胰高糖素样肽1长期作用对RINm细胞胰岛素分泌功能的影响

胰高糖素样肽1长期作用对RINm细胞胰岛素分泌功能的影响 生竺直坌塑盐盟盘查～～堕至～且釜丝蓥筮～捆垡垫』量塑～鲤～些丛～～些。蜘～～垡～壁,垒;型丝:盟～:～ ?基础研究? 胰高糖素样肽,长期作用对,，,—,细胞胰岛素分泌功能 的影响 王川严励杨川傅祖植程桦 【提要】胰高血糖素样肽,(,,,,,)在高糖培养时可以延缓,,,,细胞随体外培养时间延长而出现 的胰岛素和胰十二指肠同源盒基因转录因子,(,,,—,),,,,水平的下降，且其作用具有葡萄糖依赖性。 由此推测,，且,可能通过,,,,,延缓,,—,细胞胰岛索分泌功能的下降。 【关键词】 ,，,,,细胞;胰高糖素样肽,;胰十二指肠同源盒基因转录因子, ,,,,呲, ,, ,,,,,窖耐，眦,,,廿佃州也,,;,窖,,,肛,, ,,,,,,,?, ,, ,玎,,,,, ,睇,,仙,, ,，,,, ;,,, 删?,西?,，,,】,“。珊,】,,吼啪，,,缸删(,腼?,肌口(,触,,删盯,砌’耐肿脚,，,,,,,?以 ,坤缸,，蒯讧把,幻,叽，缸,一,, ,，衙哪珊竹(‰聊咖, ,,,,,, (,，,,,,，础,曙?“出口,:,疆?厶，助?越:俐,,,,(删 【,,衄峨,,】 ,,。,,曲,,—,(,,,,,),,,,,,, ,,。,,,;,,。,— ,,,,,,画,, ,,,,;,,, ,, ,,乩,,, ,,,,,,,话明, ,,;陀,,,, ,, ,，,(, ;,,, ,,;,,,刚,,,, ,,曲审,;,,, ;,,;,,扛,,,,?,, ,—,咄一,印,础,,血皿,, ,,(,(, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,;,自,, ,,,, ,,,弛,山,,,, ,, ,,,(,唧,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,叩( 【,町肿,,,】 ,，,,, ;,?,;,,;,,,,,,,, ,,曲,,一,;,,,,, (,,加,凸幽;,洳,胁帆,，,,,,，,,:,,,,,) 胰岛细胞移植重建内源性胰岛素分泌系统，有望治愈糖尿 (,)观测指标和方法:?光镜下观察,,,,细胞在培养过程中 病。但其至今尚未大规模地应用于临床，一个重要的原因是可 的形态变化。?每次换液前留取并冻存旧的培养液，实验结束 供移植的胰岛细胞匮乏，体外扩增为获得足够的胰岛细胞提供 时统一解冻，用放射免疫分析法(,，,)测定，计算出每,,,个 了一种可能，但在体外扩增的过程中，随时间的延长，细胞合成 ,,—,细胞培养液中胰岛素的水平。?,,,,;,半定量测定 和分泌胰岛素的能力都会逐渐下降…。如何维持体外扩增的 ,,,—, ,,,,的水平。胰岛细胞的功能，成为近年来糖尿病研究领域的热点之一。胰 体外培养的第,、,、,、,周用,,,肋,提取细胞总,,,后，高糖素样肽,(,凹,,)是一种生理性肽类肠道激素，短期内可 用,,(,;,检测,,,,,及内参照,,,;,,的,,,,达。,,,,明显促进胰岛细胞胰十二指肠同源盒基因转录因子,(,,,(】) ,引物:上游引物,’一,;,,;,?;;;,,,;,从;,,,;;,,’(下游引 的表达，使其合成和分秘更多的胰岛索”引。本研究试图用 物,，,从,,,,,,;;,,;,;,,;;,,;,;;,,’，扩增片段长度为,,,,,长期作用于体外培养的,,,—,细胞，观察,,,一,对,,,— ,“,,。,—,;,,引物:上游引物,’,;,?唧,咖,;,,,细胞胰岛素分泌功能的影响。 ;,;,,,;(, ,，下游引物,’,,代;,,,,;;,;,;,,,,;,;;? 一、和方法 , ,，扩增片段长度为,,, ,,。,,,一,和,,,;血第一链;,,,及 ,(材料:(,)细胞:,,—,细胞(,,;;)来源于射线诱导的 ,;,反应条件均按,,,,,,公司试剂盒的使用说明进行操作。大鼠胰岛细胞瘤，主要分泌胰岛素及极少量生长抑索。(,)试 反应总体积为,, ,,。,;,反应条件:,,?预变性, ,,,，,,?剂:,凹一,(,,刖,)、无糖型,,,,,,,,培养液(,,舯,)，大鼠特 变性,, ,，,,?退火,, ,，,,?延伸,, ,，共,,个循环，,,?终异性胰岛素测定试剂盒(,,;,)，,,,抽提液聊础(,,,;, 末延伸,, ,,,。,,(,;,产物行,,琼脂糖凝胶电泳观察、扫描,,,)，耵,,;,试剂盒(,,,眦,,)。 及半定量分析。 ,(方法:(,)细胞培养与分组:,,,—,细胞在,,,,,,,,培 ,(统计学处理:数据以,?,表示，用,,,,,,(,软件处理。养液中按常规培养，以约, ,,,,个,，，,,接种，每,天换液一次， ,组问均数的比较采用两独立样本的，检验，,组间比较采用单体外培养,周。实验分为,个组:?正糖组:培养液中含 因素方差分析。,(,,,出,的葡萄糖;?正糖，,,,一,组:培养液中含,(, 二、结果,,彤,的葡萄糖和,,如,,,,的,,, ,细胞呈多边不形，一,;?高糖组:细胞培养 ,(细胞大体形态:,，,— 边界清楚，液中含,,衄,,,的葡萄糖;?高糖，,”一,组:培养液中含 胞内含有分泌颗粒。整个培养过程中，,,,,细胞太体形态无,, ,,,,,,的葡萄糖和,, ,,彬,的;凹一,。每组各,个样本。 明显变化。 ,(胰岛素水平及,,,一, ,,,,的检测(表,、,):(,),组 作者单位:,,叭,,广州(中山大学附属第二医院内分泌科 ,，,,,细胞培养液中胰岛素的水平和,,,一, ,,,,的相对水 通讯作者:严励(,?,,:,,,,,,,,,,(，,;, 平都随培养时间延长而逐渐下降，二者下降趋势基本一致，其 万 方数据 生生直佥些垡进壁查～咝至～旦苤丝鲞筮～塑生～也』竺型～型型坠～堂:堂型坚～塑～:～～～丝，塑～:～ 表,不同培养时间培养液中胰岛素的水平变化,,‖,,, ;,,,,(;?,) 注:与正糖组比较，’,,,(,,;与正糖，,，,,组比较，。,,,(,,;与高糖组比较(,,,,(,, 表,不同培养时间各组胰十二指肠同源盒基因转录因子,(,,,—,),,,,的相对水平(,?。) 注:以正糖组第,周,,,,, ,聃,的相对量为标准取其值为,(其他各组内、组问的值与其相比;与正糖组比较，’,,, ,,;与正糖，,,,,,组比较(‘,(,(,,;与高糖组比较。,,(,(,,中商糖组下降幅度最大，高糖，,,,,,组最小。(,)各时间点， 物，共同促进胰岛素的合成和分泌”】。高糖，,，,,,组的胰岛素水平和,,,,, ,,,,的相对水平均 本研究初步观察到在葡萄糖的协同作用下,,艮,可能通高于正糖、正糖，,,,一,组和高糖组(均,,,(,,)。(,)正糖 过,,,一,对体外扩增的,,—,细胞功能的维持起一定的作组与正糖，,，,,组之间，各时间点胰岛索水平和,,,,, 用，但这种经,,,,,干预的,，,,,细胞植入体内是否有效，尚,,,,的相对水平差异均无统计学意义(均,,,(,,)。而各 须进一步的动物实验证曳，时间点(除第,周外)，高糖，;,,一,组胰岛素水平和,,,—, 参考文献,,,,的相对水平均高于高糖组(均,,,(,,)。 三、讨论 , ,,,,,,, ,,(址,,山,,,, ,，,,,】,,, ,，, ,(,,咖,,,, ,,,如呲,?,, ,,,,,是一种生理性肽类肠道激素，主要由回肠末端、结 ,,,一, ,,,, ,,,甜矗帅,,,咖,,,,口(,,,,,,,(,,, ,(,,:,,,,,,叭,(肠和直肠中的神经内分泌细胞,细胞分泌。,伸一,与胰岛, , ,,,，, ,，,圳, ,,，,,“叩,,，武,(,,,;唧出,, ,印削,,,细胞上特异性的受体结合后(具有刺激胰岛素分泌，提高,细 ,,,,,鹏,,, ,,, ;,,, ,娜,商,,,,,‰,，,,,一,，,, ,,枷,,唧。曲( ,,,,盯,,,,盯，,,,,，,,,:,,,,(,,,,(胞对葡萄糖的敏感性，刺激,细胞中胰岛素基因的转录和翻译 ,杨川，程桦，王川，等(胰高血糖素样肽,诱导小鼠胚胎干细胞,,,等作用。矾，，(,等”,研究发现,邛,,短时问内(,,, ,)可明显提高胰岛细胞株砌,,,,,(,,的,,,,, ,,,,的水平，从而促 分化为胰岛素表达细胞(中华内分撼代谢杂志(,?,(,,:,酩捌( ,巩秋红，娄晋宁，叶丽亚，等(重组人胰高血糖索样肽,(,,,,)促进进胰岛素的合成和分泌。 ，,,一,细胞胰岛素释放与合成(中华内分泌代谢杂志，,?,。,,,,,,— 体外扩增,,,,细胞往往需要数天到数周的时间，在这个 ,,,(相对较长的过程中,,,,,对,,， ,，,,胛,,,, ,，,,?一,椰口,，,(,细胞的功能是否有影响呢, , ,丑,(,出,,;,, ,曲,髑,明口,耐; ,,”,本研究发现，体外长期培养,，,一?，高糖，,膻一,组胰岛紊和 ,;“, ,珥?髑,,,, ,“,，;,,肌, ;;?,,,,驴,,‰,“,,，,?, ,,锄，,,,一, ,,,,的水平下降幅度明显低于其他各组，且胰岛素和 ,,,,(,,,:,,,,,,,,,,,,,,一,?,,,的水平变化趋势一致，而正糖，,仰一,组却没有 , ,虮, ,，,,，哪,(,,,,, ,,(,, ,(,,;,,,,,(,,,。,州,,,,伽,辎观察到此现象。提示;凹一,有延缓长期培养的,,,—,细胞胰 ,帅;嘲,,; ,,,,,,, ,,,,,,帆,, ,,啊, ,,龇毗,,, ,,, ,,, ;卿，驰,岛素分泌减少的作用，而此作用可能是,,,—,通过调节,,,一, 协,,, ,,;,,,, ,, ,明口,“; ,,,,一,,,,, ,, , ？,,; ,,,,啪,,,的水平而延缓,,(,细胞功能的下降，且;,,(,的这种作用可 ,,,,,,,,,,,‖,,,,, ,,四,,,印,,,,,, ,?,粕,,, ,,,,;，,,,,,,( ,,,,(,,,:,,,,,,,,,(能是葡萄糖依赖性的。 ,,,,,作为,细胞内一种重要的核因子，不仅在胚胎胰腺 , ,,,把跚,，,,,,,, ,，,,,涮,(,,,;,,吼拙。,印,,,一, ,咖。恼,,, ,,,,,船,,( 枷,砒嗍,,呻,,“,—,,,,,协, ,,,;,啪,,, ,,口舶懒的发育过程中起着重要的作用，而且对维持成熟胰岛,细胞的功能也至关重要”,。 蛔,,;咖,,,?‰,,, ,四,;佃, ,,,,,,, ,,?啪,吒,朋; ,(,,,?，) ,,, ,,,,“, ,,,嘶,, ,,恤(，,,一,)一;,,, ,,,,吐,晒,，,,,,(,,: ;,,一,可能通过促进,,,—, ,,,,的转录和翻译，加速 ,,,,,“,,,一,的磷酸化使其从胞浆转位到胞核”‘;增强,,,一,与胰岛 (收稿日期:,,,,,,,—,,)素、葡萄糖激酶(,,)、葡萄糖转运蛋白,基因结合的能力，同时招募更多的核蛋白如,钉,,阴,、,,,,,,,,,,,,形成复合 万 方数据