varian HPLC中文手册363操作手册

安装／使用／维护／故障诊断 安装／使用／维护／故障诊断 ProStar 363 Detector VARIAN Varian Analytical Instruments 2700 Mitchell Drive Walnut Creek, CA 94598-1675/USA ProStar 363 荧光检测器 使用操作手册 © Varian,Inc. 2000 03-914875:1 目 录 简介…………………………………………………………………………………………1 概述……………………………………………………………………………………….1 安装……………… 概述……… 检查………. 开箱………. 实验室要求………. 接地……… 场地….. 防护盖安装………. 防护门的安装与拆卸……… 电源线及信号线的连接（后面板）………… 流动相管路连接…………… 检测器及背压器的连接……. 氙灯的安装及调整…… 系统描述…………….. 概述……….. 光学部件……. 键盘和显示器…….. 后面板………. 流动池……… 氙灯…….. 操作………. 启动电源………. 液晶显示器 一般操作……. 选择串口通讯通道……… 设定仪器工作条件……….. 波长设置………. 自动归零的调整………. 记录标识…………. 时间程序………… Utilities设置……. 光谱参数设置及输出…… 光谱收集…….. 记录仪及光谱参数设置…….. GLP功能选择………. 时间程序操作范例……… 检测器的关闭……….. 流动池的冲洗………… 维护维修及故障检查…………………… 氙灯的更换………. 冷却氙灯……. 灯的更换……… 氙灯的安装……. 氙灯位置调整……… 氙灯位置细调… 流动池的维护维修….. 流动池的检查清洗…………. 流动池的拆卸……….. 流动池的清洗…… 流动池的安装………. 流动池检漏………… 流动池存放…………. 保险丝的更换……….. 故障的检查、判断………. 出错信息提示………. 附录…………………… 技术指标………. 附件……………. 拉曼散射……….. 高浓度样品…………. 插 图 图1 ProStar 363 荧光检测器…………………… 图2 电源插座及极性………… 图3 防护门及防护盖的固定…………. 图4 防护门及防护盖的安装………… 图5 防护门的安装…… 图6 后面板……….. 图7 功能模块流程图……….. 图8 键盘……… 图9 流动池的连接……….. 图10 氙灯位置………… 图11 偏移实例………… 图12 光源盖的开启……….. 图13 氙灯及支架…………. 图14 灯球突出物………… 图15 安装在支架上的氙灯………. 图16氙灯支架的安装………. 图17 连接阳极和阴极电缆………. 图18 灯位置调整…………. 图19 激发光束观察…….. 图20 流动池的清洗………. 图21 流动池………. 图22 流动池的拆卸………. 图23 流动池的安装……….. 图24保险丝的更换………. 图25 水的拉曼光谱…………. 图26 高浓度样品…………. 图27 荧光的重吸收……….？？？ 图28 荧光光谱的测定实例………… 表 格 表1 输入输出端口……………. 表2 模拟信号衰减…………… 表3 键盘………….. 表4 故障诊断……. 表5 每一个激发波长的拉曼光谱峰的位置………………… 简 介 概要 图1 ProStar 363 荧光检测器 液相色谱系统中，ProStar 363 荧光检测器可以在单独使用，也可以在工作站Star Workstation的控制下使用。 在单独使用的情况下，所有用户的操作要通过仪器前面板上的按键来完成，所有输入的操作命令，都显示在规格为2行、40个字符的显示器上。在用户指定的激发和发射波长下，检测器将样品所发出的信号，以模拟信号方式输出到外部数据系统、工作站、积分仪或是记录仪。本操作手册将引导用户以单独使用的方式来完成该检测器的安装和使用。 ProStar 363 荧光检测器的特征： · 363检测器可以以积木方式同其它模块堆积在一起，以节省空间 · 在所有波长下都具有高灵敏度 · 具有扫描功能，以确定最佳的激发和发射波长 · 激发和发射波长可根据时间进行编程 · 工作站控制部分，参考Star Workstation使用手册 安 装 概要 ProStar 363 荧光检测器的积木式模块化设计，可以将其安装在任一位置，而不会受到电源线及信号线长度的影响。为了液体流路的死体积尽可能的小，在检测器安装连接时，应使柱子出口到流动池的管路尽可能的短。 流动池的接口（进口和出口管）位于前面板上。 所有的电源线及信号线连接均在后面板上，电源开关位于前面板上。通过本手册，可预先按安装要求，作好安装准备工作，仪器在安装完毕后，若要将其重新安置到一个新的场所，请通知所在地的瓦里安销售代表，或是最近的瓦里安维修办公室。 在仪器拆箱之前，确信安放仪器的实验台足够结实、水平并能够承受整个仪器系统的重量。 仪器的接受检查 检查并打开事先由瓦里安公司提供的ProStar 预安装通知。为了将来作为参考，在此，我们再次作以重复 用户将收到一个装有仪器及附件包的单个纸箱，在打开纸箱之前，要查看在运输过程中，纸箱上是否有被损坏的痕迹，例如：水渍、箱角变形等，假如存在如上情况，不要拆箱，要将此情况反应给送货商及联系： Varian Chromatography Systems 2700 Mitchell Drive Wainut Creek,California 94598-1675 Attention:Manager of Customer Service Phone(925)930-2400 或是当地的瓦里安销售/服务中心 开 箱 搬起重物时，注意要避免身体背部扭伤或伤害 ！ 小心打开仪器包装，并将仪器安放到实验台上。 打开仪器包装后，要按照装箱单对仪器数量进行仔细检查核对。 假如有任何丢失或损坏，请联系最近的瓦里安经销商。 实验室要求 仪器安装所在实验室应符合如下要求： 电 源 电 压： 额定电压为 100-115V或是220-240V ±10% 频率： 额定频率为50或60Hz ±4% 功率： 检测器要求为360VA。一般来说，363检测器只是作为整个HPLC系统的一部分，因此对电源功率大小的要求取决于整个HPLC系统的配置情况，要确保电源功率满足整个系统的要求。 接 地 警告 要正确接地，以免触电！ 有电击危险 · 确保使用供应商或安装工程师提供的专用供电电缆。使用不正确的电缆可能会导致电击。 · 在IEC1010-1（国际电工委员会）附件H及IEC1010-1“插接类型”中，该仪器的分类级别为1，因此连接仪器的必须是带有接地的三芯供电线。 · 假如没有带接地的三芯供电线，则必须给仪器提供正确的接地方式。 要用三米以内，电阻小于100欧姆的接地线接地。 零线 火线 零线 火线 地线 地线针 15安培、120伏、60赫兹 220伏、50赫兹 地线（绿／黄或是绿色） 零线 （浅蓝或是白色） 火线（褐色或是黑色） 图2 电源插座的极性 假如仪器电源开关打开后，仪器不能启动，首先检查电源线连接是否正确，以及电源插头是否插在插座中。 安 放 ProStar 363荧光检测器属于精密仪器，在实验室中使用、搬动时要小心谨慎。打开仪器包装后，要将其安置在HPLC系统中适当的位置，仪器应放置在干净的平台上并远离： · 热源（例如：阳光直射，热排风口） · 风口（例如：敞开的门口，窗户或是空调风口） · 腐蚀性或是含有大量灰尘的空气 · 振动 · 可能有液体溅出的地方 将检测器放在坚实的试验台上，检测器后部应留有至少4英寸的自由空间，以便于仪器风扇的换气，该检测器应安置在符合如下条件的地方： · 最小宽度＝450mm · 最小长度＝650mm 放置检测器的试验台应至少能承重50Kg。 防护盖安装 假如ProStar363荧光检测器在积木式模块的最上方，防护盖应事先安装在该仪器模块的防护门上，假如不在堆积模块的最上方，则不要安装防护盖，只执行防护门的安装程序即可。 从配件盒中取出防护盖，除去保护膜，漏出胶粘剂部分，并将其粘到防护门上。按照图3所示，将防护门平置于一平台上，再如图4所示，将防护盖带有胶粘剂的部位，插到防护门内沿并压紧，确保防护盖与防护门的边缘齐平。 胶粘剂面向下 磁性门销 图3 防护门及防护盖的定位 磁性门销 保持防护门及防护盖两边的边缘齐平 图4 防护门及防护盖的安装 防护门的安装和拆卸 ProStar363的防护门可以安装到仪器的前面，将连接到流动池的液体流路管线掩盖起来，见图5 门销盘 磁性门销 图5 防护门的安装 对门定位，以使门的磁性门销能与门销盘吻合，将防护门上部的铰链栓插到上不相应的销孔中，轻轻的将防护门向下压，使防护门下边的铰链栓滑入下部相应的销孔中（如图5所示）后停止下压，防护门便可以门销为支点并能关闭。 若要拆下防护门，则轻压防护门并将其铰链从下部销孔中滑出，然后将防护门向上提出。 电源及信号线的连接（仪器后面板） 串行接口 电源插口 图6 后面板 检测器连接线在仪器的后面板上。 假如ProStar363由Star Workstation工作站控制，则用随机携带的串行线连（03-935462-01）接到ProStar363的后面板及工作站的串行接口，同样这根串行线的其它接口可同时连接到ProStar自动进样器、ProStar210／218或SD-1泵上。 如果ProStar363所采集的数据传送给Star Workstation工作站，则处理器或数据系统输出必须连接到泵上的任意一个通讯接口模块（CIM）上，或是模数转换设备（800盒或是ADC板）上。363荧光检测器通过接口卡（03-936156-01）连接到ADC板上。363荧光检测器通过模数转换板（CIM）接口（03-935922-01）连接到模数转换输入。 如果将363荧光检测器连接到其他的仪器上，可以通过其后面板上的接口连接到任何HPLC系统中并与其保持同步，其输入输出等相关解释说明见表1。 表1 输入／输出端口 名称 输入／输出 功能 描述说明 数据系统／处理器（Data System／Processor） 输出 为处理器提供模拟输出，满量程为1V 下述信号可以依照设定输出 · 每一时间点的荧光强度 · 存储光谱数据 记录仪（Recorder） 输出 为记录仪提供模拟输出，满量程为10mV 下述信号可以依照设定输出 · 每一时间点的荧光强度 · 存储光谱数据 准备好／占用(Ready／BusyOut) 输出 电位改变 检测器处于准备好状态时，处于高电位 错误（Error Out） 该项在此处无用 开始（Start In） 输入 闭合连接 闭合连接信号将启动ProStar363检测器的数据采集程序 自动归零（Autozero In） 输入 当有闭合信号输入时，自动归零功能被启动 在两接点短路至少1秒钟后，自动归零功能被启动 标记（Marker In） 输入 当有闭合信号输入时，插入标记功能被启动 在两接点短路至少1秒钟后，自动归零功能被启动此时，一个正向脉冲信号被输出到记录仪上 关灯（Lamp Off In） 输入 氙灯在有闭合信号输入时关闭 在两接点短路至少1秒钟后，氙灯关闭，系统将发出提示声音并显示提示信息，按下清除键，声音示警停止，灯重新点亮 表2 模拟信号衰减 荧光强度 光 谱 数据系统／处理器 输出端可输出当前的荧光强度或光谱（满量程电压为1V） 输出当前波长下的荧光强度 光谱数据按照记录仪的SPECT RCD设定输出 记录仪 该输出端用于记录仪，满量程为10mV。荧光强度量程范围为1-1000，可以从记录仪“输出参数”菜单中设定（增幅为1） 当前指定波长下的荧光强度输出到积分仪 光谱数据按照记录仪的SPECT RCD设定输出 液路连接 由用户连接的流动相管路仅限于从柱出口到流动池入口的一段，该多要求有很小的死体积及容量，并且尽可能的要短。 检测器出口背压终端器 安装ProStar363检测器后的背压终端器，包含在其标准附件包中，背压器（03-919393-00）已由工厂组装好，用户要将其连接到流动池上。流动池后的背压终端器保持40psi背压，以免在流动池光路中形成气泡而造成基线不稳定。 注意刻在背压终端器上的箭头方向，箭头方向应与流动相流向的保持一致，带有螺纹的塑胶接头用手即可旋紧并不会泄漏。 在背压终端器入口和出口两端大约连接有长48英寸、直径为1／16英寸的特氟隆管，在入口的一端配有一个塑胶接头，通过它可以将管连接到检测器的流动池上。入口管可从背压终端器上摘下，并且可不经背压终端器而直接连接到流动池上。出口管即可直接放到废液容器，也可以将管子除去而将背压终端器直接放到废液容器中。 背压终端器的压力不可调整，假如背压终端器失去作用后或是堵塞后，则用新的40psi的背压终端器（03-919239-90）替换旧的即可。 氙灯的安装和调整 安装的最后是安装和调整氙灯。其步骤和更换氙灯的程序一样，参考更换氙灯部分（？？页）的描述。 系 统 描 述 概 述 本章节对ProStar363荧光检测器单独使用、并完全从仪器前面板进行时间编程控制进行了描述，当该仪器被Star Workstation控制使用时，则在其显示器的右上角显示[L]标志。有关从工作站控制该检测器的信息，请参阅工作站使用手册部分。 光 学 部 分 样品(流动池) 漫反射光栅 氙 灯 监视器(二极管) 光电倍增管 电路部分 光路部分 图7 功能模块示意图 图7中显示的是光学模块组件，氙灯的光源被聚焦后到激发单色器然后被凹形？？光栅散射。只有指定波长的光能通过出口狭缝，然后照射到样品上。 荧光（发射光）进入发射光单色器，被单色器散射后，被选定的照射到检测器的光电倍增二极管上。监视端检测器（光电二极管）测量激发光强度来作为时间的一个函数，并对灯的光强进行校正。 键盘和显示器 仪器所需所有数据的输入、参数的更改都要通过前面板上的按键来完成（见图8），每个键代表的意义见表3。有关每个按键的其他的信息，详见操作部分。 图8 键盘 表3 键盘 按 键 功 能 按键 功 能 WaveLength 波 长 用于设定激发和荧光波长 ● 用于输入小数点 Start／ Stop 启动／停止 启动（停止）时间程序 启动（停止）储存光谱的模拟输出 Clear 清 除 用于清除当前输入到显示器、但未确认的数据，例如：清除已输入但未确认的数据 也用于清除仪器给出的出错信息，使仪器重新复位 Auto Zero 自动归零 强制设定当前波长下的荧光强度为零点 Delete 删 除 在编辑事件时，用于删除所要废除的项目 Maker 标 识 在记录仪输出时插入一个正向信号 Spect Param 光谱参数 用于设置激发扫描范围和荧光扫描范围 Time Program 时间程序 允许按阿拉伯数字选择方法并对其进行编辑 Acquire Spectrum 光谱采集 在指定的波长下采集光谱并储存在内存中，参见光谱参数里的指定扫描条件部分 Param Set 参数设置 该项用于选定时间常数、光电倍增管的电压、发射带宽，不管是否使用了时间程序以及灯的开关与否 Output Param 输出参数 用于指定记录仪的满量程范围、输出速度及确定输出那一个光谱 Utility／ Setup 选项／ 设置 设置偏移值及访问显示模式 假如在仪器开启时按下多功能键，可以为该模块设置串行口地址。该项在与工作站连用时有用 Escape （Lock Off） 退出 （解除锁定） （1） 由数据输入模式反回到屏幕显示状态 （2） 用于中断光谱记录 （3） 但键盘锁定时，用于解除键盘锁定 GLP 用于键盘锁定设定、检查灯的能量、查阅氙灯使用日志 Enter 确认键 用于所设置参数及数据的确认 ▲ ▼ 用于访问屏幕下一页或屏幕上一页 0 to 9 用于数值输入 后 面 板 有关后面板各接头及其各自功能的描述详见安装部分 流 动 池 流动池安装在检测器的右边（见图 9） 图 9 流动池的连接 流动池的连接可在其前面板上防护盖的后面完成，它为光从激发光单色器进入及直接进入（参考）监视器提供了一个通路。除此之外，流动池上还有一个狭缝，它可以让荧光通过并进入发射光单色器，流动相从流动池的底部流向顶部，尽可能减小气泡滞留在流动池内的可能性，同样背压限流器也要安装在流动池出口管线的后面，已阻止气泡的形成。 氙 灯 如图10 所示，一个150W的氙灯安装在仪器右边、流动池的后面。 图10 氙灯的位置 氙灯安装在一个可移动的支架上，并且可以通过仪器右边、灯下方的三个螺丝钉对灯的位置进行调节。利用这三个螺丝钉可对灯的上下、左右及前后三个方向进行调节。对于要获得高的光通量及由此获得的高灵敏度来说，调整灯的位置是很重要的。 操 作 开启电源 打开检测器的电源开关。 当仪器开启时，将执行一个初始化测试步骤，在一起初始化期间，氙灯被点亮、单色器被初始化，同时其输出信号自动归零。 注意： 在该检测器启动后，本部分描述的一系列事件是自动被执行的， 假如仪器被启动后的三分钟内，在液晶显示器（LCD）上没有状态显示，或是显示错误信息，则请参阅维护与故障诊断部分。 液晶显示器（LCD） 经过短时间的停滞，显示器将显示如下： 在此期间，仪器将依次执行单色器初始化、开灯及自动归零等一系列操作。 正常显示状态（FL简要说明荧光输出） 1. 显示当前选择的方法 。 2. 氙灯被开启时，屏幕上显示“Xe”符号，当关闭时，则显示“OFF”符号。 3. 地址指示器显示ProStar 363 检测器的串行地址。该地址仅同工作站通讯时有用。 4. 状态指示器表示当前系统的状态。当显示“I”时，表示检测器处于初始化状态；当显示“R”时，表示检测器正在运行时间程序；当显示“B”时，表示显示器正处于“忙”的工作状态；当显示“L”时，表示处于锁定状态。当ProStar363被Star Workstation工作站控制时，同样显示“L”标志符。 在初始化进程结束后，仪器应预热大约30分钟后才能达到给定指标后可立即进行如下操作。 1. 用数字键及确认键输入数值 2. Clear键可清除但前已输入但未确认的数据（例如：如果已输入一个错误的数据，但是还没有按确认键，即可执行清除操作。若已按下确认键，再按清除键无效。 3. 如果接受当前的设置，则按下确认键或时按下“▼”键访问下一显示页。“▼”及“▲”键用于访问上一显示页或下一显示页。 4. 当完成当前显示页的设定后，可按下退出键返回到状态显示页。 5. 假如时间程序没有运行，则可在任何时间执行光谱输出。如果光谱输出已开始并进行数据采集，则数据会自动北输出到积分仪。 一般操作 选择串口通讯通道 在仪器启动的同时按下以下按键即可访问串口通讯设置功能页面 开启仪器电源开关 设置功能页面将显示如下。 标志号（ID）代表了ProStar 363 在串口总线中的地址位置。地址范围从90到99，因此，标志“0”的意义为地址90，同样标志“4”的意义为地址94。在同一工作站中，每一台ProStar363都有各自不同的地址。 注意，显示在状态页面中的90、91、92、93等数字为地址的完整显示。若改变仪器的地址，按下确认键，则出现以下页面。 在此，可以输入0－9之间的任意数字，0为默认值。只有0－3能被工作站识别并被其转换为90－93。 关闭系统电源并重新开启，串口通讯地址设置完毕。 设定仪器条件 我们可以通过按下Param Set键（Param Set）唤出参数设置页面，仪器参数包括： · 时间常数（TIME CONSTANT） · 光电倍增管电压（PMT VOLTAGE－photomultiplier voltage） · 发射带宽（Em BANDWITH－emission bandwith） · 使用时间程序（USE TIME PROGRAM－selection of use/no-use of time program） · 灯模式（LAMP MODE－selection of lamp turn-on/off） 指定时间常数 该页显示的是当前时间常数值，默认值为3。时间常数值范围为1－5，可以使用数字键输入。用户可选用所需的值并按确认键输入。 如果已接受指定的时间常数，按下“▼”键，进入光电倍增管设置页面，或是再按下“▼”？？？（表示什麼意义）键进入监视页面。 另外，也可以按下Escape键不对当前设置作任何改变而返回监视页面。 指定光电倍增管的电压 页面显示的是仪器当前设定的光电倍增管的电压值，其默认值为2，其范围为1－3，可通过数字键来设置。 用户可选择自己所用的数值输入。 如果接受所设的光电倍增管的数值，则按下“▼”键进入发射带宽设定页面，或是按下“▲”键返回时间常数设置页面。按下Escape键，可不对当前设置作任何改变而返回监视页面。 指定发射带宽 页面显示的是当前设定的发射光单色器的带宽，默认值是1。 输入值 含 义 1 标准发射光单色器（15nm） 2 宽范围发射光单色器（30nm） 用户可选择合适的数值输入。 如果接受所输入的单色器带宽数值并确认后，可按下“▼”键，进入时间程序页面，或是按下“▲”键进入光电倍增管设置页面。按下Escape键，可不对当前设置作任何改变而返回监视页面。 指定所要用的时间程序 用户可选择合适的数值输入。 如果接受所输入的时间程序值并确认后，可按下“▼”键或确认键，进入灯模式页面，或是按下“▲”键进入带宽设置页面。按下退出键，可不对当前设置作任何改变而返回监视页面。按下Escape键，可不对当前设置作任何改变而返回监视页面。 选择灯模式 当前页面显示的是当前等的模式，其默认模式为1，即开启状态。 输入值 含 义 0 灯处于关闭状态 1 灯处于开启状态 用户可选择合适的数值输入。 如果接受所输入的灯模式值并确认后，仪器显示回到监视页面。按下“▲”键可返回时间程序页面。 波长范围设置 按下Wave Length键 设定激发波长 页面显示的是仪器当前激发波长值，默认值是250nm，用户可根据实际情况输入所用的激发波长值（范围为200－850nm）。 如果接受所输入的激发波长值并确认后，可按下“▼”键，进入荧光波长设置页面，或是按下“▲”键返回到监视页面。作为另外已一条途径，我们也可以按下Escape键不对当前设置作任何改变而返回到监视页面。 设定荧光波长 页面显示的是仪器当前荧光波长值，默认值是350nm，用户可根据实际情况输入所用的荧光波长值（范围为250－900nm）。 如果接受所输入的荧光波长值并确认后，可按下“▼”键，进入监视页面，或是按下“▲”键返回到激发波长设置页面。作为另外已一条途径，我们也可以按下Escape键不对当前设置作任何改变而返回到监视页面。 调整自动归零 按下Auto Zero键，调整荧光信号到零位。 该操作将影响仪器的读数显示及输出信号的水平位置。 为了修正基线的漂移或是需要将基线调整到零位，按下Auto Zero键即可。 在积分仪上插入标识线 按下Marker键，则会在积分仪上显示一条标识线。 在按下标识键后，将会在积分仪终端输出一个0.6mV的信号。本标识线可用于表示进样信号或是表示在测量过程中当前条件发生了改变。 时间程序 按下Time Program键，可选择或设置时间程序。 选择时间程序 在仪器运行过程中，如果激发或发射波长需要改变，可使用时间程序。在波长改变后，基线可自动回零或是保持在所预期的位置。 时间程序共计9个，每个可包含100个步骤（例如：一个时间程序可设置100个不同的步骤，或9个时间程序可使用11不个步骤？？？ 屏幕显示的是当前选用的时间程序号，默认时间程序号为1。时间程序号从1到9。在关闭仪器后，时间程序可继续保存在其内存中。 按下相应的数字键并确认键 为创建或经过编辑的时间程序输入相应的时间程序号，则对应的原时间程序号即被改变。按下Escape键不对当前设置作任何改变而返回到监视页面。 当选定一个时间程序号后，需要指定是对原程序进行编辑还是创建一个新的时间程序。 按下相应的数字键并确认。 设置时间程序 时间程序的第一行显示如下 输入合适的时间值（第一行的时间值是固定的，为0.0）并将光标分别移到激发波长和发射波长出，分别输入所用数值并确认。 在选定荧光波长后，光标将移到“BASE”位置。如果在波长改变时启用自动回零功能，让基线自动回到零位，则输入1；如果在波长改变时让基线继续保持在当前位置，则输入2。 注意：1 在时间程序中，第一步的时间（TIME）是0.0，并且不能更改或删除。在该步编辑完毕后的其他任意步骤中，时间程序的时间（TIME）位置才允许访问并被更改，在此，用户可使用0-600分钟内的任意时间。用户可以继续输入其它的时间程序行，时间程序一直执行到其最后一步骤所所指定的测量终止时间为止。 2 时间程序的每一步骤之间的时间间隔最小为0.3分钟。 仪器屏幕显示的是当前各项的设定值。 · 测量时间（TIME） · 激发波长（Ex） · 发射（荧光）波长（Em） · 基线处理（BASE） a) 测量时间输入范围：默认值为0.0分钟，其可用范围为0-600分钟，其最小增量为0.1分钟。 b) 激发波长输入范围：默认值为250nm，其可用范围为200-850nm。 c) 发射（荧光）波长输入范围：其默认值为350nm，其可用范围为250－900nm。 d) 基线处理输入范围：其默认值为1。 输入值 功能 含 义 1 自动归零 在波长改变后，自动归零功能将被执行 2 保持一致 不对当前输出信号作调整。 · 使用Clear键可清除已输入但没有确认的数值。 · 使用Delete键可清除已存在的数值，使用“▼”和“▲”键，可进入上一步骤和下一步骤。 · 设置完最后一步后，可按下Escape键返回到监视页面。 执行时间程序 按下Start／Stop键可执行已设置的时间程序，状态指示符“R”表示时间程序正在运行。 再按下Start／Stop键将终止当前正在执行的时间程序。 选项键使用设置 按下Uility／Setup键，可访问功能及设置项。 Uility页面提供了若干选项，包括设定信号偏移值、时间程序结束时是否自动关灯、选择激活（显示的）参数及选择屏幕显示（荧光、激发、发射）。 注：“由结束信号来关闭仪器氙灯”项是无效或是不被执行。 选择所用项目进行编辑 用数字键选择其所代表选项并确认。 可设定项目： · 偏移值 · 氙灯关闭和启动条件 －该项不可用。 · 设定监视器的显示模式。 屏幕显示的是当前的指定值，默认值为1。 输入值 含 义 1 偏移：输入1，用于设定偏移值 2 灯选项（此处无效）：输入2 设定氙灯关闭和启动条件 3 显示模式（信号模式）：输入3设定监视器显示模式 指定偏移值 用数字键输入并确认。屏幕显示的是当前指定值，默认值为0。 偏移值的作用，是为了在输出信号的实际测量值时，增加一个指定的数值，其设定范围是0-1000，设定时的增量为1。 积分仪或是数据处理器的负的输入值低限大约为-10mV，假如基线低于-10mV，则在谱图中无法对各组分峰进行积分（见图11a）。在此情况下，偏移的作用是用于调整基线，使采集的信号能在数据处理器的允许范围之内（见图11b）。 图11 偏移图例 设定监视器的显示模式 用数字键输入并确认。屏幕显示的是当前指定值，默认值为1。 输入值 含 义 1 荧光（Fl）模式 输入1，为荧光强度测量模式，也默认的显示模式 2 激发模式（Ex） 输入2，为激发能量检查模式 3 Em模式 输入3，为荧光能量检查模式 这些选项主要用于技术指标测定过程中来检查单色器波长的精确度。 设定光谱采集参数及输出 光谱采集参数及输出用于激发光和荧光收集。 设置光谱采集参数 按下Spect Param 键，可设置激发及荧光扫描范围（最大值和最小值）。最大扫描范围（从起始波长到终止波长）为350nm，可选择不同的数据采集（扫描）模式。 用数字键输入并确认。屏幕显示的是当前指定值，默认值为2。 输入值 扫描模式 含 义 1 Ex 输入1，定义激发扫描范围 2 Em 输入2，定义荧光扫描范围 注意： 当按下确认键后，系统将显示激发扫描波长范围或发射扫描范围分 指定激发扫描范围 指定开始波长（最小值）。 （本部分的信息与发射扫描模式没有必然关联）。 用数字键及确认键输入期望的波长值。屏幕显示的是当前指定值，默认值为200nm。其允许范围从200到800nm。使用“▲”和“▼” 向后可或向前移动到开始和结束波长设置位置。 指定结束波长（最大值） 用数字键及确认键输入期望的波长值。屏幕显示的是当前指定 值，默认值为550nm。其允许输入范围从“start wavelength+50”到“start wavelength+350”。 同样，指定荧光（也称作发射各）扫描范围的有关信息与指定激发光扫描范围之间没有必然联系。 指定起始波长（最小值） 用数字键及确认键输入期望的波长值。屏幕显示的是当前指定值，默认值为250nm。其允许范围从250到850nm。使用“▲”回到屏幕监视状态，按下“▼”键进入结束波长设置位置。 指定结束波长（最大值） 用数字键及确认键输入期望的波长值。屏幕显示的是当前指定值，默认值为600nm。其允许输入范围从“start wavelength+50”到“start wavelength+350”。使用“▲”和“▼” 向后可或向前移动到开始和结束波长设置位置。 注意激发和发射波长扫描范围的最大间隔（end wavelength 减start wavelength）是350nm。如果光谱采集范围超过350nm，则需要设定两个单独的扫描来进行。 采集光谱 当按下Acquire Spectrum键后，单色器将对本章中设定的波长范围进行扫描，设定光谱采集参数并输出，以及用指定的内存号保存光谱。在执行本操作时，检测器的流动池中应保留所要扫描的样品并将其流速设置为零。 指定一个存储文件 用数字键及确认键输入期望的文件号。开始扫描时屏幕显示如 下。仪器可存储8个光谱图，当前所用扫描模式将显示在MODE位置。我们所输入的光谱存储号用于代表所存储的扫描光谱。当指定光谱存储号后，以前存储在该位置的数据将被删除，新采集的光谱数据将被存储。 在进行扫描时，监视器将显示如下： 监视器将显示指定的光谱存储号及当前波长。光谱被存储后，Status屏幕将被显示，当关闭电源后，存储的光谱将不被保留。 注意： 仪器电源关闭后，仪器当前所存储的谱图将不被保存。 若要取消光谱数据采集，按下Escape键即可。 注意： 按下Escape键后，当前谱图将不保存。 设定记录仪和光谱输出参数 按下Output Param键，可进入参数设置页面并用于以下项目的设置： · 记录仪满量程范围 · 记录仪输出速度 · 输出数据 Output Param键可用于访问有关于记录仪和光谱输出等信息的页面。 用数字键输入所选项目并确认，当前屏幕显示的是所选的记录仪满量程项，其默认值是1。 输入值 含 义 1 RCD RANGE(记录仪量程范围) 输入1用以设定积分仪输出的满量程范围 2 RCD SPEED（记录仪速度） 输入2用以设定记录仪输出速度 3 SPECT RCD（光谱记录） 输入3用以设置数据输出

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用数字键输入所用量程并确认，该范围仅对记录仪输出有效，对处理器输出无效，其默认值为1000，它表明满量程10mV代表1000个荧光单位。假如输入100，则表明满量程10mV代表100个荧光单位。其意义是将所选的荧光范围扩展为记录仪的满量程10mV。 指定记录仪的输出速度 用数字键输入所选速度项并确认。当前显示的是所选定的记录仪输出速度，其默认值是2。 输入值 含 义 1 40 nm/min=1 2 60 nm/min=2 为数据输出指定光谱号 用数字键输入所选项并确认，屏幕显示的是当前指定的光谱号，其默认值是1，其选择范围是1到8。 指定背景数值 屏幕显示的是当前指定的背景数值，其默认值是0，其选择范围是0到8，可用数字键输入所选值，背景光谱值用于补偿、校正由于溶剂和流动池对测量所产生影响。在分析时，要输入正确的光谱校正数值，并且在改变溶剂或波长范围时，要采集一个新的光谱校正数值。 输入值 含 义 0 当选择0时，仪器采集光谱是不作背景校正。 1-8 选择1-8时，将从测量值中减掉指定的背景光谱值，并显示其结果值。 参数值输入完毕后，仪器屏幕将显示如下信息： 在仪器收集光谱期间，仪器将显示但前的输出状态显示如下： 按下Escape键，将取消当前的光谱收集。按下Start／Stop键将取消正在输出的光谱数据。 当仪器连接到Star Workstation时，在按下363荧光检测器上的Start键后，工作站将收集光谱数据。更多的有关工作站的扫描模式，参阅工作站上有关Prostar 363 检测器的操作

指南

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。 注意 1： 在荧光分析中的在荧光光谱中，由于溶剂或是溶剂中的杂质所产生的散射光，拉曼散射以及第二、第三发射光将会造成光谱重叠。同样，激发光谱也会受到溶剂或是溶剂中的杂质所产生的荧光（发射）波长，拉曼散射以及激发光束的第二、第三发射光的影响。？？？？？？（表示什麼意义） 注意：2 由ProStar 363所显示的当前的荧光光谱并没有依靠光电倍增管或光栅的灵敏度来对波长进行补偿？？？（表示什麼意义），因此从ProStar 363所获得的激发光谱／荧光光谱并没有同真实的分析谱图一致，这种差异在发射波长低于300nm时尤为明显。 选择GLP功能 该项为访问GLP功能设置项。该功能用于输入有关各安全功能和性能相关项目。 选择GLP功能并进行编辑 用数字键键入数字并确认。 GLP a. Key locking/unlocking（按键锁／开） Function items: b. Check-no longer used（检查，此处无用） c. Display of xenon lamp logbook data(氙灯日 志) d. Resetting of logbook function(日至重置) 键盘锁定功能用于锁定仪器前面板上的所有按键 用数字键输入所选数字并确认，安下Escape键可取消键盘锁定功能，假如系统检测到有错误出现，键盘锁定可自动取消。 仪器日志功能的作用是用于记录最后的换灯时间。仪器氙灯当前已使用的小时数，氙灯的开启次数，以及最后换灯的时间显示如下： 灯更换功能的作用是用于在灯更换氙灯后重置仪器记录日志。 当选定灯更换选项后，仪器屏幕显示如下： 时间的存储格式为 月 日 年 （1到12） （1到31） （0到99） 用户可根据实际情况输入日期 ， 注意： 仪器日志条目在“年份”数字输入并确认后将被重置，即使是氙灯最后更换时间是当年内的某一时间，年份也要重新输入。例如：氙灯在3-11-00（即2000年3月11日）更换后，在11-27-00(即同年11月27日)再次被更换，年份00（即2000年）也要重新输入。 时 间 程 序 实 例 本选项描述了怎样操作一个基于时间事件的运行程序，下图中显示的事件将用于该问题的讨论。 设定一个事件程序 在本例中，将编制一个能完成上图描述动作的时间程序。 1. 在时间程序运行的开始，激发光单色器的波长设置为250nm，发射光单色器的波长设置为350nm，自动归零功能用于定义基线的位置。 2. 在10分钟后，激发光单色器的波长设置为270nm，发射光单色器的波长设置为370nm，基线仍旧保持在当前位置（基处于hold状态）。 3. 20分钟后，荧光测量工作结束。 注意 1： 在时间程序设置中，第一步的初始时间必须为0.0，该初始值不能更改或删除。在最后一步中要输入结束时间，时间程序执行到所设定的测量结束时间时停止。 注意 2： 在时间程序设置中，每一步骤之间的时间间隔最小为0.3分钟。 注意 3： 当选定一个时间程序后，显示器为操作者提供了修改当前时间程序需或是输入一个新的间程序的途径。假如选定“MODIFY”项后，则被显示的需要编辑的第一行描述如下；假如选定“NEW”项后，则以前的时间程序将被删除，方法第一步所包含的初始值将如下表所示，该表还包括各参数所允许的使用范围。 初始值 可用输入范围 TIME 0.0 0.0到600。0 Ex 200到850，0 Em 250到900，0 BASE 1 1，2 按下该键 按下1键 → 按下 Enter 键 按下1键 → 按下ENTER键 按0键 → 按Enter键 → 按2、5、0键 → 按ENTER键 → 按3、5、0键 → 按ENTER键 →按1键 → 按ENTER键 按1、0键 → 按Enter键 → 按2、7、0键 → 按ENTER键 → 按3、7、0键 → 按ENTER键 →按2键 → 按ENTER键 按下2、0键 → 按下Enter键 → 按下Escape键 仪器显示器显示画面 其含义是在某一时间终止当前程序的一个步骤，并立即执行一个除时间之外的新的步骤。在本例中，10分钟这一行（即Ex270nm,Em370nm,HOLD行）要继续运行到20分钟。？？ 浏览时间程序 检查刚刚输入的时间程序 按下Time Program键可访问时间程序项 输入所要查看的时间程序号并按下确认键，显示器显示如下 输入0并按下确认键，显示器显示如下 按下“▼”键可查看下一行 按下“▼”键可查看下一行 按下Escape键，可返回到时间程序的第一行 按下START／STOP键，可执行该时间程序 Program number Measure value (程序号) （测量值） Measurement wavelength (测量波长) Elapsed time (消逝的时间) 在一个时间程序完成后，测量自动终止并且返回到状态显示屏幕，在这儿，波长设置在执行时间程序之前即已执行完毕。 注意： 象在时间程序的Time=0.0步骤的波长那样，在屏幕监视状态下设置波长是必要的 关 闭 检 测 器 按下Power开关可关闭检测器。在检测器关闭电源后，已设置好的的测量条件会继续保存在仪器中，在仪器电源被重新开启后，原先的条件会被重新调入到仪器的内存中。 仪器使用后要冲洗流动池 在使用缓冲液或是使用盐类流动相后一定要冲洗仪器的流动池，如果不将缓冲液或盐类流动相清洗掉，则会腐蚀仪器或是在仪器系统中形成沉积物从而使仪器遭受损坏。 仪器的维护维修及故障诊断 氙 灯 的 更 换 在仪器刚刚关闭时，氙灯太热，不能马上用手接触，若要更换掉一个旧的氙灯，则在其关闭并完全冷却后再进行，以免烫伤。 冷 却 氙 灯 按照以下程序进行操作 按下Param Set键 → 按Enter键 → 按 ENTER键 → 按ENTER键 → 按ENTER键 仪器屏幕显示如下： 在该屏幕显示的内容中，按下0键并按下Enter键以关闭氙灯，当氙灯关闭时，风扇会继续旋转以冷却氙灯。将仪器电源断开，等待大约30分钟。 在运输该仪器的过程中，要预先将氙灯拆下来，以免在运输过程中将其打碎。 · 氙灯在断电后的一段时间内仍旧很热，如果接触，会有严重烫伤危险。 · 在氙灯护盖打开时，尽管氙灯会被仪器的安全保护装置熄灭，但在更换氙灯时，也要关闭电源并等待大约2小时，以使其充分冷却下来。 · 仪器存在潜在的电击危险。 · 在仪器电源打开时，氙灯阳极上有大约90V的电压，在氙灯使用时，大约有30KV的高压存在。 · 为了确保安全，要关闭电源并拔下外部电源连接。 · 在更换氙灯时，要关闭电源并等待大约2小时，然后打开氙灯保护盖。 · 氙灯爆炸可导致严重伤害。在室温下，氙灯内填充有大约1Mpa的高压气体。 · 在更换氙灯时，注意不要用力压氙灯的球体部分（即玻璃部分）。 · 在处理氙灯时要佩带护目镜及手套。 · 在拧紧氙灯时，要用手指拿住氙灯阳极和阴极的金属部位，储存时要保护灯球部位，小心挤压和碰撞。假如等球被灰尘或是指纹污染，则要用仪器随机提供的清洁纸或是纱布或是吸水棉布沾高质量的酒精清洁之。在清洁时，注意不要用力碰撞或敲击氙灯。 · 确信氙灯要按照指定的方向安装，假如安装方向（极性）错误，则灯的阴极将被严重消耗以致氙灯不能开启。 · 将氙灯标有‘＋’（阳极）标识的一端安装在灯架的金属支架上。 · 假如继续使用阴极被严重消耗的氙灯，氙灯内的气压将升高并会发生爆炸，因此必须用一个新灯来换掉旧的氙灯。 直视开启的氙灯会损伤眼睛 · 氙灯开启时会发出强烈的紫外线。 · 不要直视点亮的氙灯。 · 要戴好安全防护镜以避免对眼睛的伤害。 氙灯的更换 在氙灯冷却下来后，断掉仪器电源，参照下述步骤1到6去掉氙灯支架，再按照下述步骤的3到4步取下氙灯，再按照1到6步安装一个新的氙灯。 注意： 更换氙灯后，要重新设置仪器使用日志（用于记录换灯日期，氙灯开启次数及已经使用的时间），在改变氙灯的安装日期后，原先氙灯的累积使用时间和开启次数将被自动归零。有关设置日志的详细信息，请参考GLP功能设置选项。在幻灯后，若要设置日期，则参照下面的示例进行。（以日期为1999年12月10日为例），日期的输入格式为月、日、年，例如：12／10／1999。 在仪器上的操作步骤为： 按下GLP→按下4键→按下Enter键→按下1键→按下2键→按下Enter键→按下1键→按下0键→按下Enter键→按下9键→按下9键→按下Enter键。 安 装 氙 灯 · 仪器内部有电，存在潜在的危险。 · 在仪器电源打开时，氙灯阳极上有大约90V的电压，在氙灯使用时，大约有30KV的高压存在。 · 为了确保安全，要关闭电源并拔下外部电源连接。 · 在更换氙灯时，要关闭电源并等待大约30分钟，然后打开氙灯保护盖。 · 氙灯爆炸可导致严重伤害。在室温下，氙灯内填充有大约1Mpa的高压气体。 · 在更换氙灯时，注意不要用力压氙灯的球体部分（即玻璃部分）。 · 在处理氙灯时要佩带护目镜及手套。 1．在安装氙灯时，要确认电源是关闭的，然后打开氙灯护盖，首先要拧松氙灯的四个固定螺丝，如图12所示。 固定螺丝 固定螺丝 氙灯护盖 图12 氙灯护盖的拆卸 2．当氙灯被安置到支架上后（图13），将氙灯的正极末端（标记有“＋”的一端）安装到陶瓷盘的金属夹子上，然后用灯正极的螺帽按照图14所示的灯的突出部位将灯安装在仪器上。在氙灯的安装过程中，只能拿捏氙灯两端的金属部位，不要灯的石英外壳。 在氙灯中部的球体部位，附有很细的金属线，如图14所示，金属线的作用是为了氙灯能快速启动。在安装氙灯的时候，小心不要弄断金属线，如果细金属线没有同灯的小石英突起在同一端，则要将其放置在同一侧。 3．将氙灯的阴极端安放到仪器的阴极部分，并用阴极螺帽固定好。 · 在旋紧氙灯螺帽时，要用手拿住其阳极和阴极的金属部位而不是氙灯的球体部位。小心不要挤压和碰撞氙灯的球体部分。 · 假如氙灯的灯球部位被灰尘或是指纹污，则用氙灯附带的专用的清洁纸或是用医用纱布或脱脂棉蘸高纯酒精来清洁之，在清洁过程中，同样不能挤压或碰撞氙灯的球体部位。 · 氙灯一定要按照其指定的方向安装，假如安装方向错误，则氙灯阴极将被严重消耗，并且不能启动。安装氙灯时，要将标记有“＋”的阳极端安置到灯架的金属支架上。 · 假如氙灯连续使用，阴极过渡消耗后，氙灯球体内的压力将变得很高而导致爆炸，若要避免危险发生，则在发现氙灯阴极明显损坏后应立即更换。 陶瓷盘 金属夹 阴极线 阴极螺帽 灯架 阳极端（＋） 灯球突出部位 灯球 阴极端 阴极螺帽 阴极线 阴极导向盘 图13 氙灯及支架 安装氙灯时将其球体的突出部位朝向仪器的前面板一侧（见图14），并将其与阳极线在同一侧。 氙灯的“t”型一侧 球体的突出部分 灯架固定螺丝 金属线 图14 氙灯球体的突出部分 注意： 安装氙灯时要确保其球体部位的突出部分面向仪器前面板一侧（见图14），错误的安装位置将导致光的流失增加，从而不能获得更好的性能。 阳极螺帽 阳极线 金属夹 陶瓷盘 灯球 灯球突起 灯架 阴极导向盘 阴极线 阴极螺帽 图15 安装在支架上的氙灯 在安装好氙灯后，要固定好阳极和阴极螺帽，如果螺帽松弛，则在氙灯点亮后，其接点部分温度会升高而导致爆裂。在紧固灯夹螺帽时，用手指拿住灯两端的金属部位，不能拿捏灯球部分，也不能挤压和碰撞灯的球体部分。 4．在将氙灯安装到支架上后，将灯架放回氙灯室内，再用固定螺丝将灯架固定好。 5．连接氙灯的电缆时，首先要松开点燃氙灯时使用的连线端口（见图17），正极线（红色线）连接到灯电源的“＋HV”“口，阴极线连接到“COM”“口。 注意： 若要取出氙灯支架，则参考步骤4和步骤5。 图16 氙灯支架的安装 图17 阳极线和阴极线的连接 6．安装完氙灯支架后，再将灯源护盖安装好，打开仪器电源，按照下述步骤调整氙灯的位置。 氙灯位置调整 每个氙灯的灯丝在灯泡中的位置不见得完全相同，因此在安装完氙灯后要对其位置进行调整，调整的目的是为了使氙灯发出的光能聚焦到光学系统上并获得最大的灵敏度光强度。 在调整氙灯位置时，要用位于仪器右侧的三颗螺丝钉来调整。 HORIZONTAL ADJ 水平方向调整 VERTICAL ADJ 垂直方向调整 FOCUS 调整聚光焦点 氙灯位置的调整包括粗调（根据灯光监测位置）和细调（根据光电倍增管监测到的信号），调整时首先进行粗调，然后进行细调。 图18 氙灯位置调整 氙 灯 粗 调 按照下述步骤对氙灯位置进行粗调。 1. 打开仪器电源，仪器屏幕显示如下 2. 拆下流量池，仪器屏幕将显示如下 3. 设定及发光单色器，按照下述操作步骤将发光波长设定为550nm 。 按下Wavelength → 按下5 5 0 → 按下Enter →按下Enter，仪器屏幕显示如下 4. 监测发射光 如图18所示，将一张白纸放在样品室中激发光出口处，观察激发光，同时调整前面提到的三颗调整螺丝来调整光源 位置，将光源发出的光有彩虹状调整至白色为止，若要得到最强的光束，上面提到的3颗螺丝可能要进行反复调整。 注意： 在调整灯位之前，要将仪器打开，使氙灯大约预热15分钟 在该纸条上观察光束 图19 观察激发光束 氙 灯 细 调 1. 重新安装上流动池，流动池应用甲醇洗净并吹干。 2. 更改显示模式 在仪器面板上按下Utility/setup键 → 按下3(Display Mode) → 按下Enter → 按下2(Ex) → 按下Enter即可显示激发能量监测画面 3. 改变波长和光电倍增管 波 长 按下3 5 0 数字键→ 按下Ente → 按下Enter 按下Param Set → 按下Enter键 按下2键 → 按下Enter键→ 按下Escape键 4. 按照如下步骤执行细调步骤。 在观察仪器屏幕监测（MONITOR）值的同时，反复逐步调整FOCUS、HORIZONTAL及VERTICAL螺丝，直到屏幕显示的监测值（MONITOR）为最大时为止。该过程可能要重复3次，当调整到最大值时，氙灯位置的细调工作完成。 5. 在氙灯位置调整完毕后，改变仪器屏幕显示模式返回到荧光显示模式。操作步骤如下： 按下Utility／Setup键 → 按下3键（Display Mode）→ 按下Enter键→ 按下1（FL）→ 按下Enter键 流 动 池 的 维 护 维 修 流动池的检查和清洗 假如流动池被污染后，应用如下工具和试剂作如下清洗。 · 一支大约10mL的注射器 · 合适的溶剂（见步骤5） 1. 打开流动池上的螺旋夹 2. 取下流动池 3. 检查流动池是否被异物污染（例如：油渍盐类或缓冲液等） 4. 检查流动池外部，看是否有泄漏 5. 假如发现流动池被污染了，则必须用合适的溶剂进行清洗。在流动池的出口处连接注射器，向流动池中注入合适的溶剂进行清洗。假如使用过水性流动相，则用水进行清洗；如果使用过有机相的流动相，则需要用甲醇或乙腈进行清洗。 6. 用清洗液替换清洗溶剂重复步骤5继续清洗 7. 假如发现流动池中有气泡存在，则用泵向流动池中注入流动相，流速要小于1ML／MIN，压力要小于150Psi（10atm）。在向流动池中泵入流动相的同时，不断的堵压流动池的排液口，使流动池内的压力增高并很快松开，不断重复该步骤，直至气泡被赶出为止。 螺旋夹 流动池单元 图20 流动池的清洗 在排除流动池内的气泡时，压力不能太高，否则会损坏流动池，泵的最大压力极限应为150Psi或小一些。 流 动 池 的 拆 卸 假如流动池内的污染物按上述步骤不能被清除，则按照下述步骤拆开流动池并进行清洗。 保护盘 固定螺丝 A 图21 流动池单元 1. 拧松固定螺丝A并打开流动池保护盘 2. 剥离流动池窗 3. 拧松上部和下部的固定螺丝1和2，见图22 4. 打开流动池夹子 5. 取出流动池 清 洗 流 动 池 1. 用流水冲洗流动池，假如不能将污染物冲掉，则用超声波清洗器清洗。为避免损坏流动池，在用超声清洗器清洗流动池时，要将其放在纸制或塑料制容器中。 2. 用医用纱布或镜头纸沾丙酮或乙醇来擦拭流动池。 在拆卸流动池时，一定注意不要划伤流动池表面。 在用超声波清洗流动池时，一定要将其放置到纸制或塑料制容器中，如果将其放到玻璃容器中用超声波清洗，则会划伤流动池或是得不到预期的效果。 固定螺丝 1 流动池窗 流动池夹子 流动池 固定螺丝2 图22 流动池单元的拆卸 流 动 池 的 安 装 1. 如图23所示，将流动池安装到原来的位置上，并用流动池夹子夹住 2. 拧紧上部和下部的固定螺丝 图23 流动池单元的安装 3. 将流动池窗及保护盘安装好 4. 流动池的安装顺序与拆卸顺序相反，让液体流过流动池，坚持其是否泄漏。 注意 1： 在流动池的安装过程中，注意不要划伤流动池 注意 2： 在安装流动池的时侯，确保流动池在支架上的位置要正确（见图23），错误的安装方向，将使仪器不能获得其应有的性能。 注意 3： 用手完全拧紧固定螺丝1和2后，再用适当的开口扳手拧紧约1／3圈即可 流动池的泄漏问题 在收集仪器的分析数据之前，很重要的一项工作就是要检查流动池是否发生泄漏。该项检查工作可通过监视数秒流量来进行，假如流动池有泄漏，则立即停泵，用下述方式消除泄漏： 1. 用泵将流动相打入流动池，检查流动相是否正常通过（例如：流动相是否流出流动池并经排废管到达废液接收容器） 2. 假如流动相不从流动池出口流出，则出口管堵塞，需要用一条新的管线来更换原出口管。 3. 假如有泄漏并且液体正常从出口流出，则可能是上部出口的接头没有拧紧，用手拧紧后再用随机提供的板手拧紧（旋转大约10°到20°） 4. 将流动池外面及流动池室内的液体擦净。 5. 在更换流动池之前，将流动相泵入流动池以确保问题已维修过。 注意 1： 在检查流动池之前，检查流动池出口管是否堵塞是很重要的一项工作。如果如果在拧紧上部上部出口的螺丝之前，没有检查出口管是否堵塞，则在将流动相泵入流动池的时候，有可能损坏流动池。 注意 2： 如果发现样品室或光学基座上发现有泄漏的的液体，则用一块用水润湿的不将其擦拭干净。 假如在使用过程中发现液体从位于仪器右下角的排废口流出，则立即停泵并关闭仪器电源，然后执行上述步骤（1）到（5）进行检查。 流 动 池 的 存 放 如果流动池在很短几天时间内不使用，则用泵将蒸馏水或乙醇打入流动池清洗后保存在安全的地方。如果在一段时期内不用，则将其充满向乙醇或丙酮等溶剂后密闭保存。 保险丝的更换 小心触电！ 在更换保险丝之前，确保关闭仪器电源开关并将电源插头从输出插座上拔掉。 1. 找到保险丝备件（03-926131-12）。注意使用与原保险丝功率及型号一致的保险丝。 2. 确保仪器仪器电源开关关闭，电源线要从输出插座上拔下。 按下述步骤更换保险丝（见图24） a) 将电源线从仪器后面板的插槽中拔出 b) 利用保险丝支架两端的突起将其拉出 3. 用新的保险丝更换掉就的，然后将保险丝支架推进原位即可。 图24 更换保险丝 故 障 诊 断 · 小心触电 · 在更换保险丝之前，确保关闭仪器电源开关并将电源插头从输出插座上拔掉。 · 触摸发热部件可能发生烫伤 · 灯源部件（灯座）在仪器运行期间特别热，为避免烫伤，不要触摸 · 在关闭氙灯电源后，氙灯仍旧保持很热，如果触摸会严重烫伤 · 尽管在打开氙灯护盖时，氙灯会被机械装置自动关闭，但在更换氙灯时，仍旧要关闭电源并等待至少30分钟，以使氙灯充分冷却下来 · 直视开启的氙灯会损伤眼睛 · 氙灯开启时会发出强烈的紫外线。 · 不要直视点亮的氙灯，若需直视时要戴上防护镜 · 要戴好安全防护镜以避免对眼睛的伤害。 图 4 故 障 诊 断 现 象 原 因 检 查 解决

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1．开机时不执行自诊断过程 电源线没有插紧 视觉检查 将电源线插紧 保险丝烧断 检查保险丝 更换一个新的保险丝 氙灯护盖没有安装好（因需要护盖来启动安全连锁开关） 视觉检查 拧紧氙灯护盖固定螺丝 2．键盘失灵 仪器没有进入准备好状态 检查显示器 按下Escape键，仪器将显示READY状态 3．Auto Zero或Acquire／Spectrum键失灵 在监视器上，数据模式没有设置为FL状态 检查显示器 使用Utility/Setup键设置显示模式为FL 4．时间程序不启动 仪器没有准备好 检查显示屏 按下Escape键，仪器将显示READY状态 5．异常噪音 流动池被污染 视觉检查 清洗流动池 流动相没有彻底脱气 出现尖锐的峰信号 流动相彻底脱气 流动相内含有杂质 检查流动相 纯化流动性或使用高纯度的流动相替换正在使用的流动相 记录仪的增益过高 检查记录仪的增益值 调整记录仪的增益值 泵存在缺陷 检查泵，确认是否平稳工作 对泵进行检查 检查停泵时的噪音 氙灯寿命已到尽头 信噪比小于120／1 更换氙灯 6．异常的漂移 预热时间不足 ———— 等待仪器预热稳定（至少十分钟 流动相泄漏 检查漏点 紧固泄漏处 杂质（强保留组份）从柱中洗脱下来 停止向柱中打入流动相 等待杂质从柱中洗脱下来或使更换新柱 环境温度剧烈变化 ———— 控制温度变化 流动相不纯 检查流动相溶剂 纯化流动相或换用高纯度的流动相 7．很差的信噪比 流动池被污染 视觉检查 清洗流动池 氙灯位置偏移 检查灯的能量值 调整灯位 流动池安放错误 视觉检查 正确安放流动池 流动池表面划伤 视觉检查 更换流动池 错 误 信 息 信 息 描 述 解 决 办 法 A/Z OVER RANGE PRESS CLEAR KEY TO CLEAR MESSAGE 超出允许的自动归零范围 改变波长设置，使用低荧光的流动相清洗流动池 LAMP ERROR 在分析过程中氙灯熄灭，氙灯不能点燃或是仪器电源瞬间中断后又点亮 按下Clear键对瞬间电源中断进行恢复；假设氙灯不能启动，则关闭仪器电源后再重新启动；假设是氙灯寿命将尽，则更换氙灯 Ex（Em）SIDE OF DRIVE MECHANISM ERROR 在仪器自诊断（即初始化）过程中，单色器不能正确设定 再次开关电源一次，若不能解决问题，则通知瓦里安的维修中心 ROM ERROR 只读存储器错误 通知瓦里安维修中心 C-RAM ERROR 随机存储器错误 通知瓦里安维修中心 CHECK TIME PROGRAM 时间程序超出最多允许的步骤 从时间程序中删除不需要的步骤 OVER HEAT！LAMP WAS TURNED OFF 仪器风扇停止运行，温度探测器被激活 风扇有故障，通知瓦里安维修中心 氙灯过热。仪器关闭后氙灯没有被充分冷却。 待氙灯充分冷却后，重新开启仪器电源 LAMP WAS TURNED OFF BY LAMP COVER OPEN TURN OFF THE POWER 氙灯护盖被打开 关闭氙灯护盖。重新开启氙灯电源 NO SPECTRA OR SPECTRA ARE MISMATCHED PRESS CLEAR KEY TO CLEAR MESSAGE 没有光谱数据，扫描模式错误，固定波长不正确，背景波长范围不完全包含光谱波长范围，或是背景狭缝位置不同于光谱狭缝位置 选择正确参数 PARAMETER ERROR 由于EPROM错误，而导致所设仪器参数数据不能被保留 再次开关仪器，若不能解问题，通知瓦里安维修中心 注意： 假如出现错误提示后，原先存储在仪器中的各参数值有可能被删除。假如遇到这种情况，则需重新输入各相关数值。 在遇到PARAMETER ERROR情况时，原先的波长校正数值则被删除，在这种情况下，需要重新执行波长较正。 附 录 技 术 说 明 光度测定原理 光度比例；被传输的光强度 光 源 150W 氙灯 激发波长设定范围 200-850nm 发射波长设定范围 250-900nm 注意，在波长超过731nm后要更换光电倍增管 激发侧光谱带宽 15nm 发射侧光谱带宽 15或30 nm 波长设定 通过键盘或Star Workstation设定 波长精确度 ±3nm 波长重复性 ±0.5nm 记录仪输出 满量程10mV，全量程范围从1到1000，增幅为1 数据系统输出 满量程1V 响应 可变换5级响应，相对应的时间常数为0.1，0.5，2.0，4.0，8.0秒 自动归零范围 0-1000 偏移 0-1000 光谱存储 可存储8个激发或发射光谱 标识信号 在记录仪终端的标志信号输出大约为0.6mV 仪器参数设定 在仪器主板电池有电的情况下，下列参数在仪器关机后仍就被保存 满量程范围 光谱测量范围 光电倍增管所用电压 偏移值 时间程序 时间程序数目： 9 可变时间： 可到600分钟，增幅最小为0.1分钟 最大事节数： 9个文件，共计100节 可编程项目： 激发波长、发射波长、基线处理 显示功能 背光式显示器；两行，每行40个字符 通讯功能 RS-422／485串口通讯 外部输出 模拟输出 处理器：满量程1V 记录仪：满量程10mV 外部输入输出终端 时间程序的启动、错误的输入输出、输出忙、自动归零输入、关灯信号输入 流动池容量 标准容量为10ul（照射容量） 流动池标准压力 29ATM（425Psi） 操作温度范围 4-35℃ 湿度要求 相对湿度 45-80％ 电源要求 100-115，220-240V AC，50/60Hz 额定功率 360VA 体积（尺寸） 292mm W×470mm D×305mm H 重量 约19Kg 附 件 部 件 号 部件名称 备 注 ★03-926131-02 150W氙灯 可用时间：1200小时 ★03-926131-03 长寿命氙灯（选项） 使用时间：2000小时 03-926131-13 保险丝2只 使用时间：约一年 03-926131-03 流动池（12uL） 只包括池体 03-926131-20 Peek管，内径0.33mm（输出） 长2m，外径：1.57mm 03-926131-19 Peek管，内径0.25mm（输入） 长2m，外径：1.57mm 03-926131-11 标准光电倍增管 R3788 03-926131-00 扩展范围的光电倍增管 R924 红敏 ★ 该项为消耗品 注意： 假设一个新的氙灯长期放置不用（例如：1年），其光强度将小于一个新的氙灯。建议用户不要一次性订购多个氙灯作为备用，可以在需要时订购。 拉 曼 散 射 在测量荧光时，有两个额外的峰会出现在光谱中，雷利散射峰出现在激发波长中，它是由于光的散射形成的。然而，拉曼散射出现的波长要比激发光波长长。拉曼带的位置取决于激发光波长，而荧光位置取决于发射光（？？？？？）波长。 即使柱子的馏出物中没有任何能产生荧光的组分，雷利峰和拉曼峰也要出现，假如我们对观察到的峰表示怀疑，要验证到底是一个雷利峰、拉曼峰还是一个我们感兴趣的组分所产生的峰，则我们只要稍微改变以下激发波长即可。假如该峰的出现是由于拉曼或是雷利效应，再稍微改变波长后，所观察到的波长将发生漂移。假如所观察到的峰是由我们所感兴趣的荧光组分所产生的，其波长将不会改变（尽管其峰的高度会发生变化）。 当用水作溶剂的时侯，拉曼效应会比较强，而用其他溶剂的时侯会比较弱。 表5 列出了各激发波长下拉曼峰的出现情况。 图25 水的拉曼光谱图 表5 不同波长下拉曼光谱的位置 （激发波长） 水 乙醇 环己胺 四氯化碳 氯仿 激发波长和拉曼峰位置（nm） 248 271 267 267 -- -- 313 350 344 344 320 346 365 416 405 408 375 410 405 469 459 458 418 461 436 511 500 499 450 502 包含高浓度组分的样品 假如样品中所要测的组分浓度相对较高，从荧光谱中所检测的浓度可能会比实际浓度要低，这种现象是由于如图26所描述的内部过滤效应。在本例中，我们所感兴趣组分的浓度特别高，所有的激发光全被狭缝入口处的分子所吸收。由发射狭缝所决定的非本区域内的分子发射，是观察不到的，而由荧光狭缝所定义的分子则不被入射光激发（由于已被吸收的缘故）。 上面所描述的例子是一个极端的情况，典型的如果样品吸收大于0.05，内部过滤效应可能减少可观察到的荧光强度。要测定内部过滤效应是否削减了荧光强度，建议稀释样品后再重复测定光强度。假如荧光强度的减小与样品的稀释匹配，则证明内部过滤效应没有起作用。 图 26 含有高浓度组分的样品 在使用荧光检测时，另外一个潜在的错误，即二次吸收可能会出现。图27即是该现象一个例子。荧光的二次吸收发生在荧光光谱的短波长尾部与激发光光谱的长波长尾部的重叠部分。当发生该现象时，二次吸收将向荧光光谱长波长方向漂移。 在使用荧光检测器定量时，这种现象很少导致出现不可恢复的错误。 图 27 荧光的二次吸收 第二和第三发射光 衍射光栅用于传送指定波长的光（例如：250nm），它同时也将传输其整数倍的光（例如：500nm），在收集荧光光谱后，在分析时要明白第二及第三此激发光，并要注意不要错误的认定峰。 例如：假如激发波长为240nm，则第二第三激发则为480和720nm。要消除第二、三激发光，则需要在荧光通路中添加一个短波切除滤片（在荧光单色器之前）。 荧 光 光 谱 实 例 图28 提供了一个包含有上述各种类型峰的荧光光谱例子，在大多数情况下，我们所感兴趣组分的荧光位置要位于比图28中位置更靠近激发光的地方，并且我们所感兴趣的峰与第二激发光几乎很少有重叠？？？？。典型的，我们所感兴趣的峰对应于图中的3号峰，在分析它时，应由拉曼峰对其进行校正。？？？？ 1. 激发光散射 2. 由于洗脱产生的雷曼散射 3. 感兴趣的荧光组份 4. 杂质产生的荧光 5. 激发光的第二散射光 图 28 测定荧光光谱的例子 � EMBED MSPhotoEd.3 ��� 激发光 单色器 氙灯 启动器 发射光单色器 (荧光单色器) 氙灯 镇流器 光电倍增管 高压线圈 样品测量端 放大器 监视端 放大器 操作电路 记录仪或积分仪 Varian ProStar 363 Fluorescence Detector Firmware P/N xxxxxxx-xx (Year) WL DRIVE & LAMP INITIALIZING 状态指示 已用时间 仪器地址 激发波长 灯指示器 荧光波长 方法号 荧光强度 TIME Ex Em FL PROG LAMP [I] 0.0 250 350 xxxx.x 1 Xe 91 Utility／ Setup Setup Unit ID 0 <8E1 19200> Unit ID(0-9) 0 Param Set TIME CONSTANT （0.1s=1, 0.5s=2, 2.0s=3 3 4.0s=4, 8.0s=5） PMT VOLTAGE （HIGH=1, MED=2, LOW=3） 1 Em BANDWITH (STANDARD=1, WIDE=2) 1 USE TIME PROGRAM (NO=0, YES=1） 1 LAMP MODE (0FF=0, ON=1） 1 Wave Length Ex Em (200-850,0)nm 250 350 Ex Em (250- 900,0)nm 250 350 Auto Zero TIME Ex Em FL PROG LAMP [I] 0.0 250 350 xxxx.x 1 Xe （D1） Marker Time Program TIME PROGRAM NO. (1- 9) 1 MODIFY=0, NEW=1 0 TIME Ex Em BASE (A/Z=1, HOLD=2) 0.0 250 350 1 Start／Stop Utility／Setup UTILITY： OFFSET=1, LAMP UTIL=2， <1- 3> 1 DISPLAY MODE=3 OFFSET （0-1000） 0 DISPLAY MODE (FL=1, Ex=2, Em=3) 1 _ Spect Param SCAN MODE ( Ex=1, Em=2) 2 Ex SCANNING WL RANGE ( 200- 800) nm 200- 550 1nm setp Ex SCANNING WL RANGE ( 200- 800) nm 200- 550 1nm setp Em SCANNING WL RANGE ( 250- 850) nm 250- 600 1nm setp Em SCANNING WL RANGE ( 300- 600) nm 250- 600 1nm setp Acquire Spectrum SPECTRUM MEMORY NO. (1- 8) MODE: Em NO. SCANNING SPECTRUM NO. X Ex:xxx Em:xxx Output Param RECORD: RCD RANGE=1,RCD SPEED=2, <1- 3> 1 SPECT RCD=3 RECORD RANGE（1- 1000） 1000 RECORD SPEED（40nm/min=1, 60 nm/min=2） 2 RECORD SPECTRUM NO. （1- 8） 1 BACKGROUD SPECTRUM NO. （0- 8） 0 RCD NO. SPEED WL-RANGE MODE：Em X 60 200-550 PRESS “START” Start／ Stop RCD NO. SPEED WL-RANGE MODE：Em X 60 200-550 PRESS “START” GLP CONFIDENCE：KEYLOCK=1，CHECK=2， <1- 4> 1 LOGBOOK=3，LAMP CHECK=4 KEY LOCK (NO=0，YES=1) 0 － LIGHT-ON SWITCHING LAST CHANGED DATA Xxxxh xxxxtimes 111 LAMP CHANGE (MM DD YY) �_1 1 1 Enter确认 Numeral(day)日 Enter确认 Numeral(month)月份 Enter确认 Numeral(year)年份 Start／ Stop TIME PROGRAM NO. （1－9） 1 MODIFY=0, NEW=1 0 TIME Ex Em BASE（A/Z=1，HOLD=2） 0.0 250 350 1 TIME Ex Em BASE（A/Z=1，HOLD=2） 10.0 270 370 2 TIME Ex Em BASE（A/Z=1，HOLD=2） 20.0 TIME Ex Em FL PROG LAMP [I] 0.0 250 350 0.0 1 Xe (90) TIME PROGRAM NO. (1- 9) 1 MODIFY=0, NEW=1 0 TIME Ex Em BASE（A/Z=1，HOLD=2） 0.0 250 350 1 TIME Ex Em BASE（A/Z=1，HOLD=2） 10.0 250 350 2 TIME Ex Em BASE（A/Z=1，HOLD=2） 20.0 250 350 TIME Ex Em FL PROG LAMP [I] 0.0 250 350 0.0 1 Xe (90) TIME Ex Em FL PROG LAMP [I] 0.0 250 350 0.0 1 Xe (90) LAMP MODE (OFF=0, ON=1) 1 � EMBED PBrush ��� TIME Ex Em FL PROG LAMP [I] 0.0 250 350 0.0 1 Xe （90） TIME Ex Em FL PROG LAMP [I] 0.0 250 350 **** 1 Xe （90） TIME Ex Em FL PROG LAMP [I] 0.0 550 350 **** 1 Xe （90） Ex Em （200-850，0） nm 250 350 Ex Em MONITOR（Ex） Lamp [I] 350 350 xxxx Xe (90) PMT VOLTAGE（HIGH＝1，MED＝2，LOW＝3） 2 Ex Em MONITOR（Ex） Lamp [I] 350 350 xxxx Xe (90) ProStar 363 荧光检测器 吕宪蛟 Page 18 12/9/2004 ProStar 363 荧光检测器 吕宪蛟 Page 67 12/9/2004 _1008569820.bin