Km值测定课件PPT

碱性磷酸酶AKP(Alkalinephosphatase)Km值的测定原理：在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速度的影响呈矩形双曲线关系。①双曲线作图法：即根据米-曼氏方程，以v对[s]作图，Vmax/2时[s]即为Km，以摩尔浓度表示。因为实验条件下，底物浓度很难使酶达到饱和，实测Vmax是个近似值，因而Vmax/2不精确。此外的关系呈双曲线，实验数据要求较多，且不易绘制。故此法少用。②双倒数作图法(doublereciprocalplot)，又称为林-贝氏(Lineweaver-Burk)作图法-1/Km1/Vmax1/[S]1/V以“1/v”对“1/[s]”作图，直线与x轴交点即为-1/Km。磷酸苯二钠+H2OAKP苯酚+Na2HPO44-氨基安替比林+碱性K2Fe(CN)6红色醌衍生物颜色深浅与酚含量成正比,从而可知酶活性的高低。以底物浓度的倒数为横坐标，以各管光密度的倒数为纵坐标作图求出Km值。1/A1/[S]（）0.50.251/Vm1.02.0－1/Km1/A代替1/V作图所得Km和Vm是否为真实值?