纸片法(KB)药敏实验原理及实际操作方法

纸片扩散药敏试验的原理：将含药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培育基上，经过药物在培育基上的扩散，察看能否出现抑菌环，推测能否克制细菌的生长。药物扩散的距离越远，药物浓度越低抑菌能力越强，所以可依据抑菌环的大小，判断药物对细菌的克制作用强弱。药敏试验依据美国临床委员会(NCCLS)介绍的K–B琼脂法进行。本实验经过纸片药敏试验法察看多酸化合物对细菌有无克制作用，为试管二倍稀释法供给有效基础数据。用无菌棉拭子蘸取已经校订的麦氏比浊浓度的菌液，挤掉剩余菌液。用棉拭子涂布整个MH培育基面，每次将平板旋转60°，涂抹三次，最后沿周边擦绕两圈，以保证菌液涂抹均匀。待平板上的水分被琼脂完整汲取后贴含药纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴后不行再拿起。每个平板贴5张纸片，纸片间距许多于24mm，纸片中心距平皿边沿许多于15mm。在菌接种后15min内贴完纸片。将平板反转，37℃恒温孵育18~24h后拿出，用游标卡尺丈量抑菌圈直径，由平板反面丈量最靠近的整数毫米数并记录，每个平板各设三个平行组平板，丈量抑菌直径时，应取三个平板的均匀值为最后结果。抑菌环边沿以肉目睹不到细菌显然生长为限。每次药敏试验用大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923做质控。药敏判读标准依据CLSI标准(2009年)所载受试药对证控菌的抑菌环直径范围作为实验质控标准（判读标准见表5-2）。表5-2纸片扩散法－用质控菌株抑菌环直径(mm)同意范围监测抗菌药物敏感性试验正确性Table5-2Discdiffusiontest－accordingtheadmissiblerangeofquality-controlstrain’sinhibitionzonediametertomonitortheaccuracyofantibioticssusceptibilitytest(mm)抑菌环直径(mm)抗菌纸片含药金黄色葡萄药物量（μg）SIR大肠埃希菌球菌ATCC25922ATCC2592315–KF30≥18≤1416–2227–351714–AMP10≥17≤1328–3527–281616–CIP5≥21≤1530–4022–302013–NOR5≥17≤1215–2129–3716KF:头孢噻吩；AMP:氨苄西林；CIP:环丙沙星；NOR:诺氟沙星；S:敏感；I:中介；R:耐药