HPLC测定辣椒风湿贴中辣椒碱的含量

HPLC测定辣椒风湿贴中辣椒碱的含量 HPLC测定辣椒风湿贴中辣椒碱的含量 华 W 西 C 药 J 学 ~ 杂 P 志 S2007,22(1):106,1O7 HPLC测定辣椒风湿贴中辣椒碱的含量 段思怡,黄毅岚,张丹 (四川大学华西药学院,四川成都610041) 摘要:目的建立测定辣椒风湿贴中辣椒碱含量的方法.方法采用HPLC法,LunaC色谱柱(250mm×4.6mm,10m), 甲醇一水(65:35)为流动相,检测波长281nm.结果在6.04,241.60g?ml范围内,辣椒碱浓度与峰面积的线性关系良 好(r=0.9997),RSD=0.95%(n=6),平均回收率为100.6%(n=5).结论所建方法准确,简便,快速,适用于辣椒风湿贴 的质量控制. 关键词:辣椒风湿贴;辣椒碱;高效液相色谱法;含量测定 中图分类号:R927文献标识码:A文章编号:1006—0103(2007)叭一0106一O2 DeterminationofcapsaicininCapsicumpatchbyHPLC DUANSi—yi,HUANGYi—lan,ZHANGDan (WestChinaSchoolofPharmacy,SichnanUniversity,Chengdu610041,China) Abstract:OBJECTIVEToestablishallHPLCmethodtodeterminethecontentofcapcaisinin Capsicumpatch.METHoDSThe LunaCl8column(250mm×4.6mm,10m)wasused,andthemobilephaseWasmethol— water(65:35).Thedetectivewavelength was281nm.RESULTSThelinearrangeofcapcaisinWas6.04— 241.6g?mlandthelinearrelationshipwasfine(r=0.9997). The兄 SDofreproducibilitytestWas0.95%(n=6)andtheaveragerecoveryWas1o0.6%(n=5).CON CLUSIoNThemethodiS simple,rapidandaccurate,whichiSsuitableforthequalitativeeontrolofCapsicumpatch. Keywords:Capsicumpatch;Capsaicin;HPLC;Contentdetermination CLCnumber:R927Documentcode:AArticleID:1006—0103(2007)O1一O106一O2 辣椒性热味辛,具有驱邪逐寒,温中开胃,消食 杀虫等功效.辣椒中的辣椒碱,吸收后转变成一种 特殊的化合物,能抑制痛感神经纤维,在临床上被长 期作为理想的镇痛药物使用?.j.以辣椒碱为主要 原料制成的中药橡胶膏剂辣椒风湿膏,在治疗关节 疼痛,腰酸背痛,扭伤淤肿及慢性关节炎等方面的临 床效果显着.但部颁(中药成方制剂)第9册 的辣椒风湿膏标准中仅收载了性状,理化鉴别和一 般检查项作为质量控制指标,难以全面评价其质量. 辣椒为辣椒风湿膏的君药,控制其主要有效成分辣 椒碱的含量有着重要意义.因此,特建立了测定辣 椒碱含量的HPLC法,该法准确,简便,快速,适用于 辣椒风湿膏的质量控制. 1实验部分 1.1仪器与试药 LC一10ATvp型高效液相色谱仪(13本岛津); SageDataSystem色谱工作站(美国Allech).辣椒 风湿膏(广东EW制药有限公司,每片6.5em×10 作者简介:段思怡,女,正攻读药物专业的硕士学位. 通讯作者(Corespondentauthor),E—mail:zddshy@163.eom em,批号:050207,050208,050209);辣椒碱对照品 (美国Sigma公司);乙腈为色谱醇;其余试剂为分析 纯. 1.2方法与结果 1.2.1色谱条件与系统适用性试验以C,为填充 剂;甲醇一水(65:35)为流动相;检测波长281nm. 理论板数按辣椒碱峰计应不低于3×10.辣椒碱 峰与相邻组分峰的分离度应符合要求. 1.2.2测定方法取辣椒碱对照品适量,精密称 定,加甲醇制成60g?ml的对照品溶液.取本品 4片(260em),除去盖衬,剪成条状,置100ml烧瓶 中,加甲醇,水浴加热(70?)回流提取(30ml×2), 每次1h,用适量甲醇洗涤背衬,合并提取液和洗涤 液,水浴浓缩至约10ml,放冷,转移至25ml量瓶 中,用甲醇定容,摇匀,用0.45m微孔滤膜过滤, 作为样品溶液.另外,按样品溶液制备的方法制备 缺辣椒碱的阴性对照溶液.分别精密吸取对照品溶 液与样品溶液各20l,进样,按外标法计算,测定样 品的含量.样品以辣椒碱(CH,NO)计,不得少 第1期段思怡,等.HPLC测定辣椒风湿贴中辣椒碱的含量107 于1.5g?cm,. 1.2.3专属性考察取辣椒碱对照品溶液,样品溶 液,缺辣椒碱的阴性对照液及空白溶剂甲醇,按 AB k————————一 "1.2.2"项下分别测定.结果阴性对照液在辣椒碱 峰位处无色谱峰(图1),明所用方法对样品中辣 椒碱的含量测定具有良好的专属性. 0lO2OOlO2OOlO2OOlO2O t/min 图1空白溶剂IA),阴性对照溶液(B),辣椒碱对照品溶液IC)和样品溶液ID)的色谱 图 Fig1Chroma~gramsofblanksolventIA).negativecontrolsolutionIB).referencesubstance solutionIC)andsamplesolutionID) 1.2.4线性关系及范围取辣椒碱对照品适量,精 密称定,用甲醇溶解稀释制备成系列浓度的溶液 (6.04,15.10,30.20,60.40,120.80,241.60g? ml),按"1.2.2"项下测定,在6.04—241.60g? ml范围内,辣椒碱浓度()与色谱峰面积(1,)的线 性关系良好,回归方程为:Y=1.112×10X+1.200× 10(r=0.9997). 1.2.5精密度考察分别在1,3,5,7,10d由不同 的人员,取样品4片,按"1.2.2"项下方法制备样品 溶液,吸取20l进样,以外标法计算辣椒碱含量, 测得含量的RSD=2.21%.取样品4片,按"1.2. 2"项下方法,平行操作6份,按外标法计算辣椒碱 含量,测得含量的RSD=0.95%.结果显示精密度 良好. 1.2.6回收试验取含3.35g?cm辣椒碱的样 品4片(260cm),除去盖衬,剪成条状,置100ml 烧瓶中,精密加入辣椒碱对照品适量,照"1.2.2"项 下方法制备样品与对照品溶液并测定,按外标法测 定含量并计算回收率.结果平均回收率为100.6% (n=5). 1.2.7稳定性考察精密称取辣椒碱对照品适量, 以甲醇制成60g?ml的溶液,置冰箱4~C冷藏保 存,在1,5,10,15,25,30d分别进样20l,计算峰 面积的RSD=1.43%,即对照品溶液置冰箱4~C冷 藏保存30d基本稳定.按"1.2.2"项下方法制备 样品溶液,于室温放置,在同一天1,2,3,4,6,8h分 别进样20l,按外标法计算辣椒碱含量,测定含量 的RSD=0.85%.说明样品溶液室温下放置8h基 本稳定. 1.2.8含量测定照"1.2.2"项下方法,精密吸取 样品溶液和对照品溶液20l进样,记录峰面积. 以外标法计算样品中辣椒碱的含量.结果3批样品 的含量在3.28—3.32g?cm之间. 2讨论 取10g?ml辣椒碱对照品溶液进行紫外扫 描,在甲醇介质中,辣椒碱于208,229,281nm处有 最大吸收,由于208,229nm接近末端吸收,易受溶 剂及共存组分的干扰,故选择281nm为检测波长. 为了将辣椒碱与其他干扰成分有效分离,文中考查 了流动相强度,组成,盐浓度等,最终确定以甲醇一 水(65:35)作为流动相.在此条件下,辣椒碱峰与 相邻组分峰的分离度符合要求,且保留时间适中 (约16min).也对索氏提取,水浴回流提取和超声 提取3种提取方式和提取条件进行了考查.结果以 水浴加热(70?)回流的提取率最高.还对提取剂 体积(60,100,160m1),提取次数(1,2,3次)和单次 提取时间(0.5,1.0h)进行了考查.选定的最佳提 取条件为加甲醇(30ml×2),水浴加热(70?)回流 提取,每次1h. 参考文献: [1]冯纪年,付健,韩明理.辣椒碱的研究概述[J].西北农业学 报,2005,14(1):84—87. [2]马昭朝,王孝蓉,赵志刚.辣椒碱软膏[J].中国新药杂志, 2005,14(2). 收稿日期:2006—03 rJ墨?砖珏???&.J