RP—HPLC法测定不同产地熊胆中熊去氧胆酸的含量

1第l8卷第4期2o02年l2月长春中医学院学报AcademicPeriod／ealofChangchunCollieofTraditionalChlne$eMedicineV01．1812，2O02RP—HPLC法测定不同产地熊胆中熊去氧胆酸的含量贡济宇，史立，于澎，丛云凤(1．长春中医学院，吉林长春130021；2．吉林大学，吉林长春130021)关键词：熊去氧胆酸；含量测定；RPHPIE法中图分类号：R282．74文献标识码：B文章编号：1007—4813(2002)一04—0046—01熊胆是黑熊或棕熊的干燥胆，是名贵的中药材之一。目前，由于需求量增大而资源有限，伪品及掺伪或以次充好的现象极为常见。本文采用反相高效相色谱法对熊胆中特有活性成分进行了含量测定研究，方法简便、准确、重现性好，可作为熊胆药材质量控制方法。1仪器与试药日本shimadzuk一8A高效液相色谱仪，SPP6A可变波长紫外检测器，CR4A数据处理机；乙腈：色谱片，其他试剂均为纯；熊去氧胆酸对照品(购自中国药品生物制品检定所)，熊胆药材(分别为河北、山西、湖北、四川产，经本院鉴定教研定鉴定)。2对照品溶液与供试品溶液的制备2．1对照品溶液的制备精密称取已恒重的熊去氧胆酸对照品10mg，用甲醇定容5ml，作为对照品溶液。2．2供试品溶液的制备分别取已恒重的4种产地的熊胆药材各0．1g，精密制定，加甲醇溶解，水浴挥尽溶剂。加入10％氢氧化钠溶液10ml，置沸水浴中加热水解8h，然后用浓盐酸调成酸性(pH23)，用醋酸乙酯提出5次，分别用10、10、5、5、5ml，合并提取液，并用蒸馏水洗2次，洗液再用醋酸乙酯提取2次，且与上述提取液合并，水浴蒸干，以少许甲醇溶解，定容10ml，作为供试品溶液。3实验方法与结果3．1色谱条件色谱柱：美国AlltechC18分析纯(200mm×4．6rmn、5tma)，流动相0．02mol／L磷酸缓冲溶液一乙腈(55：45，pH：3)，流速：1．0ml／min，柱温：室温，检测波长207rim，灵敏度0．16AUFS，在本实验条研究的一个突出领域。对无机元素的测定，有紫外分光光度法、原子吸收光谱法、荧光光谱法等，常量分析还有化学滴定法等，与这些方法相比，原子发射光谱收稿日期／2002—09一l8————46。——件下，以熊去胆酸测定的理论塔板数为5836。3．2线性关系考察分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、IC。按上述色谱条件进样，测定以熊去氧胆酸峰面积对进样量进行线性归，得归方程为：Y=232．1x一0．15，r=0．9999，线性范围3．221．6／xg，实验表明其峰面积与样量之间性线关系良好。3，3稳定性试验取样品1份，按样品含量测定项下方法操作，每间隔0．5h进样1次，共进6次，以样品中被测组峰面积计算，RSD为1．4％，即在测定时间内溶液稳定。3．4精密度试验对照品溶液及供试品溶液各5，分别进样5次，峰面的RSD分别为1．0％和0．97％。3，5收率试验分别取熊胆样5份，每份lg，精密称定，分别加入量的熊去氧胆酸对照品，按供试品溶液制备方法制备，取5进样测定，得平均收率为99．03％(n=5)，RSD为1．2％。3．6样品的测定分别取各供试品溶液5，按上述色谱条件进样，测定，结果见表1。表1爸产地熊胆药材中熊去氧胆酸含量(，l=5)4小结与讨论4．1在流动相选择中，保留时问与峰形受磷酸缓冲溶液浓度和pH值影响较大，故实验中选择0．02mol／L磷酸缓冲液和pH：3效果最好。4．2不同产地熊胆药材中熊去氧胆酸含量存在差异，更容易给掺伪品造成可乘之机，故有必要制定最低限度，以便对其进行质量控制。法利用r原子光谱的全部信息特点，且可同时测定多种元素，值得在中药无机元素研究中推广应用。维普资讯http:www.cqvip.com