GB-T 18642-2002 猪旋毛虫病诊断技术

G BiT 18642 2002 前 言 旋毛虫病(trichinello.sis in swine)是 种危害很大的人兽共患寄生虫病 它不仅给畜牧业和肉品工 业造成严取的经济损失，而且对人类健康也构成严重威胁 本病病原为旋毛虫 是英thl学者James Panes Paget 1835年首次于伦敦一尸体「}’发现，同年()wen 定名为:irlchinella spirali,简称旋毛虫 后来证实，由此虫引起的旋毛虫病是 一种世界分布的人兽共患 寄性虫病，可感染人和150多种哺乳动物，目前全世界都有本病的发生。 本病的诊断方法 L要有两类。一是病原学诊断，包括直接采集肌肉进行目检、压片镜检和集样消化; 另 一类是血清学诊断，包括皮内反应、补体结合反应、对流免疫电泳、胶乳凝集试验、间接荧光抗体、皂L 絮凝试验、间接血凝试验、环蝴沉淀试验、酶联免疫吸附试验(EI,ISA)等 为i'保iiE((}1，华人lti共#I1 L*1动物防疫法》的实施，结合世界动物卫生组织[World Organization for 八;tintal 11。山h(英),Office Intentional des Epizootic(法),()IF]编写的该病检疫方法，特制定本 本标准规定旋毛虫压片镜检、集样消化两种方法。主要用于感染旋毛虫猪的定性。上述方法具有操 作简便，快速 根据不h1情况可作为产地、屠宰加 I_和流行病学调查以及进出[f1猪和猪肉的检疫 本标准的附录八、附录H都是标准的附录 本标准由『}，华人民共和国农业部提出 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归日〕 本标准起草单位:中国人民解放军农牧大学。 本标准L要起草人:徐克成、阎 丘河、郑明光、周志江 中华人民共和国国家标准 猪旋毛虫病诊断技术 GBIT 1$642-2002 Diagnostic techniques for trichinella spiralis in swine 1 范围 本标准规定 r旋乙虫压片镜检、集样消化等诊断技术 本标准适用 少产地检疫、屠宰加工、流行病学调查和进出口猪及猪肉的检疫 2 压片镜检法 2门 实验材料 2.1.1 甘油透明液、盐酸溶液、美蓝溶液〔见附录A(标准的附录)〕 21.2 仪器:U微镜 2.2 操作方法 2.2.1 新鲜肉检验 2.2.1.1 采样 自胭体两侧的横捅膜肌脚部各采样 一块，记为 一份肉样，其质量不少于50g^ 100g，与胭体编成相 同号码 如果足部分tlfal体.刚从肋间肌、腰肌、咬肌、舌肌等处采样 2.2.1.2 11检 撕去Hen肌的肌膜.将114肌肉缠在检验者左手食指第 一指节仁，使肌纤维垂直于要指伸展方向，再将 左手握成半握拳式，借助 f拇指的第 一节和中指的第二节将肉块固定在食指上面，随即使左手7心转向 检验者，右手拇指拨动肌纤维，在充足的光线下，仔细视检肉样的表面有无针尖大半透明乳白色或灰白 色隆起的小点。检完一面后再将隔肌翻转，用同样方法检验幅肌的另 ，面。凡发现上述小点可怀疑为 虫体 2.2.1.3 压片 可按下述方法制备压片: a)放置夹压玻片:将旋毛虫夹压玻片放在检验台的边沿，靠近检验者; b)剪取小肉样:用剪刀顺肌纤维方向，按随机采样的要求，自肉上剪取燕麦粒大小的肉样24粒，使 肉粒均匀地在玻片_}_排成 一排(或用载玻片，每片12粒); 。)压片:将另 一夹压片重迭在放有肉粒的夹压片上 并旋动螺丝，使肉粒压成薄片 2.2.14 镜检 将制好的压片放在低倍显微镜下，从压片 一端的边沿开始观察，直到另一端为止。 2. 2. 1.5 判定标准 镜检判定标准如下 )没有形成包囊期的旋毛虫:在肌纤维之间呈直杆状或逐渐蜷曲状态，或虫体被挤 f压出的肌 浆.}，_ b)包囊形成期的旋毛虫:在淡蔷薇色背景士_，可看到发光透明的圆形或椭圆形物，崔中央是蜷曲的 虫体。成熟的包雀位于相邻肌细胞所形成的梭形肌腔内。 中华人民共和国国家质t监督检验检疫总局2002-02一19批准 2002一05一01实施 GB/'r 18642--2002 c )钙化的旋毛虫:在包囊内可见数量不等、浓淡不均的黑色钙化物，或可见到模糊不清的虫体，此 时启开压玻片，向肉片稍加 10写的盐酸溶液，待I min-2 min后，再行观察。 d)机化的旋毛虫:此时压玻片启开平放桌上，滴加数滴甘油透明剂于肉片上，待肉片变得透明时， 再覆盖夹if玻片，置低倍镜下观察，虫体被肉芽组织包围、变大，形成纺锤形、椭圆形或圆形的肉芽肿。被 包围的虫体结构完整或破碎，乃至完全消失。 2. 2. 2 冻肉的检验 2. 2. 2. 1 冻肉的检验同2.2.10 2. 2. 2. 2 冻肉的染色方法如下: )压片:同2.2.1.3 b)染色 在肉片 ]_滴加 1.2滴美蓝或盐酸水溶液。浸渍 1 min，盖上夹压玻片 c)镜检:美蓝染色法:肌纤维呈淡青色，脂肪组织不着染或周围具淡蔷薇色。旋毛虫包囊呈淡紫色、 蔷薇色或蓝色。虫体完全不着染。盐酸透明法:肌纤维呈淡灰色且透明，包囊膨大具有明显轮廓，虫体 清楚 3 集样消化法 3.1 实验材料 3.1.1 消化液:配制方法见附录13(标准的附录)。 3.1.2 器械:80 11铜网(网眼直径为士。.18 mm),漏斗、分液漏斗、凹面皿、组织捣碎机、溢度计、加热 磁力搅拌器、显微镜(或倒置显微镜)。 3. 2 操作方法 3. 2门 采样 3.2.1.1 部位:采集嗣体横隔肌脚和舌肌。 3.2.1.2 方法:去除脂肪 肌膜或键膜 3.2.1.3 数量:每头猪取1个肉样(100 g)，再从每个肉样!7-剪取I g小样，集中10。个小样(个别旋毛 虫病高发地区以15-2。个小样为一组)进行检验。 3.2.2 绞碎肉样 将100个肉样(重100 g)放人组织捣碎机内以2 000 r/min，捣碎时间30 s-60 s，以无肉眼叮见细 碎肉块为度。 3.2. 3 加温搅拌 将己绞碎的肉样放人置有消化液的烧杯中，肉样与消化液(见附录13)的比例为1:20,置烧杯于加 热磁力搅拌器上，启动开关，消化液逐渐被搅成一漩涡，液温控制在40 C-43 C之间，加温搅拌 30 min ^-60 mm，以无肉眼可见沉淀物为度。 12.4 过滤 取80目的筛子，置于漏斗上。漏斗下再接一分液漏斗，将加温后的消化液徐徐倒人筛 r。滤液滤人 分液漏斗中，待滤干后，弃去筛子上的残渣 3.2. 5 沉淀 滤液在分液湍斗内沉淀10 min-20 min，旋毛虫逐渐沉到底层，此时轻轻分几次放出底层沉淀物于 I'll [A( livi,。 3.2. 6 漂洗 沿I"1面皿边缘。用带乳头的10 nil吸管徐徐如入s} c温自来水，然后沉淀1 min-2 min.并轻轻沿 P9曲皿边缘再轻轻多次吸出其中的液体如此反复多次，加入或吸出凹面皿中的液体均以不冲起其沉淀 物为度，直至沉淀于凹面皿中心的沉淀物上清透明(或用紧筒自然沉淀·反复吸取上清的方法进行 漂洗) ca!r 18642--2002 3.2.了 镜检 将带有沉淀物的四面III放人倒置显微镜或在8。一100倍的普通显微镜卜调节好光源，将凹面Wt左 不，或来回见动，镜下捕捉虫体、包囊等，发现虫体时再对这 样品采用分组消化法进 一步复检(或I+.片镜 检)，直到确定病猪为比 Gs/'r 18642-2002 附 录 A (标准的附录) 旋毛虫压片法用溶液配制 A1 甘油透明液 日油 加双蒸水至 2_0 ml 100 ml. A2 盐酸水溶液 盐酸(HCl) 加双蒸水至 20 ml 100 ml A3 美蓝溶液 饱和美蓝酒精溶液 加双蒸水至 5 ml 100 ml 附 录 B (标准的附录) 消化液的配制 胃蛋白酶(3000国际单位) 盐酸(密度1. 19) 加蒸馏水至 加温40 C搅拌溶解，现用现配。 log 10 ml 1 000 mL