显微镜扫描图 ..辅酶纳米混悬液粒径分布和电位测定 激光粒度仪测得纳米混悬液粒径分布图,如图,可得其平均粒径 为 。 ,多分散系数为.,电位一. 匝 .’ ; ? ? 奢 ?? 筠 / ?叫广~ . . 图辅酶混悬液粒径分布图 分析 ..纳米辅酶 将原药辅酶与纳米化处理的进行红外光谱检测,得到其红外对比 谱’ 东北林业大学硕士学位论文 图,如图.,从红外谱图可知,谱图形貌没有变化,得出其化学结构 基本没有变化。 图?辅酶纳米冻干粉光谱图 经纳米化处理,红外谱图基本没有变化,说明的官能团结构基本没有 改变,其化学性质也就没有变化。但可以看出,纳米化红外谱图在波长 的位置出现了一个宽的吸收峰,判定其为分子间氢键伸缩振动产生的吸收峰,产 生原因应该为纳米化后,粉体粒径变小,导致分子间范德华力增加,氢键作用力明显。 分析 ..纳米辅酶 .分析检测纳米混悬液冻干粉晶型变化,谱图和峰强度,如图? 、图.和表.。纳米辅酶质量评价和稳定性研究 ?\州??昌 舢舢舢姗舢姗舢姗 /。 图原药辅酶凹分析图 藿姗咖姗 ?山\州? 黼湖咖 姗 /。 图辅酶纳米粉分析图 从图.和图可知,纳米混悬液冻干粉和原药特征峰衍射角基本