昆虫基因组DNA的提取

昆虫基因组DNA提取一CTAB法将95%酒精浸泡过的标本取出，用吸水纸吸去标本面的乙醇，用IXTEBuffer浸泡两次，每次20min；解剖取个体胸部肌肉组织约0.02g，将组织转入1.5mL离心管加入ImL液氮使其迅速冻结,用玻璃棒迅速有力地将团状组织研磨成细粉末。然后加入600》L预热至60°C的2%CTAB提取缓冲液（2%CTAB,0.1mol/LTris・C1pH8.0,0.02mol/LEDTA,1.4mol/LNaCl）,20mg/mLProK2.5ML（终浓度100mg/mL）,和0-巯基乙醇溶液1.0》L,轻轻混匀，60C下恒温水浴2.0-3.0hr,不时加以轻轻混匀。水浴后取出，等体积氯仿/异戊醇（24：1）混合液混匀，然后7,000rpm离心10min,取其上层清液，量体积；重复一次。在上层清液中加入2倍体积冷冻的无水乙醇于一20C沉降2小时（或1倍体积异戊醇于一20C沉降1hr）。4°C、10,000rpm下离心15min,取沉淀小心弃上清。用500mL70%预冷的乙醇洗涤沉淀，10,000rpm下离心5min,弃上清;重复一次。室温晾干或抽真空干燥；用40mLTEBuffer重溶。于基因组DNA中加入终浓度为50ug/mL的RNase（每次使用前90C灭活10min）,于37C消化1.0-1.5hr。用0.8%的琼脂糖凝胶检测，取3mLDNA样品及2》LLoad-buffer（含溴酚蓝和缓冲液），加入点样孔。实验所用Marker是DNA（EcoR/HindIII），100V电压电泳90分钟。凝胶成象仪进行检测。10.用紫外可见分光光度计测定DNA的OD值，判定DNA纯度和浓度。