高效液相色谱法测定盐酸拓扑替康中酒石酸含量

高效液相色谱法测定盐酸拓扑替康中酒石酸含量 高效液相色谱法测定盐酸拓扑替康中酒石 酸含量 ? 884?黑龙江医药HeilongjiangMedicineJournalVoL23No.62010 高效液相色谱法测定盐酸拓扑替康中酒石酸含量 李宁,付继莹 哈尔滨誉衡药业股份有限公司(黑龙江哈尔滨150029) 摘要目的:注射用盐酸拓扑替康处方中含有酒石酸,酒石酸在处方中作为抗氧化剂, 其量多少直接影响产品 质量,现对已上市样品中酒石酸含量测定进行方法学研究,建立酒石酸含量测定方 法.结果:经方法学研究表明所选 041024,041025,041026);上市样品(淮安润邦药业有限公 司,批号:04091302);左氧氟沙星对照品(中国药品生物制 品检定所,编号130455—200202);甲醇为色谱纯;其余试剂 均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:C18柱(150mm×4.6mm,5m);流 动相:0.05mol/L枸橼酸溶液一1mol/L醋酸铵溶液一乙腈 (77:1:14);波长为293nm;流速为I.0ml/min;进样量: 1O. 2.2对照品溶液的制备精密称取左氧氟沙星对照品,加 0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每lmL中含左氧氟沙星 501a,g的溶液,作为对照品溶液. 2.3供试品溶液的制备精密量取本品适量,用0.1mol/L 盐酸溶液稀释制成lml中含左氧氟沙星501xg的溶液,摇 匀,即得. 2.4干扰性试验取处方量辅料,按上述供试品溶液制备方 法及色谱条件进行测定,结果辅料在左氧氟沙星保留时问 处无色谱峰出现,表明本品辅料对测定无干扰,见图1. ; ——.———————一 一—一,?一——..,——j,—— 图1HPLC色谱图 A.空白对照;B对照品;C.供试品 2.5线性关系考察取本品适量,加0.1mol/L盐酸溶液制 成每lml中含左氧氟沙星0.5mg的溶液;再精密移取2ml,5 ml,8ml,lOml,15ml,20m1分别置100ml量瓶中,加0.1mol/ L盐酸溶液稀释至刻度.取该系列溶液各1O,进样, 色谱图.以进样浓度(mg/m1)为横坐标,峰面积为纵坐标, 将峰面积(A)对应左氧氟沙星浓度(C)进行回归,得方程:A =135950.47C+71.55,r=0.9999.结果表明:左氧氟沙星 在1Ornl一90~g/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关 系. 2.6精密度试验精密吸取对照品溶液10lxL,按上述色谱 条件重复进样6次,测定峰面积结果RSD为0.95%,说明精 密度良好. 2.7重复性试验精密称取同一样品共6份,分别置50ml 量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,作为供试 品溶液.按上述色谱条件测定含量.结果RSD为0.85%, 表明本法重复性良好. 2.8溶液稳定性试验取供试品溶液,按上述色谱条件,分 别于0,2-.4,6,8小时进样,测定含量.结果:样品中左氧氟 沙星含量的RSD为0.67%,表明样品在8h内稳定性良好. 2.9回收率试验精密称取左氧氟沙星对照品8rag,10mg, 12mg各3份,按处方比例分别加入其它辅料,按供试品溶液 的制备方法制成供试品溶液,按上述色谱条件测定含量. 结果RSD为0.47%,表明本法准确度良好. 表1回收率测定结果 3样品测定 取3批样品,按上述供试品溶液制备方法及色谱条件 进行测定,以外标法计算含量,结果见下表: 4讨论 取样品在190nm,400nm波长之间进行扫描,左氧氟沙 星在293.2nm波长处有最大吸收,另取氯化钠和依地酸二 钠适量,制成同处方比例的制剂空白溶液,同法测定,结果 空白溶液在293nm无明显吸收,表明辅料不干扰左氧氟沙 星的测定.因此选用293nm为本品的检测波长.由方法学 考察结果可知,本方法具有准确,方便,灵敏度高等优点,提 高了注射用左氧氟沙星的质量控制方法,有利于本品在生 产中的质量控制,提高产品的质量稳定性. 参考文献 乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液质量标 [1]国家药品监督管理局. 准[S].收稿13期:2010一O5一o5 黑龙江医药HeilongjiangMedicineJournalVoL23No.62010?885? 用的方法可用于酒石酸含量测定.结论:所建立方法适用于注射用盐酸拓扑替康中 酒石酸含量测定. 关键词:酒石酸;含量测定;方法学 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1006—2882(2010)06—884—02 注射用盐酸拓扑替康为抗肿瘤药物,参照FDA药品说 明及国内上市药品说明书,其处方中均含有酒石酸,酒石 酸在处方中的作用为抗氧化剂,本文通过方法学研究,建立 酒石酸含量测定方法. 1材料与仪器 注射用盐酸托泊替康,酒石酸,高效液相色谱仪,电子 天平 2试验方法 照高效液相色谱法并参考相关文献.】【】[,建立酒石 酸含量测定方法. 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂;以磷酸氢二铵缓冲液(0.01mol/L)为流动相,检 测波长为21Ohm,理论板数按酒石酸峰计算应不低于2500, 酒石酸与相邻杂质峰分离度应符合要求. 测定法取本品加流动相使溶解,制成每lml约含酒石 酸lmg的溶液,精密量取20注入液相色谱仪,记录色谱 图;另取酒石酸对照品适量,同法测定,按外标法以峰面积 计算,即得. 3方法学研究 3.1专属性试验 为考察盐酸拓扑替康对酒石酸含量测定是否有干扰, 进行如下专属性试验. 取流动相溶液,阴性对照溶液,阳性对照溶液各20, 分别注入液相色谱仪,记录色谱图,结果表明所选用的色谱 条件可行,阴性对照溶液不影响酒石酸含量测定. 3.2耐用性试验 更换柱温,流速,色谱柱,流动相的pH值进行耐用性实 验,实验结果表明所选用的方法可行,耐用性好. 3.3溶液稳定性试验 供试品溶液的制备取注射用盐酸拓扑替康,加流动相 制成每lml含1.0mg的溶液,作为供试品溶液. 取供试品溶液,分别于0,1,2,4,6小时测定一次,记录 色谱图,结果RSD为0.21%,溶液在6小时内稳定. 3.4线性范围试验 对照品溶液的制备精密称取酒石酸对照品适量,加流 动相溶解并定量稀释成lml中约含10mg的溶液,摇匀. 精密量取对照品溶液0.5,0.8,1.0,1.2,1.3ml,置lOml 容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取上述溶液 各20,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,以对照品溶液 浓度与相应峰面积计算回归方程,线性关系图如下. ? ,O? Z5? z? ?- lO呻 结果溶液在0.5mg/ml一1.3mg/ml范围内,线性较好, 符合要求. 3.5重复性试验 取注射用盐酸拓扑替康样品,制备6个相同浓度的供 试品溶液,分别测定,结果6个相同浓度样品测定结果的 RSD为0.47%,平行性好,实验结果符合精密试验要求. 3.6准确度试验 采用加入法测定其回收率,考察本方法的准确度. 对照品贮备液的制备精密称取酒石酸对照品适量,加 流动相溶解并稀释制成每lml含酒石酸约2mg的溶液,作 为对照品储备液. 对照品溶液制备精密量取酒石酸对照品储备液,加流 动相制成每1ml约含lmg的溶液,作为对照品溶液. 供试品溶液的制备取供试品加流动相制备成浓度约 1mml的溶液,经测定溶液浓度为1.02mg/ml. 溶液I制备量取供试品溶液5.0ml于10ml量瓶中,加 人对照品贮备液1.5ml,加流动相至刻度,重复配制3次,作 为溶液I. 溶液?制备量取供试品溶液5.0rnl于lOml量瓶中,加 入对照品贮备液2.5ml,加流动相至刻度,重复配制3次,作 为溶液?. 溶液?制备量取供试品溶液5.Oml于lOml量瓶中,加 入对照品贮备液3.5ml,加流动相至刻度,重复配制3次,作 为溶液?. 结果平均回收率为99.8%,RSD为0.27%,结果符合准 确度实验要求. 3.7中间精密度试验 取注射用盐酸拓扑替康样品,由不同分析人员,选用不 同设备在不同日期进行含量测定,共进行5次实验.结果 由不同分析人员,在不同日期用不同设备测得结果的RSD 为0.4%,符合测定要求. 经专属性,耐用性,溶液稳定性,线性,重复性,准确度, 中间精密度实验,表明所选用方法可用于注射用盐酸拓扑 替康中酒石酸含量测定. 4结论 酒石酸在注射用盐酸拓扑替康中作为抗氧剂,其量的 多少直接影响到产品的稳定性,目前注射用盐酸拓扑替康 国家中(WS,一(X一373)一2004Z)没有对酒石酸含量 限度进行要求,建议在标准中增加酒石酸含量测定. 参考文献 [1]高海燕,廖小军,王善广,胡小松.反相高效液相色谱法测定 果汁中11种有机酸条件的优化[J].分析化学研究简报, 2004,32(12):1645—1648. [2]庞新安,万英.反高效液相色谱法测定果品中有机酸[J].中 国食物与营养,2007,1I:40—41. 收稿日期:2010一Ol一27