细胞活力、凋亡

57 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog 5 细 胞 活 力 、 凋 亡 和 A D M E/毒 性 检 测 本书目录 本章目录 For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog 细胞活力、凋亡 和 ADME/ 毒性检测 细胞增殖和细胞毒性检测 58 氧化应激检测 68 凋亡检测系统和试剂 69 蛋白酶和蛋白酶检测试剂盒 75 ADME 检测试剂盒 80 58 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog Life Science Catalog 2011 W or ld w id e C on ta ct L is t 细胞增殖和细胞毒性检测 53 50 M D VIABLE NECROSIS APOPTOSIS 2° Necrosis T0 REDUCED VIABILITY T1 T2 LDH LDH LDH LDH LDH LDH LDH LDHLDH LDH LDH LDH LDH LDH LDH LDH LDH LDH LDH LDH CASPASE-3PRO CASPASE-3PRO CASPASE-8PRO CASPASE-9PRO CASPASE-9 CASPASE-8 CASPASE-3 ATP NADH ATP NADH ATP NADH CellTiter-Blue® Assay CellTiter 96® AQueous One Solution Assay Caspase-Glo® 9 Assay Caspase-Glo® 3/7 Assay Apo-ONE® Caspase-3/7 Assay Caspase-Glo® 8 Assay CytoTox-ONE™ Assay CellTiter-Glo® Assay MultiTox-Glo Assay MultiTox-Fluor Assay DEAD-CELL PROTEASE DEAD-CELL PROTEASE LIVE-CELL PROTEASE LIVE-CELL PROTEASE INACTIVE ACTIVE CytoTox-Glo™ Assay CytoTox-Fluor™ Assay CellTiter-Fluor™ Assay 59 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog 5 细 胞 活 力 、 凋 亡 和 A D M E/毒 性 检 测 本书目录 本章目录 ApoTox-Glo™ Triplex Assay 5,334 16,275 G6320 G6321 10 ml 5×10 ml ApoTox-Glo™ Triplex Assay 实验室用。仅用于体外研究。Cat.# G6320 提供了足够的试剂：在 96 孔板模式下，可检测 100 个孔；在 384 孔板模式下，可检测 400 个孔。Cat.# G6321 提供了足够的试剂：在 96 孔板模式下，可检测 500 个孔；在 384 孔板模式下，可检测 2,000 个孔。 Mechanism of Toxicity Determination 4,935 15,225 G6410 G6411 10 ml 5×10 ml ApoLive-Glo™ Multiplex Assay 实验室用。 说明：ApoTox-GloTM Triplex Assay(ApoTox-GloTM 三重检测试剂盒 ) 结合了三种检测试剂，能够轻松实现对同一孔细胞的活力、毒性和凋 亡事件的评估。首先，细胞活力和细胞毒性的确定是通过同时检测两 种不同的蛋白酶来实现的，实验时需要加入含有两种肽底物的试剂， 该试剂本身不会导致细胞裂解。活细胞蛋白酶活性只能够从完整的活 细胞中检测到，检测时所使用的是能够产生荧光的、可渗透进入细胞 的多肽底物 (GF-AFC)。该底物进入胞膜完整的细胞后，被剪切而生 成荧光信号，信号强度与活细胞数目成正比。当细胞膜完整性缺失， 细胞内容物渗漏到周围培养基时，活细胞相关的蛋白酶即失活。死细 胞的检测是通过同时加入第二种底物——不能穿透细胞膜的荧光肽底 物 (bis-AAF-R110) 而进行的，该底物可以检测死细胞蛋白酶的活性， 因为死细胞失去了细胞膜完整性，将蛋白酶从细胞中释放出来。这就 实现了细胞活力和细胞毒性的检测，两种结果是呈负相关的。接着加 入第二种试剂，它含有针对 caspase-3/7 的发光 DEVD- 肽底物，以 及 Ultra-GloTM Recombinant Thermostable Luciferase(Ultra-GloTM 重 组热稳定萤光素酶 )。底物被 caspase-3/7 剪切后释放出萤光素，它 是萤光素酶的底物，能够在萤光素酶反应中产生光。使用发光检测仪 可以检测产生的光，光的生成与与凋亡的关键指标——caspase-3/7 的活性相关。 特点 • 在同一个样品孔中检测活力、细胞毒性和凋亡：在同一个样品孔 中确定细胞死亡的机理。 • 使用简单：检测过程只需进行“加样 - 混合 - 检测”。 • 自带对照，用于数据的归一化处理：活细胞数 / 死细胞数的 比率与细胞总数无关，可以用于归一化数据。 • 灵活且便于自动化：每一种检测组分的体积都可调整大小，以满 足通量要求，也便于在 96 孔和 384 孔板上的自动化操作。 • 提高效率，节省预算：通过在同一个孔中实现三种检测，减少了 细胞培养成本和劳动力成本。 储存条件：将所有组分避光储存于 -20℃。 Technical Manual TM322 储存条件：所有组分避光储存于 -20℃。 Technical Manual TM325 说明：MultiTox-Glo Multiplex Cytotoxicity Assay (MultiTox-Glo 叠加 细胞毒性检测试剂盒 ) 是一种依次检测荧光和发光的试剂盒，可检测 细胞群中活细胞和死细胞的相对数量。该试剂盒依次检测两种蛋白酶 的活性。活细胞蛋白酶的活性仅存在于完整的活细胞，是通过一种可 穿透细胞膜的荧光肽类底物 (GF-AFC) 来实现检测的。这种底物进入 完整的活细胞后被活细胞蛋白酶剪切释放出 AFC，产生的荧光信号 与活细胞数成正比。当细胞膜完整性丧失，这种活细胞蛋白酶活性标 志物泄漏到周围培养物中，随即失活。试剂盒提供的第二种底物是生 物发光的肽类底物 AAF- 氨基萤光素 (AAF-aminoluciferin)，不能穿 透细胞，用于检测死细胞蛋白酶活性，死细胞相关的蛋白酶会从已经 丧失细胞膜完整性的细胞中漏出，并剪切上述底物，释放出的游离氨 基萤光素产物通过试剂盒提供的 Ultra-Glo® 重组萤光素酶产生的 “辉 光型”发光来检测。 特点 • 可同时检测培养体系中活细胞与死细胞的数量：依次添加试剂， 是均质化的“加样 - 混合 - 检测”模式。 • 自带内对照，可将数据进行归一化处理：活细胞数与死细胞数之 间的比例与细胞总数无关，因此可被用于归一化数据。 • 迅速识别更多的假阳性与假阴性结果：彼此独立的细胞活力与细 胞毒性检测使两者互为对照。如果受试化合物对其中的一种检测 产生了干扰，则另一种检测方法可以起到内对照的作用。 • 提高数据质量：降低假阳性 ( 或假阴性 ) 的统计概率，并可以消 除荧光干扰的问题。 Technical Bulletin TB358 储存条件：避光储存于 -20℃。 Multiplexed Viability and Cytotoxicity Assays 实验室用。96 孔板检测时，每个孔使用 100µl Caspase-Glo® 试剂，Cat.# G9270 提供的试 剂足够 100 个孔的检测 ; Cat.# G9271, 可检测 500 个孔 ; Cat.# G9272, 可检测 1,000 个孔。 384 孔板检测时，每个孔使用 25µl Caspase-Glo® 试剂，Cat.# G9270 提供的试剂足够进行 400 个孔的检测 ; Cat.# G9271, 可检测 2,000 个孔 ; Cat.# G9272, 可检测 4,000 个孔。 MultiTox-Glo Multiplex 10 ml G9270 1 1,824 Cytotoxicity Assay 5 × 10 ml G9271 1 4,755 2 × 50 ml G9272 1 8,637 说明：在同一反应孔内， ApoLive-GloTM Multiplex Assay (ApoLive- GloTM 多重检测试剂盒 ) 既能检测以存活细胞数量作为标志的细胞毒 性，又能检测以 caspase 活性为标志的细胞凋亡。该试剂盒的第一 部分检测标志细胞活力的活细胞蛋白酶的活性。活细胞蛋白酶活性 仅存在于完整活细胞中，可利用能够产生荧光、可渗透进入细胞的 多肽底物 ( 甘氨 - 酰苯丙 - 氨基荧光香豆素；GF-AFC) 进行检测。 该底物进入胞膜完整的细胞后，随即被活细胞蛋白酶剪切，并产生 荧光信号，信号强度与活细胞数量成正比。一旦细胞膜丧失完整性 并渗漏至周围培养基，活细胞蛋白酶也立即失活。该试剂盒的第二 部分采用 Caspase-Glo® 检测技术来检测 caspase 的活化，caspase 是细胞凋亡的关键生物标志物。Caspase-Glo® 试剂盒提供能发光 的 caspase-3/7 底物，该底物含有四肽序列 DEVD，试剂盒中的试 剂针对 caspase 活性、萤光素酶活性及细胞裂解作了优化。加入 Caspase-Glo® 3/7 试剂将导致细胞裂解，随后 caspase 剪切底物并 产生“辉光型”萤光信号。萤光强度与存在的 caspase 活性成正比。 特点 • 在同一样品孔中共同检测细胞活力和细胞凋亡：准确确定细胞死 亡机制，耗时少、样品消耗少。 • 易于操作：该检测只需简单地按“加样 -混合 -检测”的顺序进行。 • 以细胞活力为对照，对 caspase 数据进行归一化处理： caspase 活性与活细胞的比率可用于确定 caspase 的活化 程度，有利于细胞数量的归一化。 • 应用灵活，便于自动化：每个检测组分的体积是可扩展的，以适 应不同的通量需求，该试剂盒适用于96及384孔板的自动化检测。 • caspase 活性窗口缺失情况下，亦能检测到细胞死亡。 • 与其它试剂盒进行叠加检测：检测的第一步不需要裂解细胞，可 与处于不同检测波长的荧光检测试剂盒叠加。 60 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog Life Science Catalog 2011 W or ld w id e C on ta ct L is t MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity Assay 实验室用。G9200 含有足量的试剂，可在 96 孔板模式下进行 100 次每次 100µl 的检测，或 者在 384 孔板模式下进行 400 次每次 25µl 的检测。G9201 含有足量的试剂，可在 96 孔板模 式下进行 500 次每次 100µl 的检测，或者在 384 孔板模式下进行 2,000 次每次 25µl 的检测。 G9202 含有足量的试剂，可在 96 孔板模式下进行 1,000 次每次 100µl 的检测，或者在 384 孔板模式下进行 4,000 次每次 25µl 的检测。 说明：MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity Assay(MultiTox-Fluor 叠 加细胞毒性检测系统 ) 是一种均质的单溶液荧光检测试剂，可同时检 测细胞培养孔中活细胞和死细胞的数量。此试剂盒通过测定两种不同 的蛋白酶活性，实现了同时检测细胞活力和细胞毒性。活细胞蛋白酶 的活性仅在完整的活细胞中才可以表现出来，是通过一种可穿透细胞 膜的荧光肽类底物 (GF-AFC)来实现检测的。当细胞膜完整性丧失后， 这种活细胞的蛋白酶标志物泄漏到周围培养基中，随即失活。该系统 还含有另一种荧光肽类底物 (bis-AAF-R110)，这种底物不能穿透细 胞膜，用于检测死细胞蛋白酶活性，这种酶会从已经丧失膜完整性的 细胞中释放出来。 特点 • 同时检测培养基中活细胞和死细胞的数量：一种均质检测的单溶 液试剂，只需 " 加样 - 混合 - 检测 "。 • 细胞数数据归一化：活细胞和死细胞比值不依赖于细胞数量和归 一化数据。细胞数数据的归一化使孔与孔、板与板、以及不同时 间的检测结果更具可比性。 • 减少假阳性和假阴性数据：活细胞数和死细胞数互补，独立的检 测成分互为内对照。 • 每个孔中能够得到更多数据：能与 Promega 大部分基于生物发 光的细胞凋亡或基因试剂盒叠加使用。 • 减少了测量变异：均质检测，" 加样 - 混合 - 检测 " 的检测步骤 避免了由于叠加操作步骤而出现的累加误差。 Technical Bulletin TB348 储存条件：储存于 -20℃。 MultiTox-Fluor Multiplex 10 ml G9200 1 1,759 Cytotoxicity Assay 5 × 10 ml G9201 1 4,815 2 × 50 ml G9202 1 8,747 MultiTox -Fluor Multiplex Cytotoxicity Assay 操作示意图。 65 81 M B DEAD-CELL SUBSTRATE: cell impermeant substrate for the dead-cell protease (Ala-Ala-Phe-rhodamine 110 or Ala-Ala-Phe-Aminoluciferin) LIVE-CELL SUBSTRATE: cell permeant fluorogenic substrate for the live-cell protease (Gly-Phe-AFCoumarin) Dead Cell Live Cells Dead Cells 0 1 2 Live Cells Dead Cells 0 1 2 Live Cells Dead Cells 0 1 2 Protease Protease Active Dead-Cell Inactive Live-Cell Protease Nucleus Live Cell Live-cell protease substrate can cross the cell membrane; dead cell protease substrate cannot. Protease Active Dead-Cell Active Live-Cell Protease GF– AAF– 100% Live Cells 50% Live / 50% Dead Cells 100% Dead Cells 2 0%%% Live / 50% Dead Cell Nucleus Live Cell NucleusNucleus Live Cell Nucleus Dead Cell % D De 2 De a 2 ead Cell ad Cell 2 ls Dead Cells% D%100% Dead CellDead CellLive Cell GF+ AAF+ DEAD-CELL SUBSTRATE: cell impermeant substrate f h d d ll ELL SUBSTRATE: meant fluorogenic f h li ll AAF– DEAD CELL SUBSTRATE:STRATE: Dead Cell Nucleus Live Cell Protease Active Dead-Cell Inactive Live-Cell Protease Active Dead-Cell Active Live-Cell Protease Nucleus Live Cell Protease Nucleus Live Cell Protease Active Dead-Cell Active Dead-Cell Active Live-Cell Protease Active Live-Cell Protease Fluorescence at 520nm (rhodamine 110-red) or 505nm (coumarin-blue) MultiTox Assay֡ፕୁײ 1) ᆩ੗ీڦဦԇ۾Ⴀ዆व!!ت૙ဦԇă 2) े෇ڹ࿿ă 3) ֪ଉᆑ࠼Njิ࿿݀࠼ă 61 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog 5 细 胞 活 力 、 凋 亡 和 A D M E/毒 性 检 测 本书目录 本章目录 Bioluminescent Cytotoxicity Assay Technical Bulletin TB359 实验室用。在 96 孔板模式下每次检测使用 100µl，G9290 足够进行 100 次检测；G9291 足 够 500 次检测；G9292 足够 1,000 次检测。在 384 孔板模式下每次检测使用 25µl， G9290 足够进行 400 次检测；G9291 足够 2,000 次检测；G9292 足够 4,000 次检测。 说明：CytoTox-GloTM Cytotoxicity Assay (CytoTox-GloTM 细胞毒性检 测系统 ) 是一种检测死细胞在细胞群中相对数量的发光检测试剂盒。 当细胞膜受损后，细胞内的某一类蛋白酶 ( 死细胞蛋白酶 ) 被释放出 来，CytoTox-GloTM 检测的正是这种酶在细胞外的活性。一种可发光 的细胞非渗透性肽底物 (AAF- 氨基萤光素 ) 可用于检测这种蛋白酶。 释放出的氨基萤光素产物被试剂盒附带的 Ultra-GloTM 重组萤光素酶 催化，产生 " 辉光型 " 发光，从而被检测到。该 AAF- 氨基萤光素底 物无法穿过细胞膜完好的活细胞，在活细胞群无法产生可检测的信号。 因此，发光的强度与正在经历细胞毒效应的细胞数量成正比。通过加 入裂解试剂 ( 试剂盒提供 )，该试剂盒还能够产生出发光信号，该信 号与每个培养孔内的细胞总数相关。用总细胞的发光强度减去死细胞 的发光强度即可计算出细胞活力，这样做可以将检测数据对细胞数进 行归一化处理，并减少了因检测方法本身对实验体系带来的影响而导 致的错误结论。该细胞毒性相关的蛋白酶标志物是组成型表达的，在 各细胞系之间高度保守，CytoTox-GloTM Assay 检测系统与其他细胞 活力检测方法具有极好的相关性。 特点 • 检测培养物中死细胞的相对数量：均质的 " 加样 - 混合 - 检测 " 的操作步骤，加入一种检测试剂就能检测细胞毒性。 • 可区分细胞活性的微小差别：该试剂盒可以产生线性反应曲线， 用以区分细胞活力的微小差别，从中等细胞毒性 (100% 到 95% 的细胞活力 ) 到强细胞毒性 (5% 到 0% 细胞活力 )。 • 归一化细胞毒性数据：归一化死细胞数数据，使得孔与孔、板与 板、以及不同时间的数据更有可比性。 • 裂解全部细胞，检测剩余活细胞的相对数目：细胞毒性的增加与 活细胞的减少呈相关性。 • 使数据质量更好：降低假阳性 ( 或假阴性 ) 的统计学概率，生物 发光读数稳定，无荧光干扰。 储存条件：避光储存于 -20℃。 CytoTox-Glo™ 10 ml G9290 1 1,009 Cytotoxicity Assay 5 × 10 ml G9291 1 3,974 2 × 50 ml G9292 1 5,814 死细胞蛋白酶切割 AAF-GloTM 发光底物并产生光信号。 62 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog Life Science Catalog 2011 W or ld w id e C on ta ct L is t Technical Bulletin TB350 储存条件：储存于 -20℃。 特点 • 检测培养基中死细胞的相对数目：均质的“加样 - 混合 - 检测” 操作方法消除了平行的多孔板处理过程，并节省细胞培养的费用。 • 每个孔中能够得到更多数据：能与 Promega 的几种发光细胞检 测试剂盒叠加使用。 • 归一化细胞毒性的下游多重检测数据：死细胞数目的归一化使孔 与孔、板与板以及不同时间的检测结果更具可比性。 • 减少测量变异：均质的“加样 - 混合 - 检测”操作方法避免了由 于叠加检测而出现的累加误差。 CytoTox-Fluor™ Cytotoxicity Assay 说明：CytoTox-FluorTM Cytotoxicity Assay (CytoTox-FluorTM 细胞 毒性检测系统 ) 是一种均质的单溶液荧光检测系统，可检测死细胞 在细胞群中的相对数量。该试剂盒检测与细胞毒性相关的一种独特 的蛋白酶，当细胞膜受损后，该蛋白酶被释放出来，使用能产生荧 光的肽底物 ( 二 - 丙胺酰基 - 丙胺酰基 - 苯丙胺酰基 - 罗丹明 110； bis-AAF-R110) 检测 " 死细胞活性 "。bis-AAF-R110 底物不能跨越活 细胞的完整细胞膜，因此在活细胞中没有信号产生。该试剂盒能与 Promega 公司的几种发光检测试剂盒或者处于不同波长范围的荧光 检测试剂盒配合使用，进行下游多重分析，比如检测 caspase 激活、 报告基因表达或者对结合细胞活力进行正交检测。 实验室用。G9260 含有足量的试剂，可在 96 孔板模式下进行 100 次每次 100µl 的检测， 或者在 384 孔板模式下进行 400 次每次 25µl 的检测。G9261 含有足量的试剂，可在 96 孔 板模式下进行 500 次每次 100µl 的检测，或者在 384 孔板模式下进行 2,000 次每次 25µl 的 检测。G9262 含有足量的试剂，可在 96 孔板模式下进行 1,000 次每次 100µl 的检测，或者 在 384 孔板模式下进行 4,000 次每次 25µl 的检测。 CytoTox-Fluor™ 10 ml G9260 1 1,022 Cytotoxicity Assay 5 × 10 ml G9261 1 3,833 2 × 50 ml G9262 1 5,887 Fluorescent Cell Viability Assay 说明：CellTiter-FluorTM Cell Viability Assay (CellTiter-FluorTM 细胞活 力检测试剂盒 ) 是非裂解性的、单试剂荧光检测试剂盒，用于检测细 胞群落中活细胞的相对数量。该系统检测的是活细胞内的蛋白酶活性， 该蛋白酶为保守的组成型蛋白，因而可作为细胞活力的生物标志物。 该活细胞蛋白酶活性仅与完好的活细胞有关，是通过一种可穿透细胞 膜的、可产生荧光的肽底物 (Gly-Phe-AFC) 来检测的。该底物进入 活细胞后，被活细胞蛋白酶切割，产生荧光信号，该信号的强度与活 细胞数量相关。当细胞膜的完整性丧失，以及漏出到周围培养基后， 该活细胞蛋白酶的活性即消失。 CellTiter-FluorTM 细胞活力检测试剂盒可与其它下游检测试剂盒 在同一孔中依次叠加使用，用于将检测数据对细胞数量进行归一化处 理。使用该试剂盒得到的数据可作为内对照，并可辨别因细胞结团 或化合物毒性所导致的错误结论。该试剂盒可与 Promega 的多种发 光试剂盒、或与其处于不同波长范围的荧光试剂盒相兼容，如检测 caspase 激活、报告基因表达或对结合细胞活力进行正交检测。 特点 • 从每个孔中得到更好的数据：该试剂盒可与 Promega 的多种发 光试剂盒、或与其处于不同波长范围的荧光试剂盒相兼容。 • 对细胞数进行数据归一化：对细胞数进行数据归一化处理使得实 验结果在孔与孔之间、板与板之间以及不同实验时间之间更具有 可比性。 • 节省细胞培养的费用：在同一孔内进行叠加检测，可免去处理平 行板的操作过程，因而可以节约细胞培养的费用。 Technical Bulletin TB371 储存条件：储存于 -20℃。 实验室用。 CellTiter-Fluor™ 10 ml G6080 1 961 Cell Viability Assay 5 × 10 ml G6081 1 3,974 2 × 50 ml G6082 1 6,105 63 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog 5 细 胞 活 力 、 凋 亡 和 A D M E/毒 性 检 测 本书目录 本章目录 CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay 实验室用。在 96 孔板中，每个检测反应使用 100ml CellTiter-Glo® 试剂，Cat.# G7570 的试 剂量可足够进行 100 次检测反应 ; Cat.# G7571 和 G7572 可足够进行 1,000 次检测反应； Cat.# G7573 可进行 10,000 检测。在 384 孔中，每个检测反应使用 25ml CellTiter-Glo® 试剂 , Cat.# G7570的试剂量可足够进行400次检测反应；Cat.# G7571和G7572可足够进行4,000 次检测反应； Cat.# G7573 可足够进行 40,000 次反应。 说明：CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay（CellTiter-Glo® 发光法细胞活力检测试剂盒）是通过对 ATP 进行定量测定来检测培 养物中活细胞数目的一种均质检测方法。ATP 是活细胞新陈代谢的 一个指标。CellTiter-Glo® 检测试剂盒为多孔板而设计，是进行自动 化高通量筛选 (HTS)、细胞增殖和毒性分析的理想选择。均质检测步 骤就是将单一试剂 (CellTiter-Glo® 试剂 ) 直接加入含有血清的培养细 胞中，无需洗涤细胞、去除培养基或进行多步加样操作。在 384 孔 板上，加入试剂并混合后，10 分钟内，该系统可检测到的每个孔内 的细胞数最低为 15 个。 均质检测的 " 加样 - 混合 - 检测 " 的操作方案使得细胞裂解和产 生的发光信号与存在的 ATP 量成正比，而 ATP 量直接与培养物中的 细胞数量成正比。CellTiter-Glo® 检测试剂盒产生一种 " 辉光型 " 的发 光信号，半衰期一般大于 5 小时，因细胞类型和培养基而异。由于 信号半衰期长，不需要使用试剂自动进样器，就可灵活地进行连续的 或批量的多孔板处理。独特的均质检测方案避免了那些需要多个步骤 的 ATP 检测方法可能会引入的误差。 特点 • 简化了细胞活性检测：均质的 " 加样 - 混合 - 检测 " 方案极大地减 少了其它同类检测所需的操作步骤。 • 细胞用量更少：在 384 孔板中可检测少至 15 个细胞 / 孔，在 96 孔板上检测 50 个细胞 / 孔。可准确地检测到低于常用的比色法和 荧光法的检测低限的细胞数。减少了每个检测反应所需的细胞数。 • 迅速获得结果：加入试剂后 10 分钟就能获得数据。 • 可自行选择检测方案：可用于多种类型的多孔板操作。可用发光 检测仪或 CCD 成像设备数据。 • 可连续处理培养板：发光信号很稳定，半衰期一般大于 5 小时， 因细胞类型和培养基种类而异，样品可进行批量处理。产生极好 的 Z' 因子值，适用于筛选。 • 获得更多信息：与 Promega 的其它细胞检测试剂盒叠加使用。 • 自动化操作：经确证的自动化操作方法可在此网页获得： www.promega.com/automethods/。 • 可定制或批量订购：要了解更多关于此产品的定制信息，请浏 览：www.promega.com/myway/。 CellTiter-Glo® Luminescent 10 ml G7570 1 726 Cell Viability Assay 10 × 10 ml G7571 1 3,369 100 ml G7572 1 2,856 10 × 100 ml G7573 1 22,108 Technical Bulletin TB288 储存条件：为了长期保存， CellTiter-Glo® 底物冻干粉和 CellTiter-Glo® 缓冲液应储存在 -20℃。CellTiter-Glo® 试剂于 4℃储存 48 小时活性降 低约 5%，4 天活性降低约 20%。 64 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog Life Science Catalog 2011 W or ld w id e C on ta ct L is t BacTiter-Glo™ Microbial Cell Viability Assay 实验室用。在 96 孔板上 , 每孔用 BacTiter-GloTM 试剂 100µl，Cat.# G8230 所含试剂足 够进行 100 孔检测；Cat.# G8231，1,000 孔检测；Cat.# G8232，1,000 孔检测；Cat.# G8233，10,000 孔检测。在 384 孔板上，每孔用 BacTiter-GloTM 试剂 25µl，Cat.# G8230 所含试剂足够进行 400 孔检测；Cat.# G8231，4,000 孔检测；Cat.# G8232，4,000 孔检测； Cat.# G8233，40,000 孔检测。 BacTiter-Glo™ Microbial 10 ml G8230 1 707 Cell Viability Assay 10 × 10 ml G8231 1 3,266 100 ml G8232 1 2,642 10 × 100 ml G8233 1 20,440 说明：BacTiter-GloTM Microbial Cell Viability Assay(BacTiter-GloTM 微生物细胞活力检测试剂盒 ) 采用均质的方法，通过定量 ATP 来确 定培养物中具有活力的微生物细胞的数目。ATP 是具有代谢活性的 细胞的指标。均质检测步骤就是将单一试剂 (BacTiter-GloTM 试剂 ) 直 接加入细菌培养物中，然后检测发光。均质的方法减少了其它 ATP 检测方法由于需要多个步骤而可能带来的移液误差。试剂配方既能够 裂解细菌细胞，又可产生发光信号，并能够以 " 加样 - 混合 - 检测 " 的均质检测进行。发光信号与存在的 ATP 量成正比，而 ATP 与存在 于培养基中的细胞数目直接成正比。BacTiter-GloTM 试剂盒的核心有 两点，其一是一种专利的热稳定萤光素酶 (Ultra-GloTM重组萤光素酶 )， 其二是从细菌中提取 ATP 的专利缓冲液配方。经验证，该试剂盒可 用于多种细菌和真菌。 特点 • 简化微生物检测：" 加样 - 混合 - 检测 " 方案比同类 ATP 试剂盒 减少了操作步骤，无需另行裂解细胞，不需要进样器，便于自动 化操作。 • 迅速获得结果：加入试剂并混合后，在 5 分钟或更短的时间内就 能记录到数据。灵敏度很高，在接种细胞后能很快检测其生长和 毒性。 • 提高灵敏度：可以从 10 个或更少的细菌细胞中检测 ATP，比吸 光度 (O.D.) 法灵敏 1,000 倍。 • 选择自己的模式：可用各种多孔板检测，也可用于单次检测；可 使用发光检测仪，也可用 CCD 相机记录数据。 • 连续处理平板："辉光型 "发光信号稳定，半衰期一般超过30分钟。 • 可定制或批量订购：要了解更多关于此产品的定制信息，请浏 览：www.promega.com/myway/。 Technical Bulletin TB337 储存条件：为了长期保存， BacTiter-GloTM 底物冻干粉和 BacTiter- GloTM 缓冲液应储存在 -20℃。 65 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog 5 细 胞 活 力 、 凋 亡 和 A D M E/毒 性 检 测 本书目录 本章目录 CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS) 实验室用。 说明： CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS) (CellTiter 96® AQueous 单 溶 液 细 胞 增 殖 检 测 试 剂 盒 ) 以 比色法检测细胞增殖、细胞毒性或化学敏感性分析中的活细胞 数 量。CellTiter 96® AQueous 单 溶 液 试 剂 包 含 一 种 四 唑 化 合 物 [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4- sulfophenyl)- 2H-tetrazolium, 内盐；MTS] 和一个电子耦合试剂 ( 乙 硫吩嗪，PES)。 PES 的化学稳定性已得到增强，这使它能与 MTS 混合，形成一个稳定的溶液。 进行检测时，只需将少量的 CellTiter 96® AQueous 单溶液试剂直 接加入到培养孔中，孵育 1-4 小时，然后在 96 孔板读板仪上记录 490nm 的吸光度。在 490nm 测量的甲 产物的吸光度值与培养物中 活细胞的数量直接成正比。 如果您目前正在使用 [3H]- 胸腺嘧啶核苷掺入法，可使用 CellTiter 96® AQueous 单溶液试剂替代 [ 3H]- 胸腺嘧啶核苷，在通常需加入 [3H]- 胸腺嘧啶核苷时加入该试剂即可。以前的细胞增殖生物检测比较了 [3H]- 胸腺嘧啶核苷掺入法与基于 MTS 的 CellTiter 96® AQueous 试剂盒 以及与早期的基于 MTT 的 CellTiter 96® 检测试剂盒的数据，结果表 明四唑盐试剂能够替代 [3H]- 胸腺嘧啶掺入法。 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 0 .01 .04 .62 2.5 10 MTS Co rr ec te d Ab . 4 90 nm ng/ml GM-CSF Comparison of MTS and [3H]thymidine Assays Proliferation of HT-2 Cells Stimulated with GM-CSF 16 12 8 4 0 .16 CP M (x 1 0- 3 ) [3H]-Thy 23 72 M A0 8_ 8A 使用 CellTiter 96® AQueous Cell Proliferation Assay 与 [3H]- 胸腺嘧啶核苷掺入法检 测由 GM-SCF 诱导的 HT-2 细胞增殖。两种方法得到类似结果。 [3H]- 胸腺嘧啶核苷与 MTS 方法的比较 GM-CSF 刺激后的 HT-2 细胞增殖 CellTiter 96® AQueous 200 assays G3582 1 623 One Solution Cell 1,000 assays G3580 1 2,242 Proliferation Assay 5,000 assays G3581 1 7,503 特点 • 简化了比色法细胞活力检测： " 加样 - 孵育 - 检测 " 的方案减少了 操作步骤 ( 仅需一步加样 )，使均质的高通量筛选成为可能。 • 仅需使用单溶液：仅需加入一种溶液，该溶液已经过过滤灭菌， 可直接加入检测板中 ( 不同于 MTT)。 • 简化分析步骤：不需要事先洗涤或富集细胞，直接在 96 孔板读 板仪上进行测定。也省掉了 MTT 法必须的溶解步骤。 • 增加了灵活性：检测板可以在读数后继续放回到培养箱中进一步 显色 ( 不同于 MTT)。 • 避免使用有机溶剂：不需要使用有机挥发性溶剂去溶解甲 产 物 ( 不同于 MTT)。 • 非放射性：不需液闪混合液，也不需处理放射性废物 ( 不像 [3H]- 胸腺嘧啶掺入检测 )。 • 可定制或批量订购：要获取更多关于此产品的定制信息，请浏 览：www.promega.com/myway/。 Technical Bulletin TB245 储存条件：储存于 -20℃，避光保存。 66 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog Life Science Catalog 2011 W or ld w id e C on ta ct L is t CellTiter 96® Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTT) CellTiter 96® Non-Radioactive 1,000 assays G4000 1 2,186 Cell Proliferation Assay 5,000 assays G4100 1 6,173 说明：CellTiter 96® 非放射性细胞增殖检测试剂盒是由一组可以快 速方便地测定活细胞数量的试剂组成的。该 CellTiter 96® 试剂盒经 Mosmann 描述的 MTT 分析法改良而来，并引入了一些改良方法， 来克服该方法以往遇到的问题。这些问题包括：1) 加入有机溶剂后 引起的血清蛋白沉淀； 2) 酚红干扰；3) 甲 结晶的不完全溶解导致 灵敏度下降；4) 有色产物的稳定性。 使用 CellTiter 96® 试剂盒时，向培养板内加入预混合的、经过优 化的染料溶液，培养孔中通常含有不同浓度的生长因子或待测物质。 在 4 小时的孵育时间里，活细胞将染料溶液中的 MTT 四唑化合物转 变成甲 产物。如果您目前正在使用 [3H]- 胸腺嘧啶掺入检测，可在 通常需加入放射性胸腺嘧啶时加入 CellTiter 96® 试剂作为替代，然 后将溶解 / 反应终止液加入培养基中以溶解甲 产物，此时在 570nm 处的光吸收率即可被 96 孔读板仪记录下来。另外，用 [3H]- 胸腺嘧啶 掺入法和四唑盐转化法检测几种样品中生长因子的浓度，直接比较的 结果表明两种方法测定的数据误差小于 5%。 特点 • 增加灵活性：用 96 孔读板仪可以检测至少 1,000 个细胞 / 孔，灵 敏度大大强于中性红染料分析法。 • 适用多种细胞的检测：可以分析哺乳动物、植物和酵母等多种细 胞。 • 非放射性：不需要液闪混合液，也不需要处理放射性废物。 • 节省时间：不需要事先洗涤或富集细胞，直接在 96 孔板读板仪 上进行测定。 • 适应您的需求：4 小时或过夜孵育。 • 方便：无需将染料组分进行称重、混合。 Technical Bulletin TB112 储存条件：将染料溶液储存于 -20℃，溶解 / 反应终止液储存于室温。 CellTiter 96® AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTS) 实验室用。 说明：CellTiter 96® AQueous Non-radioactive Cell Proliferation Assay(CellTiter 96® AQueous 非放射性细胞增殖检测试剂盒 ) 是一种 均质、比色的方法，检测在细胞增殖、细胞毒性或化学敏感性分析 中的活细胞数量。该试剂盒包含两种新型溶液，一种是四唑化合 物 [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4- sulfophenyl)-2H-tetrazolium, 内盐；MTS]，另一种是电子耦合试剂 PMS( 吩嗪硫酸甲酯 )。MTS 可被生物还原为甲 ，后者可溶于组织 培养基。甲 在 490nm 的吸光度可直接在 96 孔板读出，而无需额 外处理。MTS 到水溶性甲 的转化由脱氢酶催化，而后者存在于有 代谢活性的活细胞中。由 490nm 处吸光度确定的甲 的量直接与培 养物中活细胞的数量成正比。 如果您目前正在使用 [3H]- 胸腺嘧啶核苷掺入法，可使用 MTS/ PMS 混合溶液替代 [3H]- 胸腺嘧啶核苷，在通常需加入 [3H]- 胸腺嘧 啶核苷时加入该试剂即可。以前的细胞增殖生物检测比较了 [3H]- 胸 腺嘧啶核苷掺入法与 CellTiter 96® AQueous 试剂盒的数据，并得到了 相似的结果。这与使用以前的 CellTiter 96® 检测试剂盒进行类似的放 射性掺入法研究是一致的。 CellTiter 96® AQueous MTS Reagent Powder (CellTiter 96® AQueous MTS粉剂 )是一新型的四唑盐化合物，用于检测在细胞增殖、 细胞毒性或化学敏感性分析中的活细胞数量，以粉剂的形式提供。 CellTiter 96® AQueous 1,000 assays G5421 1 1,873 Non-Radioactive Cell 5,000 assays G5430 1 6,182 Proliferation Assay 50,000 assays G5440 1 48,537 CellTiter 96® AQueous 1 g G1111 1 6,605 MTS Reagent Powder 250 mg G1112 1 2,305 特点 • 易于使用：将 MTS 和 PMS 溶液混合，加入细胞培养体系，孵 育，读取吸光度。 • 快速：在 96 孔板里直接进行检测，无需洗涤或收集细胞。此 外，该系统还省去了溶解甲 产物的步骤，因为此试剂盒生成的 甲 产物在组织培养基内是可溶的。 • 非放射性：无需液闪混合液，也无需处理放射性废物 ( 如 [3H]- 胸腺嘧啶核苷 )。 • 灵活：检测板可在读数后继续放回到培养箱中进一步显色 ( 与 MTT 不同 )。 • 安全：不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲 产物 ( 与 MTT 不同 )。 Technical Bulletin TB169 储存条件：要长期储存，请将 MTS 和 PMS 溶液储存于 -20℃，避光 保存。 67 Cell Signaling For complete and up-to-date product information visit: www.promega.com/catalog 5 细 胞 活 力 、 凋 亡 和 A D M E/毒 性 检 测 本书目录 本章目录 CellTiter-Blue® Cell Viability Assay 如果以系统推荐的试剂用量进行检测，G8080 提供的试剂足够用于检测 1,000 个孔 (96 孔板 ) 和 4,000 个孔 (384 孔板 )。G8081 提供的试剂足够用于检测 5,000 个孔 (96 孔板 ) 和 20,000 个孔 (384孔板 )。G8082提供的试剂足够用于检测50,000个孔 (96孔板 )和200,000个孔 (384 孔板 )。 特点 • 节省时间：均质的 " 加样 - 孵育 - 检测 " 方案减少了操作步骤。 • 可叠加检测：系统可与其它检测试剂盒，如检测细胞凋亡的 Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 试剂盒 (Cat.# G7790) 或 Caspase-Glo® 试剂盒 (Cat.# G8090, G8200, G8210) 叠加使 用。 • 灵活：CellTiter-Blue® 检测试剂盒具有优异的 Z' 因子值，与其 它基于刃天青 (resazurin) 的检测方法比较，在孵育时间上具有 更大的灵活性。 • 安全：总体而言，该试剂对细胞不具毒性，在某些情况下，孵育 时间可被延长。不需要准备液闪混合液，也不需要处理放射性 废物 ( 这与 [3H]- 胸腺嘧啶核苷掺入法不同 ) 或有害溶剂 ( 诸如基 于 MTT 四唑盐检测方法所用到的 )。 • 按您的需求调整检测通量：该试剂经过精心设计，提供了足够的 试剂，用于向 96 孔板或 384 孔板准确分液。该产品包装规格便 于进行高通量筛选。 • 自动化操作：自动化的操作方法可通过下载获得： www.promega.com/autometho