血细胞计数实验

血细胞计数实验 实验四 血细胞计数 1、血细胞计数 1(本次实验的目的和要求 了解血细胞计数的原理并掌握红细胞、白细胞的计数方法，红细胞计数结果结合血红蛋白值还可以计算出红细胞平均血红蛋白量(MCH)可作为生理机能检查和临床诊断的指标。 2(实验内容或原理 用相应的稀释液将血液稀释若干倍(另有抗凝、固定、着色作用)，置于计数室中，在显微镜下计数一定容积内的血细胞数。稀释血液有血细胞吸管法和试管法，本实验采用后者。 3(需用的仪器或试剂等 鸡或家兔。血细胞计数板、专用盖玻片、吸血管、显微镜、手揿计数机、血细胞稀释液、拭镜纸。 4(实验步骤 (1)熟悉计数室 血细胞计数板系一长方形厚玻片，常用的改良牛氏计数板在中央横沟的两边各有一计数室，两计数室结构完全相同。计数室较两边的盖玻片支柱低0.1mm。因此，放上盖玻片时，计数板与其间距即计数室空间的高为0.1mm。在低倍显微镜下可见计数室被双线划分成,个边长为,mm的大方格。四角的大方格又各分为,,个中方格，这是用来计数白细胞的。中央大方格被划分为,,个中方格，每一中方格又划分成,,个小方格,称,,×,,，也有的计数板为,,×,,，小方格面积一致)。中央大方格的四角及中心,个中方格(,,×,,/则为四角上的中方格)为红细胞或血小板计数范围。 (2)红细胞计数 先用试管稀释法制备禽类血细胞悬液:将禽类红细胞稀释液?、?分别置水浴锅中预热到,,,, ,? ，取?液,mL于试管中，用吸血管加入新鲜鸡血(或肝素抗凝血),,霯，再加入?液,mL混匀，置该水浴锅中保温,,s左右，置室温，即为待检的血细胞悬液。可用于充液计数。取干洁的计数板，置于水平的显微镜载物台上，盖上盖玻片，使两侧各空出少许。摇匀血细胞悬液，用滴管吸取，将滴管尖轻轻置于盖玻片边缘外，让滴出的血细胞悬液凭毛细管作用吸入计数室内，刚好充满计数室为宜。静置,min后计数，先用低倍镜观察，不均匀则抛弃。计数时用虹彩、集光器、反光镜等调节入射光角度和强度，认清计数室位置。采用“由上至下，由左至右，顺序如弓”的顺序，对压边线细胞采取“数上不数下，数左不数右”的原则。依次计数并,个中方格中分别有多少个红细胞。 (3)计算 如发现各中方格红细胞数目相差20个以上或各大格的白细胞数目相差8个以上，表明血细胞分布不均匀，必须把稀释液摇匀后重新计数。 红细胞的计数方法是，将所得的红细胞数乘以10.000(如稀释100倍则乘以5000)，既为要求的每一立方毫米血液中的红细胞数。 白细胞计数方法是，将数得的白细胞数乘以50或25，既得一立方毫米血液中白细胞的总数。 (4)仪器洗涤 计数板、盖玻片和测定管用清水冲洗，再用绸布或细布沾干。 3 操作规程 3(1吸液 用5mL吸管吸取红细胞稀释液3.98mL置于试管中。 3(2稀释 用血红蛋白吸管吸取供检血样至20mm3处，用干脱脂棉拭去管尖外壁附着的血液，然后将血红蛋白吸管插入已盛有稀释液的试管底部，缓缓放出血液;再吸取上清液反复 洗净沾在吸管内壁上血液数次;试管加塞，颠倒混合数次，使血液与稀释液充分混合，即成200倍的稀释血液。血红蛋白吸管每次用后，先用清水吸吹数次，然后用蒸馏水、无水乙醇和乙醚中按顺序吸吹数次，干后下次备用。 3(3寻找计数室 取洁净干燥的计数板和血盖片，将血盖片紧密覆盖于血细胞计数板上;并将血细胞计数板置显微镜镜台上，用低倍镜寻找计数室。 3(4充液 用血红蛋白吸管或细玻棒吸取已摇匀的稀释好的血液，使吸管尖端接触血盖片边缘和计数室空隙处，稀释血液即可自然引入并充满计数室。充液不可过多或过少，过多则溢出而流入两侧槽内且使血盖片浮起;过少则计数池中形成空泡，致使无法计数。 3(5计数 计数室充液后，应静置1,2min，待红细胞分布均匀，并下沉后开始计数。计数板置于镜台上，镜台应保持水平。若镜台不保持水平，计数室内液体流向一侧，影响计数结果。 在中央大方格内选择四角与中央的五个中方格，每一个中方格有16个小方格，所以供计数80个小方格。计数时要按照“数左不数右，数上不数下”原则，并按一定顺序和方向计数。 3(6计算 80个小方格内红细胞个数×1010/L 3(7注意事项 5个中方格内红细胞的最高与最低数值相差不得超过?10%。否则表示血液稀释混合不匀。红细胞在高倍镜下呈圆形、淡黄色发亮的小体。计数板不能用酒精或乙醚洗涤，只可用常水或蒸馏水冲洗，最后用洁净纱布轻轻擦干即可，切不可用粗布擦拭。血滴干涸在血细胞板上，可加碳酸氢钠饱和液数滴，并用软布拭擦，血迹消失后用水冲洗。此种红细胞计数方法，可能误差约?20%，即检验值为5×1012/L,兽医可在4,6×1012/L间范围进行参考。光电比浊法在我国曾盛行一时，该法缺点太多，如红细胞体积大小、血红蛋白含量、红细胞冷凝、自凝、机器性能、电压高低等都会影响结果，建议不予使用。不允许以血红蛋白浓度来换算红细胞的数值。倘若出现计数不准确其原因可能是:吸血不准确;吸管内有水分或气泡;稀释液时间过长或变质;计数时将方格下线与右线上红细胞都计数在内;操作时动作太慢，血液部分呈小块凝结;充液前未将稀释液与血液充分混合均匀等。