高效毛细管电泳法测定黄柏干皮和枝皮中盐酸小檗碱的含量

高效毛细管电泳法测定黄柏干皮和枝皮中盐酸小檗碱的含量 高效毛细管电泳法测定黄柏干皮和枝皮中 盐酸小檗碱的含量 27O西北药学杂志2010年8月第25卷第4期 高效毛细管电泳法测定黄柏干皮和 枝皮中盐酸小檗碱的含量 蔡梅超,周洪雷?,王真,查慧敏.(1.山东中医药 大学药学院,山东济南250355;2.济南宏济堂制药有限责任 公司,山东济南250100;3.山东省警官培训学院,山东济南 250014) 摘要:目的采用高效毛细管电泳法测定黄柏不同部位中盐 酸小檗碱的含量.50mmol?L硼砂缓冲液(醋酸调 pH=7.O)一甲醇(85:15);毛细管(50cmX75m)为分离通 道,温度25?,14kV电泳分离,检测波长254nm,黄连碱为 内标.结果盐酸小檗碱在0.03328,O.1664g?L之间线性 良好,r一0.9997;样品回收率为98.79,RSD为1.93.黄柏 干皮和枝皮含量分别为4.O6和3.41.结论黄柏不同 部位中盐酸小檗碱的含量有明显区别. 关键词:HPCE;含量测定;小檗碱 doi:10.3969/j.issn.1004—2407.2010.04.016 中图分类号:R927.2文献标志码:A 文章编号:1004—2407(2010)04—0270—02 黄柏来源于芸香科植物黄皮树Phellodendron chinenseSchneid.的干燥树皮,具有清热燥湿,泻火除 蒸,解毒疗疮等功效[1].黄柏含有小檗碱,药根碱等 多种生物碱及内酯,甾醇,黏液质等].目前多以小 檗碱含量为指标评价药材质量,小檗碱含量测定有多 种方法[3.],笔者采用高效毛细管电泳法测定黄柏干 皮,枝皮中小檗碱含量. 1仪器与试药 1.1仪器Beckman5500P/ACE型高效毛细管电 泳(美国Beckman公司),弹性融溶石英毛细管柱(50 am×75m);PHS一3C型精密pH计;十万分之一天 平(德国赛多利斯). 1.2试药盐酸小檗碱对照品购于中国药品生物制 品检定所(供含量测定,批号110713-200208);黄连 碱由山东中医药大学中药化学教研室提供;黄柏药材 购于河北安国,经山东中医药大学中药鉴定教研室李 峰鉴定为芸香科PhellodendronchinenseSchneid.的 干燥树皮;其余试剂均为国产分析纯. 2方法与结果 2.1电泳条件缓冲液为50mmol?L硼砂(醋酸 调pH一7.O)一甲醇(85:15);毛细管(内径75m,长 度57em,有效长度50cm)为分离通道,压力进样,温 度25?,分离电压14kV,检测波长254am,黄连碱 为内标. 2.2样品及对照品制备内标溶液的制备:精密称 基金来源:国家973一中药药性相关基础问题研究 (2o07CB512601);山东省中药泰山学者岗位研究 团队项目 作者简介:蔡梅超,女,讲师 通信作者:周洪雷,男,教授,博士研究生导师 取黄连碱12.25mg,置于25mL具塞量瓶中,甲醇溶 解并定容至刻度,制备成0.49g?L-1溶液,备用. l l l上0510l50 图1HPCE图 A一对照品溶液;B-供试品溶液;1一内标;2-盐酸小檗碱 供试溶液的制备:精密称取0.1g的黄柏粉末 (过40目筛),置于100mL具塞三角瓶中,精密加入 2mL内标溶液,再精密加入48mL甲醇,称质量,超 声提取30min,补足质量,滤过,续滤液用0.45m 微孔滤膜过滤,备用. 2.3线性关系考察精密称取盐酸小檗碱2O.8 mg,置于5OmL具塞量瓶中,甲醇定容至刻度,摇匀. 分别精密移取0.4,0.8,1.2,1.6和2.0mL上述溶 液置于5mL量瓶中,分别精密加入内标溶液0.2rI1L, 甲醇定容至刻度,摇匀.各对照品溶液按上述条件测 定,以对照品溶液质量浓度为横坐标,对照品峰面积与 内标物峰面积之比为纵坐标,绘制标准曲线,计算回 归方程.盐酸小檗碱的回归方程为Y一50.679x一 0.0518,r一0.9997,线性范围为0.03328,0.1664 g?L-.. 2.4精密度实验取盐酸小檗碱对照品溶液,在上 述色谱条件下,重复进样5次,测定峰面积,计算 RSD为1.15,明精密度良好. 2.5重现性实验取同一批黄柏样品5份,按供试 品溶液的制备进行制备并测定,计算含量及相对标准 偏差,RSD为1.78.表明该方法重现性较好. 2.6稳定性实验取对照品溶液,于0,1,2,3,4和5 h进样,测定峰面积并计算含量,结果RSD为1.16, 表明稳定性良好. 2.7回收率实验取小檗碱含量为3.412的黄柏 药材5份,每份精密称取0.05g,分别置于100mL 具塞三角瓶中,精密加入0.416g?L的盐酸小檗 碱对照品溶液4mL,再精密加入2mL内标溶液,按 2.2项下制备方法制备供试品溶液并测定.结果平 均回收率为98.79,RSD为1.93. 2.8样品测定取黄柏药材,粉碎,按上述方法分别 制备供试品溶液并测定,计算黄柏中盐酸小檗碱的含 量.结果表明黄柏干皮和枝皮中盐酸小檗碱含量分 别为4.065和3.412. 3讨论 2005年版中国药典规定,黄柏含小檗碱以盐酸 西北药学杂志2010年8月第25卷第4期271 小檗碱(C.HC1N0)计不得少于3.0.实验结果 表明黄柏干皮和枝皮中盐酸小檗碱含量均符合药典 规定. 根据HPCE和所测生物碱的特点,选择了不同 电泳条件.].分别选择pH值(5.0,6.0,7.O),电压 (10,14,18kV),缓冲液(40mmo1.L硼砂,40 mlTlO1.L硼砂一甲醇,50mmo1.L硼砂一甲醇),内 标(对硝基苯甲酸,对氨基苯甲酸,黄连碱)为考察对 象,结果显示当pH一7.0,电压为14kV,缓冲液为醋 酸调pH一7.0,50mmol?L硼砂一甲醇(85:15)时 分离最好. 高效毛细管电泳由于进样量少,容易引起进样误 差,在含量测定中加入内标可消除进样误差.高效毛 细管电泳柱具有柱效高,样品预处理简单,分析速度 快,样品用量少等优点,在中药成分分析方面显示良 好的应用前景. 参考文献: [1]中国药典2005年版[s].一部.2005:214. [2]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出 版社,2000:2031. [3]孙文基,谢世吕.天然药物成分定量分析[M].北京:中 国医药科技出版社,2003:66. [4]李清,王璐,戴荣华,等.HPLC法测定黄连解毒汤中盐 酸小檗碱的含量[J].西北药学杂志,2004,19(2):51. [5]周洪雷,魏璐雪,杨东辉.高效毛细管电泳测定黄连,肉 桂配伍前后黄连主要生物碱的含量[J].中国中药杂志, 1999,24(5):308. [6]程智勇,韩凤梅,蔡敏,等.HPCE法测定双黄连口服液 中的黄芩苷和绿原酸[J].药学,1999,34(11):854. [7]汤佩莲,龚红全,宋粉云.HPCE法测定拈痛丸中盐酸小 檗碱的含量[J].中药材,2007,30(8):lO35. (收稿日期:2010—02—24) HPLC法测定鼻炎康片中黄芩苷的 含量 张远强,贺建春(佛山德众药业有限 招嘉文,冼少华, 公司,广东佛山52800O) 摘要:目的建立鼻炎康片中黄芩苷的含量测定方法.方法 粟用HPLC法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相:甲 醇一0.4磷酸溶液(45:55),检测波长为280nrn.结果黄芩 苷在0.07426,1.485g范围内线性关系良好,r一0.9998, 平均回收率为99.7,RSD为0.9(72—6).结论方法简 便,结果准确,可靠,重现性好,可用于鼻炎康片的质量控制. 关键词:鼻炎康片;黄芩苷;HPLC法 doi:10.3969/J.issn.1004-2407.2010.04.O17 中图分类号:R927.2文献标志码:A 文章编号:1004—2407(2010)04—0271-02 鼻炎康片主要由广藿香,苍耳子,鹅不食草,野菊 花,黄芩,麻黄,当归等1O种药材组成,具有清热解 毒,宣肺通窍,消肿止痛的功效,l临床主要用于治疗 急,慢性鼻炎和过敏性鼻炎.黄芩苷的含量测定方法 一 般有紫外分光光度法?,HPLC法和薄层扫描 法L3],曾有文献报道采用聚酰胺薄膜色谱一紫外分光 光度法测定鼻炎康片中黄芩苷的含量].笔者采用 HPLC法测定该制剂中黄芩苷的含量,方法操作简 便,结果准确,灵敏度高,重现性好,适合鼻炎康片的 质量控制. 1仪器与试药 1.1仪器Waters1525型高效液相色谱仪,包括 Waters1525泵,2487双波长检测器,717自动进样 器,Breeze色谱工作站;KQ一50B超声清洗仪(250W, 4o/59kHz,昆山市超声设备有限公司);Sartorius BP211D十万分之一电子天平. 1.2试药黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定 所,批号715—200010,供含量测定用);鼻炎康片(佛 山德众药业有限公司);甲醇(色谱纯,天津市四友生 物医学技术有限公司);其余试剂为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:SymmetryC18柱(150mm ×4.6mrrl,5肚m);流动相:甲醇一0.4的磷酸溶液 (45:55);流速1mL?min_.;检测波长为280nm; 柱温:25?;进样量为1OL;理论板数按黄芩苷峰计 算应不低于2000. 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液制备精密称取于6O?减压干 燥4h的黄芩苷对照品适量,加体积分数7O乙醇制 成每1mL含30g的溶液,作为对照品溶液. 2.2.2供试品溶液制备取本品1O片,除去包衣, 精密称定,研细,取约O.2g,精密称定;置具塞锥形瓶 中,精密加入体积分数7O乙醇100mL,密塞,称定 质量;超声处理(功率250W,频率40kHz)30min, 放冷,再称定质量;用7O乙醇补足减失的质量,摇 匀,滤过,取续滤液,即得. 2.2.3阴性对照溶液制备按处方比例和制剂工艺 制备缺黄芩的阴性对照样品,再按供试品溶液制备项 下制备,得黄芩苷阴性对照溶液. 2.3系统适用性实验分别精密吸取缺黄芩的阴性 对照液,供试品溶液,对照品溶液各进样1OL,注入 液相色谱仪,测定,结果在黄芩苷吸收峰处,阴性对照 无吸收,对测定结果无干扰(见图1). 2.4线性关系考察精密称取在6O?减压干燥4h 的黄芩苷对照品37.13mg,置于5OmL量瓶中,加体 积分数70乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成含黄 芩苷742.6mg?L的对照品储备液.精密量取上