【doc】剑叶龙血树根、茎、叶中血竭成分分析
剑叶龙血树根、茎、叶中血竭成分分析 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月?1545? 剑叶龙血树根,茎,叶中血竭成分分析
陈定芳,宋启示
(中国科学院西双版纳热带植物园中国科学院研究生院,云南昆明650223) 摘要:目的通过对比剑叶龙血树根,茎,叶成分与龙血竭成分间的异同及对剑叶龙血树根,茎,叶中龙血素A,B
的测定,寻找龙血竭原料的可能来源.方法薄层色谱法及高效液相色谱技术.结果剑叶龙血树根,茎,叶中均含
有微量的龙血素A,分别为:58,53,15g/g;叶中还含有微量的龙血素B,为2#g/g,而根,茎样品中未能检测到龙
血素B.结论从色谱峰的积分面积及保留时间来看,剑叶龙血树根,茎,叶成分与血竭原料有少许的相关性,但差
异显着;根,茎,叶3者间的化学组成成分也存在着显着差异,剑叶龙血树根,茎,叶中龙血素量都较低,不能直接用
作生产血竭的原料.
关键词:剑叶龙血树;血竭;龙血素;高效液相色谱
中图分类号:R282.6文献标识码:A文章编号:0253—2670(2005)10—1545—03 Analysisofloureirinsinroots,stems.andleavesofDracaenacDcJIlf咒cJIlf咒P咒f CHENDing—fang,SONGQi—shi
(xishuanannal'ropicalBotanicalGarden,theGraduateSchool,ChineseAcademyofScience
s,Kunming650223,China)
Abstract:ObjectiveTheexperimentcomparedthechemicalcomponentsintheroots,stems,a
nd
leavesofDracaenacochinchinensiswiththoseintherawmaterialofDragonSblood,inordert
ofindthe
possiblerawmaterialofDragonSblood.MethodsTechnologyofthinlayerchromatography(
TIC)and
highperformanceliquidchromatography(HPIC).ResultsTheresultsshowedthattheroots,stems,
andleavesofD.('ochinchinensisjustcontainedsmallamountofloureirinA.thecontentsofloureirinAof
thethreesamplesare:58.53,and15/*g/g,respectively.IoureirinBwasonlydetectedintheleaveswith
contentof2/*g/g.ConclusionFromtheanalysisofpeakareasandtheretentiontime,thereareonly
slightcorrelationsamongthecomponentsofthefoursamplesandthechemicalcomponentsamongthe
roots,stem,and1eavesaredifferent.Moreover,thereiStoo1owcontentof1oureirinsintheroots,stem,
andleavestoberawmaterialofDragonSblood.
Keywords:Dracaenacochinchinensis(Iour.)S.C.Chen;DragonSblood;loureirins;HPIC 血竭是一种传统的内服外用的活血中药,在中
国有上千年的使用历史,对于国产血竭的研究近年
也逐渐形成了系统全面的探讨,主要包括国产血竭
的基源植物,有效成分,临床应用及形成机制等等.
根据现有的认识,血竭是某些植物的一种次生代谢
产物,这些植物包括棕榈科(Palmae),龙舌兰科
(Agavaceae),豆科(Leguminosae)及大戟科(Eu—
phorbiaceae).现在我国药厂生产,临床使用的龙血
竭主要是取材于龙舌兰科龙血树属的植物.一般认
为血竭是龙血树受到损伤后感染真菌等微生物,两
者相互作用产生某些生化反应,改变龙血树生理代
谢途径,从而刺激龙血树产生的一种具有防御作用
的代谢产物.在自然条件下,血竭形成缓慢,同时血
竭的基源植物龙血树在野生环境中资源储备少.随
着血竭在医学临床中应用范围的拓展,血竭有供不 应求的趋势,为了更好地利用血竭资源植物,同时保 证血竭稳质稳量的持续开发,本实验对剑叶龙血树 根,茎,叶中血竭成分作了检测,试图寻找血竭可能 的原料来源.
l材料与方法
1.1供试材料:根,茎,叶均取自云南省勐仑镇中国 科学院西双版纳热带植物园内自然生长的剑叶龙血 树Dracaenacochinchinensis(Lour.)S.C.Chen.
龙血竭为西双版纳雨林制药厂用于加工生产龙
收稿日期:200411—20
基金项目:国家发展和改革委员会现代中药产业化々项资助 作者简介:陈定芳(1980一),女,湖南衡阳人,在读硕士,主要从事药用植物化学研
究.E—mail:chendf@xtbg.ac.cn *通讯作者宋启示Tel:(0871)5160902E—mail:songqs@xtbg.ac.cn
?
1546?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第10期2005年10月
血竭胶囊的血竭块,是剑叶龙血树含竭木的乙醇提 取物.
1.2材料处理:分别称取一定量的剑叶龙血树根, 茎,叶(均已风干,剑叶龙血树根总质量为619.6g, 茎干总质量为200g,叶总质量为5495.8g),用工
业乙醇浸提3次,水浴加热,每次约8h,得到的初提 物再分别蒸馏浓缩.称量后(根浓缩物质量为164.4 g,茎干浓缩物质量为22.6g,叶浓缩物质量660.5 g)用甲醇洗出(准确记录洗出液的体积:根提取物的 洗出液为420mI,茎干提取物洗出液为28mI.叶
子提取物洗出液为1600mI),滤过后冷藏备用.
1.3薄层色谱法:使用氯仿一甲醇(9:1),加少量甲 酸或水在硅胶薄层板上进行色谱分离,展开1,2 次,用109/5浓硫酸乙醇溶液加热显色. 1.4高效液相色谱法
1.4.1仪器和试剂:日本岛津IC2010AH型高 效液相色谱仪.龙血素A对照品(本实验室分离得 到.经质谱和核磁共振鉴定结构),龙血素B(雨林制 药厂用于质检的
样品),乙腈(色谱纯),其他试 剂均为分析纯.
1.4.2色谱条件:色谱柱:20rbax—SB—C.柱(250 mnl×4.6mm);流动相:19/5冰醋酸溶液一乙腈(63: 37);检测波长:260nm;柱温:30左右;进样量:10 ,uI;体积流量:1mI/min.
1.4.3对照品溶液的制备:分别精密称取一定量的 龙血素A,B.用流动相溶液充分溶解,滤过,超声波 处理15,20min.再定容到一定体积备用. 1.4.4供试品溶液的制备:精密称取龙血竭0.250 g,用乙腈一19/5冰醋酸(50:50)溶解,滤过后超声波 处理15min,再定容到25mI,充分摇匀备用.分别 量取一定体积的剑叶龙血树根,茎,叶样品溶液,用 甲醇一水(4:6)充分溶解,滤过,然后定容到一定体 积备用(根提取物贮备液取1mI,用蒸馏水定容到 5mI备用;茎提取物贮备液直接取样2mI;叶提取 物贮备液取1mI,用蒸馏水定容到2mI备用). 根,茎,叶的备用溶液分别编号为DMR,DS,DI. 1.4.5线性关系考察:分别精密称取适量的龙血素 A,B,用流动相充分溶解.使龙血素A,B的质量浓 度分别为:0.334,0.168mg/mI;0.840,0.320mg/
nlI;0.310,0.052mg/mI.龙血素A,B对照液分别
以10I进样,在上述色谱条件下,测定其峰面积积 分值.以峰面积积分值(y)对进样量(x)进行回归, 结果表明龙血素A在3.1,8.4g,龙血素B在 0.52,1.68g呈现良好的线性关系.龙血素A,B 的回归方程分别为:Y===4.033×10X一3.778× 10,r===0.9878;Y一2.926×10X一2.259×10, r一0.9664.
2结果
:在氯仿一甲醇(9:1,加少量的甲酸 2.1薄层色谱
或水)的溶剂系统中展开1,2次,用10硫酸乙醇 溶液显色,龙血竭,剑叶龙血树根,茎,叶酒精提取物 在硅胶薄层板上均能较好地展开,Rf值在0.6, 0.85,并且从显色的结果(显色点的大小,形状及颜 色)可看出,这4者的成分组成间有一定的相关性, 有共同的成分,但总的来说,4者的化学成分组成间 存在较大差别.结果见图1.
a
noo?O
.
DOOO
.=,
言O0
暑口Q
口
3o
l23456
1一龙血竭2一剑叶龙血树根提取物3一剑叶龙血树茎提取物
4一剑叶坨血树叶提取物5一龙血素A6龙血素B 1Dragonsblood2-extractsofrootsofD."himhinensis
3extractsofstenlsofD.ffMhimhinensis4extractsof
leavesofD.'fMhimhinensis5-loureirinA6-loureirinB
图1龙血竭,剑叶龙血树根,茎,叶提取物薄层色谱图
Fig.1TLCofrawmaterialofDragon'Sblood
andextractsfromroots,stem,and leavesofD.cDcIlli,lcIll,l,l 2.2高效液相色谱:从高效液相色谱分析的各个峰
积分面积与保留时间来看(图2),剑叶龙血树的根,
茎,叶成分与血竭原料的成分仅存在少量的相似性,
它们之间在化学组成上的差异是显着的.根据高效
液相色谱的定量分析,得知剑叶龙血树根,茎,叶样
品中均含有一定量的龙血素A(表1),其质量分数
分别为58,53,15,ug/g,而对于龙血素B,因为根,茎
样品质量浓度过低,未能检测出来,只在剑叶龙血树
叶的提取物中显示出有少量的存在,其质量分数2
g/g.剑叶龙血树根中龙血素A的量比茎,叶中的
龙血素A量要大,但根,茎,叶中龙血素的量均远远
小于龙血竭中龙血素的量.
3讨论
中草药ChineseFraditionalandHerbalI)rugs第36卷第10期2005年10月?1547?
季
斗+l十一一十一—————
iB
,…,,H.
05l0l0j303j
lc
ll【!fl
——
I一^L——,L—lT—T+0十{十一L_L+L1—4—上_一.+一——一一 05l0l5O53035
D
i}:I
一焉敷_'—LJ—-t,—斗——
.
,龙血素A和BI3一龙m竭C一剑叶龙血树根提取物I)剑
叶龙血树茎提取物E一剑叶尼血树叶提取物
AIoureirinsAandI{B—rawmaterialofI)ragonsbloodL, extramsofrootsof).f0'kinfkinensisDextractofStPIllof.
'0【kin'him'nsisEextractsofleavesof,)."?himhim-nsA 图2血竭原料及剑叶龙血树根,茎,叶乙醇提取物HPLC图
Fig.2HPLCChromatogramofrawmaterialof DragonSbloodandextractsfromroots. stem,andleavesofD.cochinchinensis 表l血竭原料,剑叶龙血树根,茎,叶提取物HPLC数
据及样品中龙血素A和B(一3)
TablelLoureirinsAandBofextractsofroots.stem.
andleavesofD.cDccPi(一3)
提取物中龙血素/【nag?g)样品中龙血素/【g?g)
种————
ABAI{
随着血竭应用范围的扩增及市场需求的加大.
仅仅依靠现存野生龙血树进行原料取材已不能满足
血竭的生产.为了保证龙血竭优质优量的市场供应.
血竭的形成机制及原料来源问
亟待解决.近年来
有关血竭的成分组成及临床药理药效等已有较全面
系统的研究.现行的龙血竭质检标准是以龙血素B
为准.其质量分数须大于或等于0.4.本实验通过
高效液相色谱技术对剑叶龙血树根,茎,叶化学组成
的分析比较.检测了3者中的坨血素.期望能为解决
血竭的原料来源问题提供一定的依据.从上述的实 验结果来看.剑叶龙血树中的龙血素在根,茎,叶中 逐渐递减.初步分析血竭的形成原因可能与植物组 织器官的功能有关.剑叶龙血树根中的龙血素A比 茎,叶中的高.这可能与根作为植物养分器官从土壤 中汲取营养成分提供给植株.长期跟土壤中微生物 接触有一定的关系.而剑叶龙血树叶及茎部分作为 植物的光合器官和运输的中转部分.裸露在空气中. 与微生物接触相对减少.血竭的形成可能相对缓慢. 总的说来.剑叶龙血树根,茎,叶的化学成分组成均 与龙血竭有很大的差异.且龙血素A,B过低.其提 取物中龙血素B质量分数均低于0.4的质量标 准.它们都不能直接用作血竭原料.对于剑叶龙血树 茎的化学组成曾有实验作过一定研究.但对于茎中 的各个成分间及其成分与血竭间的相关性未作深入 的分析.本实验事正进一步分析剑叶龙血素树叶子 的化学成分及与剑叶龙血树相关的真菌等微生物代 谢产物的组成成分.试图寻找剑叶龙血树根茎叶成 分与血竭的内在联系及真菌等微生物与龙血树问的 化学联系.为解决血竭的原料来源问题提供可能的 途径与方法.
References:
[1jZhuH.HuangHB.rrJanH.Rcsearchesof1htclwnfical"? stituentsofI)ragonsblood[J..,(m?1i('olladit('kin M",【广l『可中学院).20o2.j():89【1【1.
[!]XieZW._rhetextualresear~'h…1originalplanlsofI)ragon
bloodJ.,(,kinM",Mc,?'(【{lI药材).19.12(1:10. [3]MimakiY.KurodaM.TakaaslfiY,",.s1croidalsaponills
fromthestemsof1)rat?.,』?"??[J].1'k,_,fJl^lmislrx-.
19q8.7(71.1:1—1.
刍皂刍雩?皂刍g会皂刍皂刍8刍霉会霉刍毫含皂刍毫刍皂各皂;皂各皂皂刍壁;皂各g刍皂刍皂;,g刍曼;雹;s
欢迎订阅《中草药》杂志2005年增刊