【doc】剑叶龙血树根、茎、叶中血竭成分分析

【doc】剑叶龙血树根、茎、叶中血竭成分分析 剑叶龙血树根、茎、叶中血竭成分分析 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月?1545? 剑叶龙血树根,茎,叶中血竭成分分析 陈定芳,宋启示 (中国科学院西双版纳热带植物园中国科学院研究生院,云南昆明650223) 摘要:目的通过对比剑叶龙血树根,茎,叶成分与龙血竭成分间的异同及对剑叶龙血树根,茎,叶中龙血素A,B 的测定,寻找龙血竭原料的可能来源.方法薄层色谱法及高效液相色谱技术.结果剑叶龙血树根,茎,叶中均含 有微量的龙血素A,分别为:58,53,15g/g;叶中还含有微量的龙血素B,为2#g/g,而根,茎样品中未能检测到龙 血素B.结论从色谱峰的积分面积及保留时间来看,剑叶龙血树根,茎,叶成分与血竭原料有少许的相关性,但差 异显着;根,茎,叶3者间的化学组成成分也存在着显着差异,剑叶龙血树根,茎,叶中龙血素量都较低,不能直接用 作生产血竭的原料. 关键词:剑叶龙血树;血竭;龙血素;高效液相色谱 中图分类号:R282.6文献标识码:A文章编号:0253—2670(2005)10—1545—03 Analysisofloureirinsinroots,stems.andleavesofDracaenacDcJIlf咒cJIlf咒P咒f CHENDing—fang,SONGQi—shi (xishuanannal'ropicalBotanicalGarden,theGraduateSchool,ChineseAcademyofScience s,Kunming650223,China) Abstract:ObjectiveTheexperimentcomparedthechemicalcomponentsintheroots,stems,a nd leavesofDracaenacochinchinensiswiththoseintherawmaterialofDragonSblood,inordert ofindthe possiblerawmaterialofDragonSblood.MethodsTechnologyofthinlayerchromatography( TIC)and highperformanceliquidchromatography(HPIC).ResultsTheresultsshowedthattheroots,stems, andleavesofD.('ochinchinensisjustcontainedsmallamountofloureirinA.thecontentsofloureirinAof thethreesamplesare:58.53,and15/*g/g,respectively.IoureirinBwasonlydetectedintheleaveswith contentof2/*g/g.ConclusionFromtheanalysisofpeakareasandtheretentiontime,thereareonly slightcorrelationsamongthecomponentsofthefoursamplesandthechemicalcomponentsamongthe roots,stem,and1eavesaredifferent.Moreover,thereiStoo1owcontentof1oureirinsintheroots,stem, andleavestoberawmaterialofDragonSblood. Keywords:Dracaenacochinchinensis(Iour.)S.C.Chen;DragonSblood;loureirins;HPIC 血竭是一种传统的内服外用的活血中药,在中 国有上千年的使用历史,对于国产血竭的研究近年 也逐渐形成了系统全面的探讨,主要包括国产血竭 的基源植物,有效成分,临床应用及形成机制等等. 根据现有的认识,血竭是某些植物的一种次生代谢 产物,这些植物包括棕榈科(Palmae),龙舌兰科 (Agavaceae),豆科(Leguminosae)及大戟科(Eu— phorbiaceae).现在我国药厂生产,临床使用的龙血 竭主要是取材于龙舌兰科龙血树属的植物.一般认 为血竭是龙血树受到损伤后感染真菌等微生物,两 者相互作用产生某些生化反应,改变龙血树生理代 谢途径,从而刺激龙血树产生的一种具有防御作用 的代谢产物.在自然条件下,血竭形成缓慢,同时血 竭的基源植物龙血树在野生环境中资源储备少.随 着血竭在医学临床中应用范围的拓展,血竭有供不 应求的趋势,为了更好地利用血竭资源植物,同时保 证血竭稳质稳量的持续开发,本实验对剑叶龙血树 根,茎,叶中血竭成分作了检测,试图寻找血竭可能 的原料来源. l材料与方法 1.1供试材料:根,茎,叶均取自云南省勐仑镇中国 科学院西双版纳热带植物园内自然生长的剑叶龙血 树Dracaenacochinchinensis(Lour.)S.C.Chen. 龙血竭为西双版纳雨林制药厂用于加工生产龙 收稿日期:200411—20 基金项目:国家发展和改革委员会现代中药产业化々项资助 作者简介:陈定芳(1980一),女,湖南衡阳人,在读硕士,主要从事药用植物化学研 究.E—mail:chendf@xtbg.ac.cn *通讯作者宋启示Tel:(0871)5160902E—mail:songqs@xtbg.ac.cn ? 1546?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月 血竭胶囊的血竭块,是剑叶龙血树含竭木的乙醇提 取物. 1.2材料处理:分别称取一定量的剑叶龙血树根, 茎,叶(均已风干,剑叶龙血树根总质量为619.6g, 茎干总质量为200g,叶总质量为5495.8g),用工 业乙醇浸提3次,水浴加热,每次约8h,得到的初提 物再分别蒸馏浓缩.称量后(根浓缩物质量为164.4 g,茎干浓缩物质量为22.6g,叶浓缩物质量660.5 g)用甲醇洗出(准确记录洗出液的体积:根提取物的 洗出液为420mI,茎干提取物洗出液为28mI.叶 子提取物洗出液为1600mI),滤过后冷藏备用. 1.3薄层色谱法:使用氯仿一甲醇(9:1),加少量甲 酸或水在硅胶薄层板上进行色谱分离,展开1,2 次,用109/5浓硫酸乙醇溶液加热显色. 1.4高效液相色谱法 1.4.1仪器和试剂:日本岛津IC2010AH型高 效液相色谱仪.龙血素A对照品(本实验室分离得 到.经质谱和核磁共振鉴定结构),龙血素B(雨林制 药厂用于质检的样品),乙腈(色谱纯),其他试 剂均为分析纯. 1.4.2色谱条件:色谱柱:20rbax—SB—C.柱(250 mnl×4.6mm);流动相:19/5冰醋酸溶液一乙腈(63: 37);检测波长:260nm;柱温:30左右;进样量:10 ,uI;体积流量:1mI/min. 1.4.3对照品溶液的制备:分别精密称取一定量的 龙血素A,B.用流动相溶液充分溶解,滤过,超声波 处理15,20min.再定容到一定体积备用. 1.4.4供试品溶液的制备:精密称取龙血竭0.250 g,用乙腈一19/5冰醋酸(50:50)溶解,滤过后超声波 处理15min,再定容到25mI,充分摇匀备用.分别 量取一定体积的剑叶龙血树根,茎,叶样品溶液,用 甲醇一水(4:6)充分溶解,滤过,然后定容到一定体 积备用(根提取物贮备液取1mI,用蒸馏水定容到 5mI备用;茎提取物贮备液直接取样2mI;叶提取 物贮备液取1mI,用蒸馏水定容到2mI备用). 根,茎,叶的备用溶液分别编号为DMR,DS,DI. 1.4.5线性关系考察:分别精密称取适量的龙血素 A,B,用流动相充分溶解.使龙血素A,B的质量浓 度分别为:0.334,0.168mg/mI;0.840,0.320mg/ nlI;0.310,0.052mg/mI.龙血素A,B对照液分别 以10I进样,在上述色谱条件下,测定其峰面积积 分值.以峰面积积分值(y)对进样量(x)进行回归, 结果表明龙血素A在3.1,8.4g,龙血素B在 0.52,1.68g呈现良好的线性关系.龙血素A,B 的回归方程分别为:Y===4.033×10X一3.778× 10,r===0.9878;Y一2.926×10X一2.259×10, r一0.9664. 2结果 :在氯仿一甲醇(9:1,加少量的甲酸 2.1薄层色谱 或水)的溶剂系统中展开1,2次,用10硫酸乙醇 溶液显色,龙血竭,剑叶龙血树根,茎,叶酒精提取物 在硅胶薄层板上均能较好地展开,Rf值在0.6, 0.85,并且从显色的结果(显色点的大小,形状及颜 色)可看出,这4者的成分组成间有一定的相关性, 有共同的成分,但总的来说,4者的化学成分组成间 存在较大差别.结果见图1. a noo?O . DOOO .=, 言O0 暑口Q 口 3o l23456 1一龙血竭2一剑叶龙血树根提取物3一剑叶龙血树茎提取物 4一剑叶坨血树叶提取物5一龙血素A6龙血素B 1Dragonsblood2-extractsofrootsofD."himhinensis 3extractsofstenlsofD.ffMhimhinensis4extractsof leavesofD.'fMhimhinensis5-loureirinA6-loureirinB 图1龙血竭,剑叶龙血树根,茎,叶提取物薄层色谱图 Fig.1TLCofrawmaterialofDragon'Sblood andextractsfromroots,stem,and leavesofD.cDcIlli,lcIll,l,l 2.2高效液相色谱:从高效液相色谱分析的各个峰 积分面积与保留时间来看(图2),剑叶龙血树的根, 茎,叶成分与血竭原料的成分仅存在少量的相似性, 它们之间在化学组成上的差异是显着的.根据高效 液相色谱的定量分析,得知剑叶龙血树根,茎,叶样 品中均含有一定量的龙血素A(表1),其质量分数 分别为58,53,15,ug/g,而对于龙血素B,因为根,茎 样品质量浓度过低,未能检测出来,只在剑叶龙血树 叶的提取物中显示出有少量的存在,其质量分数2 g/g.剑叶龙血树根中龙血素A的量比茎,叶中的 龙血素A量要大,但根,茎,叶中龙血素的量均远远 小于龙血竭中龙血素的量. 3讨论 中草药ChineseFraditionalandHerbalI)rugs第36卷第10期2005年10月?1547? 季 斗+l十一一十一————— iB ,…,,H. 05l0l0j303j lc ll【!fl —— I一^L——,L—lT—T+0十{十一L_L+L1—4—上_一.+一——一一 05l0l5O53035 D i}:I 一焉敷_'—LJ—-t,—斗—— . ,龙血素A和BI3一龙m竭C一剑叶龙血树根提取物I)剑 叶龙血树茎提取物E一剑叶尼血树叶提取物 AIoureirinsAandI{B—rawmaterialofI)ragonsbloodL, extramsofrootsof).f0'kinfkinensisDextractofStPIllof. '0【kin'him'nsisEextractsofleavesof,)."?himhim-nsA 图2血竭原料及剑叶龙血树根,茎,叶乙醇提取物HPLC图 Fig.2HPLCChromatogramofrawmaterialof DragonSbloodandextractsfromroots. stem,andleavesofD.cochinchinensis 表l血竭原料,剑叶龙血树根,茎,叶提取物HPLC数 据及样品中龙血素A和B(一3) TablelLoureirinsAandBofextractsofroots.stem. andleavesofD.cDccPi(一3) 提取物中龙血素/【nag?g)样品中龙血素/【g?g) 种———— ABAI{ 随着血竭应用范围的扩增及市场需求的加大. 仅仅依靠现存野生龙血树进行原料取材已不能满足 血竭的生产.为了保证龙血竭优质优量的市场供应. 血竭的形成机制及原料来源问题亟待解决.近年来 有关血竭的成分组成及临床药理药效等已有较全面 系统的研究.现行的龙血竭质检标准是以龙血素B 为准.其质量分数须大于或等于0.4.本实验通过 高效液相色谱技术对剑叶龙血树根,茎,叶化学组成 的分析比较.检测了3者中的坨血素.期望能为解决 血竭的原料来源问题提供一定的依据.从上述的实 验结果来看.剑叶龙血树中的龙血素在根,茎,叶中 逐渐递减.初步分析血竭的形成原因可能与植物组 织器官的功能有关.剑叶龙血树根中的龙血素A比 茎,叶中的高.这可能与根作为植物养分器官从土壤 中汲取营养成分提供给植株.长期跟土壤中微生物 接触有一定的关系.而剑叶龙血树叶及茎部分作为 植物的光合器官和运输的中转部分.裸露在空气中. 与微生物接触相对减少.血竭的形成可能相对缓慢. 总的说来.剑叶龙血树根,茎,叶的化学成分组成均 与龙血竭有很大的差异.且龙血素A,B过低.其提 取物中龙血素B质量分数均低于0.4的质量标 准.它们都不能直接用作血竭原料.对于剑叶龙血树 茎的化学组成曾有实验作过一定研究.但对于茎中 的各个成分间及其成分与血竭间的相关性未作深入 的分析.本实验事正进一步分析剑叶龙血素树叶子 的化学成分及与剑叶龙血树相关的真菌等微生物代 谢产物的组成成分.试图寻找剑叶龙血树根茎叶成 分与血竭的内在联系及真菌等微生物与龙血树问的 化学联系.为解决血竭的原料来源问题提供可能的 途径与方法. References: [1jZhuH.HuangHB.rrJanH.Rcsearchesof1htclwnfical"? stituentsofI)ragonsblood[J..,(m?1i('olladit('kin M",【广l『可中学院).20o2.j():89【1【1. [!]XieZW._rhetextualresear~'h…1originalplanlsofI)ragon bloodJ.,(,kinM",Mc,?'(【{lI药材).19.12(1:10. [3]MimakiY.KurodaM.TakaaslfiY,",.s1croidalsaponills fromthestemsof1)rat?.,』?"??[J].1'k,_,fJl^lmislrx-. 19q8.7(71.1:1—1. 刍皂刍雩?皂刍g会皂刍皂刍8刍霉会霉刍毫含皂刍毫刍皂各皂;皂各皂皂刍壁;皂各g刍皂刍皂;,g刍曼;雹;s 欢迎订阅《中草药》杂志2005年增刊