ESBLs检测的筛选与确证试验

肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌中ESBLs检测的筛选与确证试验ESBLs是英文Extended-Spectrump-lactamase的缩写，中文意思是超广谱B-内酰胺酶，它是当前抗生素出现的新的耐药趋势之一。目前大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、肺炎克雷伯氏菌是最常见的产ESBLs菌株的细菌，其次，阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜绿假单抱菌也可出现产ESBLs菌株的细菌。初步筛选试验型确证试验丄卄氓甘培养基Mueller-Hinton琼脂Mueller-Hinton琼脂抗微生物药物纸片浓度头抱泊肟10pg或头抱他啶30pg或氨曲南30pg或头抱噻肟30pg或头抱曲松30pg（使用一种以上的药物进行筛选将会提高检测的敏感性）头抱他啶30pg头抱他啶/克拉维酸30/10》g头抱噻肟30》g头抱噻肟/克拉维酸30/10》g确证试验需要同时使用头抱噻肟和头抱他啶，单独和联合克拉维酸的复合制剂）接种按纸片扩散法的规定进行按标准纸片扩散法的规定进行孵育条件孵育时间判读结果头抱泊肟的抑菌圈W17mm头抱他啶的抑菌圈W22mm氨曲南的抑菌圈W27mm头抱噻肟的抑菌圈W27mm头抱曲松的抑菌圈W25mm提示可能有ESBLs的产生2个药物中有任何一个，在加克拉维酸后，抑菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈相比，增大值三5mm时，判定为产ESBLs（如，头抱他啶的抑菌圈=16mm；头抱他啶/克拉维酸的抑菌圈=21mm）质控建议大肠埃希菌ATCC25922（见表3的质控范围）肺炎克雷伯菌ATCC700603：头抱泊肟抑菌圈9-16mm头抱他啶抑菌圈10-18mm氨曲南抑菌圈9-17mm头抱噻肟抑菌圈17-25mm头抱曲松抑菌圈16-24mm大肠埃希菌ATCC25922：所测试药物联合克拉维酸后的抑菌圈直径与单药抑菌圈相比，增大值W2mm。肺炎克雷伯菌ATCC700603：头抱他啶/克拉维酸抑菌圈直径增大三5mm；头抱噻肟/克拉维酸抑菌圈直径增大三3mm。脚注:头抱他啶/克拉维酸（30/lOpg）纸片与头抱噻肟/克拉维酸（30/lOpg）纸片的制备：使用克拉维酸1000》g/ml的原液（新鲜制备或者从一70°C冰冻中取出已分装在小瓶中的），把10pl的克拉维酸加到头抱他啶（30pg）和头抱噻肟（30pg）的纸片上。在纸片贴于平板之前1个小时内，用微量加样器把10pl原液加到头抱他啶和头抱噻肟纸片上，允许有30分钟的时间以利于克拉维酸的吸收和纸片在贴之前保持足够的干燥。制备完成后立即使用纸片，否则丢弃；不能保存。CAZCAZ/棒酸，CTXCTX/棒酸。一种大于5MM，另一种小于5MM或相等，可确认为ESBL阳性。加棒酸的药片抑菌圈直径反而小于不加的，可能是片间差异，应认为ESBL阴性