百合知母汤治疗围绝经期综合征的实验研究

百合知母汤治疗围绝经期综合征的实验研究 3 钱莉亚 ,许惠琴 ,严然 ,王华富 ,崔姣 ,刘成鼎 ,顾鹏程 (南京中医药大学药学院 ,江苏 南京 　210046) 摘要 :目的 　观察百合知母汤对未成熟小鼠雌激素样活性的作用及其对围绝经期综合征大鼠的影响。方法 :采用幼龄雌 性小鼠 ,连续灌胃 4、8、16 g/ kg3 个剂量的百合知母汤 10 d 后 ,测定各组小鼠子宫、卵巢质量 ,并计算脏器系数。选用老 龄雌性大鼠 ,连续灌胃 2、4、8 g/ kg3 个不同剂量的百合知母汤 30～34 d 后 ,测定各组大鼠卵巢、子宫、垂体、肾上腺质量 , 计算脏器系数 ,进行卵巢、子宫组织学检查 ,并检测血清中雌二醇 ( E2 ) ,促滤泡生成激素 ( FSH) 及促黄体生成激素 (L H) 的水平。结果 　与其他组比 ,百合知母汤能明显增加未成熟小鼠子宫、卵巢系数 ( P < 0. 05～0. 01) ;显著增加大鼠卵巢、 子宫、肾上腺系数 ( P < 0. 05～0. 01) ;组织学检测显示 ,百合知母汤具有改善大鼠卵巢内卵泡发育状况 ,减轻子宫萎缩性 病变的作用 ( P < 0. 05～0. 01) ;百合知母汤 3 个剂量组均能明显增加自然衰老型围绝经期综合征大鼠血清 E2水平 ( P < 0. 01) ,并降低血清 FSH、L H 水平 ( P < 0. 05～0. 01) 。结论 　百合知母汤对未成熟小鼠具有雌激素样活性 ,并且对自然 衰老型围绝经期综合征大鼠的内分泌水平与围绝经期综合征症状具有明显改善作用。 关键词 :百合知母汤 ;雌激素样作用 ;围绝经期综合征 ;雌二醇 ;促滤泡生成激素 ;促黄体生成激素 中图号 :R285. 5 文献标志码 :A 文章编号 :1000 - 5005 (2010) 03 - 0202 - 03 　　围 绝 经 期 综 合 征 ( perimenopause syn2 drome) ,是由于卵巢功能退行性改变、脑垂体功 能亢进、雌激素水平低下所导致的植物神经系统 功能紊乱为主 ,伴有心理症状的一组症候群[1 ] ,中 医药治疗有其独特优势。百合知母汤始见于张仲 景《金匮要略》。近年来 ,在临床上运用此方治疗 很多疾病 ,均获得很好效果 ,由于百合病所描述的 临床现与围绝经期综合征有明显的相似之处 , 本研究考察了百合知母汤对未成熟雌性小鼠的雌 激素样作用及其对围绝经期综合征大鼠的影响 , 以探索其对围绝经期综合征的作用及其可能的作 用机制。 1 　材料 1. 1 　药品与试剂 百合知母汤 (百合 30 g ,知母 10 g) ,经水煎后 制成含生药量为 1 g/ mL 的液体 ;更年安片 ,天津 中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂 ,0. 31 g/ 片 ,批号 :B031107099 ;促卵泡生成激素 ( FSH) 放射免疫分析盒 ,北京市福瑞生物工程公司 ,批 号 :20080416 ;促黄体生成激素 (L H) 放射免疫分 析盒 ,北京市福瑞生物工程公司 ,批号 :20080422。 1. 2 　动物 清洁级雌性 ICR 小鼠 ,清洁级雌性 SD 大鼠 , 由扬州大学比较医学中心提供 ,生产许可证号 : SCXK(苏) 2007 - 0001。 1. 3 　仪器 SN - 695B 型智能放免γ测量仪 ,上海源自 核研究所日环仪器一厂。 2 　方法 2. 1 　对未成熟小鼠雌激素样活性的影响[2 - 3 ] 取雌性健康 ICR 小鼠 50 只 ,体质量 10～13 g。随机分成 5 组 ,每组 10 只 :即 ①正常对照组 : 生理盐水 20 mL/ g ; ②更年安片组 :1. 1 g/ kg ; ③ 百合知母汤低剂量组 :4. 0 g/ kg ; ④百合知母汤中 剂量组 :8. 0 g/ kg ; ⑤百合知母汤高剂量组 :16. 0 g/ kg。各组小鼠按上述剂量以 20 mL/ g 灌胃给 药 ,每日 1 次 ,连续 10 d。于 d 11 将小鼠称重 (实 验前小鼠禁食 16 h) ,处死 ,摘取子宫、卵巢 ,进行 脏器称重 ,计算脏器系数。 —202— 南京中医药大学学报 2010 年 5 月第 26 卷第 3 期 JOURNAL OF NA NJ IN G TCM UN IV ERS I TY Vol. 26 No. 3 May. 2010 3收稿日期 :2009 - 10 - 20 ;修稿日期 :2009 - 11 - 12基金项目 :国家自然科学基金重大研究计划项目 (90709025)作者简介 :钱莉亚 (1980 - ) ,女 ,江苏常熟人 ,南京中医药大学 2007 级硕士研究生。3 通信作者 : hqxu309 @sohu. com 2. 2 　对自然衰老型围绝经期综合征大鼠的影 响[4 - 5 ] 选用老龄雌性 SD 大鼠 ,经阴道细胞涂片检 查 15 d ,呈现不规则的动情周期确定为围绝经期 综合征大鼠。 将合格大鼠按体质量随机分为 5 组 :每组 10 只 : ①模型组 (围绝经期对照组) :生理盐水 10 mL/ g ; ②更年安片组 :0. 55 g/ kg ; ③百合知母汤 低剂量组 :2 g/ kg ; ④百合知母汤中剂量组 : 4 g/ kg ; ⑤百合知母汤高剂量组 :8 g/ kg。另选 10 只 3 月龄雌性 SD 大鼠 ,体质量 180～220 g ,作为 ⑥ 正常对照组 (青年对照组) :生理盐水 10 mL/ g。 各组大鼠按上述剂量以 10 mL/ g 灌胃给药 ,每日 1 次 ,连续 30～34 d (以保证阴道涂片检查处于动 情间期) 。在连续给药 30～34 d 的 d2 ,大鼠阴道 细胞涂片检查 ,选取处于动情间期的大鼠进行实 验 ,检测以下指标 : 2. 2. 1 　脏器系数 摘取卵巢、子宫、垂体、肾上腺 ,并称重 ,计算 脏器系数 mg/ g。 2. 2. 2 　卵巢、子宫的组织学检查 将大鼠卵巢和子宫用福尔马林固定、石蜡包 埋 ,切片 , H E 染色。光学显微镜观察 : (1) 卵巢内 各期卵泡数 ,包括原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、 闭锁卵泡数及黄体数 ; (2)子宫上皮层、固有层、肌 层的病理变化。病理观察指标为 : ①子宫内膜上 皮细胞形状有无变性坏死 ; ②固有层腺体数目有 无减少 ,纤维组织有无增生 ; ③肌层有无炎症 ,血 管有无增生等病变。根据病变由轻到重的程度分 别记为 0～4 分。肌层血管增生的程度也由轻到 重记为 0～4 分。 2. 2. 3 　血清性激素水平 大鼠眼眶取血 ,分离血清 ,采用化学发光法测 定雌二醇 ( E2 )水平 ;采用放免法测定促滤泡生成 激素 ( FSH)和促黄体生成激素 (L H)水平。 2. 3 　统计方法 量反应资料采用 t 检验法 ,统计软件用微软 Excel 软件。 3 　结果 3. 1 　百合知母汤对未成熟小鼠的雌激素样作用 实验结果显示 (见表 1) ,幼年雌性小鼠给药 10 d 后 ,百合知母汤各剂量组能明显增加未成熟 小鼠子宫、卵巢系数 ,与对照组相比有显著性差异 ( P < 0. 05 ,0. 01) 。 表 1 　百合知母汤对未成熟小鼠子宫、卵巢的影响 ( Šx ±s , n = 10) 组别 剂量 / g ·kg - 1 子宫系数 / mg ·g - 1 卵巢系数 / mg ·g - 1 正常对照组 - 1. 284 ±0. 821 0. 295 ±0. 114 更年安片组 1. 1 1. 854 ±0. 441 0. 411 ±0. 069 3 低剂量组 4. 0 1. 890 ±0. 736 0. 413 ±0. 087 3 中剂量组 8. 0 1. 962 ±0. 792 0. 431 ±0. 130 3 高剂量组 16. 0 2. 210 ±0. 659 3 0. 433 ±0. 085 3 3 注 :与正常对照组比较 , 3 P < 0. 05 , 3 3 P < 0. 01。 3. 2 　对自然衰老型围绝经期综合征大鼠的影响 3. 2. 1 　对脏器系数的影响 由实验结果 (见表 2) 可知 ,自然衰老型围绝 经期综合征大鼠卵巢、子宫、肾上腺明显萎缩 ,与 正常对照组比较有显著性差异 ( P < 0. 05 ,0. 01) , 垂体也有萎缩倾向。百合知母汤能明显增加大鼠 卵巢、子宫、肾上腺的质量 ,增加脏器系数 ,与模型 组比较有显著性差异 ( P < 0. 05 ,0. 01) ,同时亦能 增加垂体系数。 表 2 　百合知母汤对自然衰老型围绝经期综合征大鼠子宫、卵巢、垂体、肾上腺的影响 ( Šx ±s , n = 10) 组别 剂量/ g ·kg - 1 卵巢系数/ mg ·g - 1 子宫系数/ mg ·g - 1 垂体系数/ mg ·g - 1 肾上腺系数/ mg ·g - 1 正常对照组 - 0. 503 ±0. 059 1. 941 ±0. 359 0. 031 ±0. 007 0. 300 ±0. 064 模型组 - 0. 351 ±0. 060 △△ 1. 578 ±0. 381 △ 0. 025 ±0. 010 0. 205 ±0. 019 △△ 更年安片组 0. 55 0. 413 ±0. 062 3 2. 102 ±0. 471 3 0. 027 ±0. 009 0. 245 ±0. 050 3 低剂量组 2. 00 0. 400 ±0. 141 1. 994 ±0. 362 3 0. 026 ±0. 009 0. 242 ±0. 069 中剂量组 4. 00 0. 430 ±0. 090 3 2. 151 ±0. 632 3 0. 027 ±0. 008 0. 250 ±0. 058 3 高剂量组 8. 00 0. 455 ±0. 141 3 2. 294 ±0. 697 3 0. 031 ±0. 009 0. 264 ±0. 041 3 3 注 :与正常对照组比较 , △P < 0. 05 , △△P < 0. 01 ;与模型组比较 , 3 P < 0. 05 , 3 3 P < 0. 01。 3. 2. 2 　卵巢、子宫的组织学检测结果 组织学检查结果显示 : ①使用百合知母汤后 能改善卵巢内卵泡发育的状况 ,初级卵泡、次级卵 泡数量、黄体数量较模型组增多 ,发育良好。百合 知母汤中、高剂量组大鼠次级卵泡数量和黄体数 量与模型组比较具有显著性差异 ( P < 0. 05 , —302—钱莉亚 ,等 :百合知母汤治疗围绝经期综合征的实验研究 　第 3 期 0. 01) ; ②自然衰老型围绝经期综合征大鼠子宫病 变主要表现为内膜固有层腺体数目减少 ,间质纤 维组织增生 ,肌层血管不同程度扩张。百合知母 汤 3 个剂量组均有减轻子宫萎缩性病变的作用 , 其中中、高剂量组与模型组比较具有显著性差异 ( P < 0. 05 ,0. 01) 。结果见表 3 ,插页 Ⅵ图 1 - 12。 表 3 　百合知母汤对自然衰老型围绝经期综合征大鼠卵巢、子宫病理变化的积分结果 ( Šx ±s , n = 10) 组别 剂量/ g ·kg - 1 原始卵泡数 初级卵泡数 次级卵泡数 黄体数 子宫病变 正常对照组 - 4. 7 ±2. 8 3. 5 ±1. 2 5. 0 ±1. 5 8. 9 ±3. 0 0. 10 ±0. 20 模型组 - 0. 8 ±2. 5 △ 0. 3 ±0. 2 △ 0. 2 ±0. 5 △ 2. 9 ±2. 1 △ 5. 80 ±1. 36 △ 更年安片组 0. 55 1. 3 ±2. 9 0. 5 ±1. 1 1. 0 ±1. 4 5. 1 ±3. 0 4. 70 ±0. 69 3 低剂量组 2. 00 0. 9 ±0. 8 0. 8 ±0. 9 0. 7 ±0. 6 5. 2 ±2. 9 4. 60 ±2. 57 中剂量组 4. 00 1. 1 ±1. 2 0. 8 ±1. 0 1. 1 ±0. 9 3 6. 8 ±4. 3 3 4. 00 ±1. 72 3 高剂量组 8. 00 1. 4 ±2. 6 0. 9 ±0. 9 1. 4 ±1. 1 3 3 9. 1 ±4. 5 3 3 3. 30 ±1. 48 3 3 注 :与正常对照组比较 , △P < 0. 05 ;与模型组比较 , 3 P < 0. 05 , 3 3 P < 0. 01。 3. 3. 3 　对血清性激素水平的影响 根据检测结果 (见表 4) ,自然衰老型围绝经 期综合征大鼠血清 E2 水平下降 , FSH、L H 水平 升高 ,与正常对照组比较有显著性差异 ( P < 0. 01) 。百合知母汤 2、4、8 g/ kg 3 个剂量组均能 明显增加自然衰老型围绝经期综合征大鼠血清 E2水平 ,降低血清 FSH、L H 水平 ,与模型组比较 有显著性差异 ( P < 0. 05 ,0. 01) 。该结果表明百 合知母汤对自然衰老型围绝经期综合征大鼠血清 性激素水平有明显改善作用。 表 4 　百合知母汤对自然衰老型围绝经期综合征大鼠血清 E2 、FSH、L H 的影响 ( Šx ±s , n = 10) 组别 剂量/ g ·kg - 1 E2 / pmol ·L - 1 FSH/ IU ·L - 1 L H/ IU ·L - 1 正常对照组 - 152. 94 ±23. 19 2. 63 ±0. 31 2. 01 ±0. 62 模型组 - 91. 26 ±20. 51 △ 3. 89 ±0. 64 △ 3. 78 ±0. 84 △ 更年安片组 0. 55 115. 31 ±19. 64 3 3. 24 ±0. 69 3 2. 82 ±0. 79 3 低剂量组 2. 00 121. 22 ±41. 56 3. 33 ±0. 22 3 2. 95 ±0. 52 3 中剂量组 4. 00 125. 10 ±13. 21 3 3 3. 10 ±0. 52 3 3 2. 76 ±0. 55 3 3 高剂量组 8. 00 135. 62 ±20. 44 3 3 2. 86 ±0. 31 3 3 2. 46 ±0. 22 3 3 注 :与正常对照组比较 , △P < 0. 05 ;与模型组比较 , 3 P < 0. 05 , 3 3 P < 0. 01。 4 　讨论 实验采用 15 月龄左右的老年大鼠作为自然 衰老围绝经期综合征动物模型 ,观察了 E2 、L H、 FSH 等性激素水平及卵巢、子宫等靶器官的影 响。实验结果显示 ,模型大鼠血清 E2含量明显低 于青年大鼠 ,而血清 L H、FSH 则明显升高 ,卵巢、 子宫、肾上腺明显萎缩衰退 ,可见此模型与围绝经 期妇女生理病理机制基本相符。而百合知母汤能 明显增加模型大鼠血清 E2 水平 ,降低血清 FSH、 L H 水平 ;增加卵巢、子宫、肾上腺系数 ;增加卵巢 内初级卵泡、次级卵泡、黄体数量 ,改善卵泡发育 , 并有减轻子宫萎缩性病变等作用。提示百合知母 汤可能通过提高血清 E2 水平重建卵巢与垂体之 间的负反馈关系 ,使血中的促性腺激素的水平降 低 ,明显改善围绝经期期生殖内分泌水平。 本文同时观察了未成熟雌性小鼠的影响 ,结 果表明 ,百合知母汤能明显增加未成熟小鼠子宫、 卵巢系数 ,提示百合知母汤可能具有雌激素样活 性作用。这可能是该方用于治疗围绝经期综合征 的作用机制之一。 参考文献 : [1 ]曹泽毅. 中华妇产科学 [ M ] . 北京 :人民卫生出版社 , 1999 :2271. 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