补体溶血反应[指南]
补体溶血反应
(1)取小试管4支,按下
加入各物
管号 2,绵羊RB溶血素(m1) 补体(ml) N.S(ml) C(m1)
1 0.25 0.25 - 0.5
2 0.25 - 0.25 0.5
3 0.25 0.25 0.25 0.25
4 0.25 - - 0.75
将上述各试管充分摇匀后,放37?水浴箱内15—30分钟观察有无溶血现象。
(2)若红细胞溶解,则液体呈红色透明,为溶血反应阳性,以“十”表示;若红细胞不溶解,则液体仍呈均匀混浊或有少量红细胞沉于管底,为溶血反应阴性,以“一”表示。
溶血反应和补体结合试验
2009-05-24 14:15:36 相关论文 相关书籍 Tags:溶血反应 补体结合试验 免疫学 溶血反应和补体结合试验 二(补体结合反应
当抗原与其对应的抗体结合时,所生成的抗原抗体复合物能从溶液中将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶液,故补体结合现象不能被肉眼看出来,因此必须借助溶血系统(溶血素及相对应的羊血球)作为指示剂,来判定媒质中有无游离的补体,近而推定媒质中未知抗原(或抗体)和已知抗体(或抗原)是否进行了特异性的结合。本反应具有很高的敏感性及特异性,因之常应用于传染病的诊断,特别诊断病毒疾病和梅毒。
由于参与本反应的各种成分间有着一定量的关系,因此在作本试验之前,必须通过一
系列的预备实验来确定各成分的使用量,故本反应的实验
较为复杂。
本次实验以伤寒杆菌免疫血清与其相对应的抗原补体结合试验为例。
材料:
1. 抗原:伤寒的抽出液
2. 抗体:伤寒杆菌的免疫血清
3. 补体:豚鼠血清
4. 溶血素:抗绵羊血细胞的兔血清 5. 2%绵羊红血球
6. 小试管、试管架、水浴锅。
方法:
(一)预备试验(示教说明)
预备试验包括溶血素效价的滴定,补体效价的滴定,抗原效价的滴定及被检血清的处
理。
(1) 溶血素效价的滴定
按照下表加入各物
管溶溶血1:20 生理 2%羊假定
号 血素素 补盐血球(ml) 结果 (ml) 稀释体(ml) 水(ml)
倍数
1:300 摇全溶1 0.5 0.3 1.7 0.5
匀后解
置1:500 全溶2 0.5 0.3 1.7 0.5
37?解
水浴1:800 全溶3 0.5 0.3 1.7 0.5 一小解 时 1:全溶4 0.5 0.3 1.7 0.5
解 1000
1:全溶5 0.5 0.3 1.7 0.5
解 1200
1:全溶6 0.5 0.3 1.7 0.5
解 1600
1:全溶7 0.5 0.3 1.7 0.5
解 2000
1:全溶8 0.5 0.3 1.7 0.5
解 2400
1:全溶9 0.5 0.3 1.7 0.5
解 3200
1:10.5 0.3 1.7 0.5 0 4000
1:10.5 0.3 1.7 0.5 1 4800
1:10.5 0.3 1.7 0.5 2 6000
对 1 0.3 2.2 0.5 照
凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管(即1:4000倍稀释)0.5毫升溶血素为一个单位,在溶血反应中常用0.5毫升中含有2个溶血素单位的溶液,所以试验时应取1:2000倍稀释的溶液。
(2) 补体单位滴定
依下表加入各试剂:
抗补体 生溶血素 2%羊管 原 (1:理盐水(2单血球悬液结果 号 (m20)(ml) (ml) 位)(ml) (ml) l)
0.1.不溶血 1 0.20 0.5 0.5 置 5 30 置 于 于 0.1.3稍溶血 2 0.25 0.5 0.5 35 25 7 7 0.1.全溶血 3 0.30 0.5 0.5 ? 5 20 ? 水 水 0.1.浴 全溶血 4 0.35 0.5 0.5 浴 5 15 410.1.5 全溶血 5 0.40 0.5 0.5 5 5 10 分分0.1.钟 全溶血 6 0.45 0.5 0.5 钟 5 05
0.1.全溶血 7 0.50 0.5 0.5 5 00
0.1.不溶血 8 - 0.5 0.5 5 50
能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位,上表中第3管(即0.3毫升),但因补体的效价可能有部分损失,故普通稍高的一管为实用单位,实际试验时须用两个实用单位。
上表的结果为:
补体
单位:0.3毫升
补体实用单位:0.35毫升
补体两个实用单位:0.70毫升
因试验时是两个实用单位的补体0.5毫升,可依下列比例关系换算: 20:0.7=?:0.5
?= 14.3
即须将补体稀释14.3倍,用0.5毫升则含有两个实用单位。
(3) 抗原的滴定
在用已知抗原测定未知抗体时,必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适
浓度(反之用已知抗体测定未知抗原时,则需滴定抗体效价) 试 管
号 1 2 3 4 5 6
剂
1:5稀释血, , , 0.5 0.5 0.5 清
伤寒抗原, , , , 0.5 0.5 2U
痢疾抗原, , , , , 0.5 1:80
补体2U 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 生理盐水 , , 0.5 0.5 1.0 1.5
摇匀放置37?水浴中30min
溶血素2U , 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
2,羊血球 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
摇匀放置37?水浴中15min
血抗溶羊试特清 原 说明 血素对血球对验管 异性对照 对对照 照 照 照
如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌,混有淋巴液
或显著溶血时,常产生很强抗外体作用。又如试管、吸管不清洁,也可出现抗补体。若有
抗补体发生,应抽血重试验。