蛋白酶酶切位点
蛋白酶的分类及作用位点
蛋白酶
分类
作用位点
已知抑制物
氨基肽酶
金属蛋白酶
带有自由氨基的L-氨基酸氨基末端;不分解由X-Pro、D或Q组成的肽键
2,2,双吡啶,1.1()-菲咯啉
菠萝蛋白酶
巯基蛋白酶
无特异性
α2巨球蛋白,TPCK,TLCK,烷化
羧肽酶A
锌金属蛋白酶
带有自由氨基酸的L-氨基酸羧基端;不能分解R、P或羟脯氨酸
EDTA,EGTA
羧肽酶B
锌金属蛋白酶
K- Lys,R- Arg羧基端
EDTA,EGTA,碱性氨基酸
羧肽酶Y
丝氨酸羧肽酶
氨基酸羧基端
PMSF
组织蛋白酶C
琉基蛋白酶
氨基端双肽,可通过K,R或P氨基端作为第二或第三个氨基酸封闭
醋酸碘, 甲醛
胰凝乳蛋白酶
丝氨酸蛋白酶
在F- Phe,T- Thr或Y- Tyr之后
抑肽酶,PMSF,TPCK,α-巨球蛋白
胶原酶
金属蛋白酶
在P-X-G-P肽链中X之后
EDTA,EGTA,还原剂,但无血清存在
dispase
金属蛋白酶
无特异性
EDTA,EGTA,Hg2+,重金属
内肽酶Arg-C
丝氨酸蛋白酶
在R- Arg之后
α巨球蛋白,TLCK
内肽酶Asp-N
金属蛋白酶
在D- Asp和C-Cys半胱氨酸之前
EDTA,α菲咯啉
内肽酶Glu-C
丝氨酸蛋白酶
在E- Glu/Gln或D- Asp之后
α巨球蛋白,TLCK
内肽酶Lys-C
丝氨酸蛋白酶
在K- Lys之后
TLCK,抑肽酶,抑蛋白酶醛肽
肠激酶
丝氨酸蛋白酶
在D-D-D-D-K-肽链中K之后
Xa因子
丝氨酸蛋白酶
在R- Arg之后
PMSF,APMS,大豆胰蛋白酶抑制物
无花果蛋白酶
琉基蛋白酶
无特异性
TPCK,TLCK,α-巨球蛋白
激肽释放酶
丝氨酸蛋白酶
在一些R- Arg之后
抑肽酶,抑蛋白酶醛肽
木瓜蛋白酶
巯基蛋白酶
长期孵育时具有广泛特异性arg、lys
、gly、L-Citrulline
TPCK,TLCK,抑蛋白酶醛肽α—巨球蛋白,烷化剂
胃蛋白酶
酸蛋白酶
广泛特异性phe、trp、tyr等疏水aa
胃蛋白酶抑制素
纤溶酶
丝氨酸蛋白酶
在K- Lys或R- Arg之后
PMSF,TLCK,抑肽酶,α-巨球蛋白
链霉蛋白酶
混合型
无特异性
B.M.完整药片
蛋白酶K
丝氨酸蛋白酶
广泛特异性
PMSF,PefablocSc
枯草杆菌蛋白酶
丝氨酸蛋白酶
无特异性
PMSF,α巨球蛋白,苯甲脒
热溶素
锌金属蛋白酶
在非极性残基之前
EDTA
凝血酶
丝氨酸蛋白酶
在K- Lys之后
TLCK,PMSF,抑蛋白酶醛肽
抑肽酶,α巨球蛋白,苯甲脒
胰蛋白酶
丝氨酸蛋白酶
在K- Lys或R -Arg之后arg、lys
TLCK,PMSF,抑蛋白酶醛肽
抑肽酶,α巨球蛋白
蛋白酶 分类 作用位点 已知抑制物
木瓜蛋白酶 巯基蛋白酶 具有广泛特异性 TPCK,TLCK,抑蛋白酶醛肽α-巨球蛋白,烷化剂
胃蛋白酶 酸蛋白酶 广泛特异性 胃蛋白酶抑制素
胰蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 在K或R之后 TLCK,PMSF,抑蛋白酶醛肽抑肽酶,α巨球蛋白
人体20种氨基酸及其英文缩写
名称 三字符号 单字符号
丙氨酸 Ala A
精氨酸 Arg R
天冬氨酸 Asp D
半胱氨酸 Cys C
谷氨酰胺 Gln Q
谷氨酸 Glu/Gln E
组氨酸 His H
异亮氨酸 Ile I
甘氨酸 Gly G
天冬酰胺 Asn N
亮氨酸 Leu L
赖氨酸 Lys K
甲硫氨酸 Met M
苯丙氨酸 Phe F
脯氨酸 Pro P
丝氨酸 Ser S
苏氨酸 Thr T
色氨酸 Trp W
酪氨酸 Tyr Y
缬氨酸 Val V
【生化】特异性蛋白酶的酶切位点
胰蛋白酶arg、lys,得到以arg、lys为C末端残基的肽段。 胰凝乳蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。 胃蛋白酶phe、trp、tyr等疏水aa。 木瓜蛋白酶arg、lys。 葡萄球菌蛋白酶,磷酸缓冲液ph7.8时断裂glu、asp。碳酸氢铵缓冲液ph7.8或醋酸铵缓冲液ph4.0时断裂glu。 梭菌蛋白酶arg,用于不溶性蛋白的长时间裂解。 CNBr断裂Met。 羟胺断裂asn—gly间的肽键。 二硫键可以用巯基化合物还原法或者过甲酸氧化法断裂.。
木瓜蛋白酶(Papain),又称木瓜酶,是一种蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜(Carieapapaya)中含有的一种低特异性蛋白水解酶,广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内,其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸,属于巯基蛋白酶,它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点,因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。
木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶,分子量为23406,由一种单肽链组成,含有212个氨基酸残基。至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位,他们分别是Cys25、His159和Asp158,另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键,且都不在活性部位。纯木瓜蛋白酶制品可含有:(1)木瓜蛋白酶,分子量21000,约占可溶性蛋白质的10%;(2)木瓜凝乳蛋白酶,分子量26000,约占可溶性蛋白质的45%;(3)溶菌酶,分子量25000,约占可溶性蛋白质的20%;及纤维素酶等不同的酶。
番木瓜未成熟果实中含有木瓜蛋白酶(Papain)、木瓜凝乳蛋白酶A(Chymopapain A )、木瓜凝乳蛋白酶B(Chym opapain B )、木瓜肽酶B (PapayaPeptidase B ) 等多种蛋白水解酶。且已知四种半胱氨酸蛋白酶的一级结构具有高度的同源性。其中,木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶,可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨酸的羧基端,并能优先水解那些在肽键的N-端具有二个羧基的氨基酸或芳香L-氨基酸的肽键。
木瓜蛋白酶papain属巯基蛋白酶,具有较宽的底物特异性,作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基参与形成的肽键。此酶属内肽酶,能切开全蛋蛋白质分子内部肽链—CO-NH—生成分子量较小的多肽类。
最适合pH值5.7(一般3~9.5皆可),在中性或偏酸性时亦有作用,等电点I= 8.75;最适合温度55~60℃(一般10~85℃皆可),耐热性强,在90℃时也不会完全失活;受氧化剂抑制,还原性物质激活。
胃蛋白酶为什么不水解自身_百度文库
胃蛋白酶是一种酸性蛋白酶。由胃部中的胃粘膜主细胞释放出没有活性的胃蛋白酶原。酶原 在遇到由胃壁细胞所释放的胃酸中的盐酸后切去 44个氨基酸残基将被激活,其最适pH值约为 1.5~2.2,在中性或碱性pH值的溶液中,胃蛋白酶 会发生解链而丧失活性。胃蛋白酶在对蛋白质或 多肽进行水解时,具有一定的氨基酸序列特异性, 倾向于水解氨基端或羧基端为芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)或亮氨酸的肽键。
胰蛋白酶和糜蛋白酶:
糜蛋白酶潜在切点太多了,你联合用的话会出好多峰,要控制好反应时间或者建议glu-C配合trypsin 切E + K + R
或glu-C + lysyl endopeptidase 切 E + K
都很特异,比较好的结果,顺便说一下 trypsin太猛 不要放太多。
搭配糜蛋白酶 反应要彻底点,主要的切点 W Y F T