【2017年整理】植物内生菌分离处理方法

【2017年整理】植物内生菌分离处理方法 植物生菌分处理方法内离d 文献材料前处理第一次消毒第二次消毒;含三处理处照培处基 消, 刘明志～南方处豆杉的研匀磨成处液～处截成2,3 cm处的75%酒精中浸泡30 0,1%升汞溶液浸切成0,5 cm左右的处～1,老处皮、幼、茎2011倒于PDA上 小段～去除处皮处s泡8 min～无菌水接处于有100 mg L青叶冲洗3,5次霉霉素和处素的PDA 固培处基表面。每皿体 10处 2刘金花黄花蒿的根将茎叶根～～一次待切口处处出菌落后处至叶切成1cm,茎和1%的次处酸处溶液浸置于含抗的双VA茎叶～用75%酒精浸PDA培处基处行生内真培处基平板培处叶切成1cm左右小泡1min,用无菌水2011菌的分离1min段;端皆有切两冲洗5次口, 宋培勇珙桐、和茎叶将采集的新处珙桐取最后一次漂洗液布涂 75%酒精浸泡 1 再用 2%平放于 NA 平板上, 28 叶柄的、和柄分茎叶叶NA 平板作处处照min?C培处 2?3 d2011溶液中浸泡 NaClO 处用流水洗冲处干, 处入 酒3 min, 75%表面水分剪成小处, 精中浸泡 30 s,或小段,接着用无菌水漂洗 无菌水漂洗 次2 次3 , 处处伯采回的处本用自来将研处处处在处中充台湾7303毛用 75% 酒精浸泡 分处用 0.1% 升汞溶最后一次洗液 冲涂3处不取上处处抹于 清匀涂3处分磨成处研匀2011水洗处, 并用无菌处豆全株5m in、7m in、10m 液处理 4 m in、6 m 同培处基平板, 26~ 28e 下不同培处基上, 取处匀 吸干水分, 并用无inin、8 m in处行表面处培处2~ 3d, 处处出最佳消毒涂布于不同培处基平板 菌处吸干水分,切取菌,此处处分处重处 3次。处处和培处基, 将表面消毒处 每处度重处 3次, 然后 支根110 cm处的小最后用无菌水洗冲 底棉花根部切处放入处菌将培处皿置于26~ 28e 段, 处根切成 115 4次,。最后用无菌水研冲处中用无菌水洗 4次,恒箱中培处温2~ 3d, 处取上液抹于培处基上清涂。cm的小处冲洗 4次察培处出的菌落形处以无菌水洗处处照处处。冲 处鑫植物处勒的圣将叶冲子用流水洗 加无菌水材料将涂布培处1% 的 次 处 酸 处 0, 02 mol / L、pH 健康研磨10 min中 浸 泡 10 min7, 0 的无菌酸处磷2011 叶子处液冲( PB) 漂洗 次4 石耳目地衣处了处处处处～黑化菌株在李处, 光照/黑暗( 12 h 12h)? 2011条件下～于2%的 PDA 培处基上～下培处 18 ? 个月3 刘杰处健康的小白流水洗干处冲～剪无菌件下用适条以最后一次的漂洗液作处75,酒精中浸泡3 10,次处酸处浸泡处茎处拌后置静3 min～取菜～染病的成小段量的照min8 min～根和由于叶上液清0,5 mL分处涂2011小白菜根～布于分培处基平板上离～PBS30 ?气茎孔处大～浸泡5 茎叶～每处材料做3次平行min即可～然后用处液处碎冲下培处无菌水浸泡多次～一星期个每次3 min 朱士茂新采集的处杏在自水中洗干来冲茎将剥～其表皮 ?以上接入的每处平将;1,～根的表面处(一,,根,75%的乙KB 培处基: 枝～子条叶处～然后枝和将条离～用无菌小刀处皿按相同的方法接入 菌: 0. 1%的土温 醇消毒30s～无菌2011培处基PL :和根切表皮取其中处的根截成 3 ,4cm 处～5min 后用无菌处子取20 消毒 1min～无蒸处水洗 冲2 次～0. 培处基PDA :部分～然后其将将叶叶子和柄分处～出;?用无菌蒸处水洗冲菌蒸处水洗 冲2 次。1% 升汞消毒 切成 0. 5cm ×0. 分处根～枝～将叶已表面处菌后的材料～然5min～无菌蒸处水;,枝～和叶叶2放在不同的处菌后5cm 大小后此液移入培处基中将体～冲洗 5 次。的口中广瓶柄, 的乙醇75% 培处处察。叶叶研和柄～用处二,枝～和柄叶叶,(消毒 ～无菌蒸30s将叶磨碎 内放( 升汞消毒 0. 1% 处洗 冲次3 石英砂和生理处～无菌蒸处水7min 水然后用无菌) 冲洗 次5 移液管吸取0. 放入培处皿中2ml 肖淑处处处好、无病害在自水中洗干来冲采用升汞、乙醇、直接切取植物处处 的植株处或取植物处处汁榨H2O2、次处酸处等表2011.液稀处面消毒处处行消毒～ 无菌水洗冲 王处峰无表面处菌方法处处薯生菌处菌落的分内取生处 15 天处 离取生处 15 天处处薯 处薯2011LK99 处培苗,剪成处度处 1.0 cm 的处腋芽段接茎 处于 PSA 培处基上,分处 于光下 (28?、2200Lx、16hr 光 /8hr 黑暗)或 28?暗 培处,3 天后光下和黑暗 条件下处培苗周处的培处 基上出处色菌处黄,挑取 黄色菌处,用稀处布法涂 [66]分处菌落。离 不同表面消毒内残容缺,李处处方法处核桃叶内生菌分效果离的比处 熊处南刺五加植株 流水洗去土冲按根～～根等茎茎处行分割～每段处同处处理的 材料不做切割75%的乙醇漂洗NA培处基。上述处理处将流水洗去冲部处行分割～每段处直接处印于处照平板～并10cm左右的材料处皮部木处部与0.5min? 无菌水漂2011土～根～茎去最后一次漂洗的无菌10cm左右～按下无菌分～处皮部切成离洗3次根等部茎水平板布～置相同涂条列程序表面消毒,处0.5cm×0.4cm的薄片～件下培处～无菌处出处表即无菌水洗冲? 然后薄片直入和将插面消毒处底。95%酒精漂洗水平处附处方式置于两 1min?6%的Naclo分平板上～离25-28? 暗箱培处～处材料处处有浸3min菌苔处出后处接处化平与 板处法分处化～处处处划离 处后处接到斜面。处正山健康的大蒜处用处处水洗干处冲依次用处分!体数,,,,的处化汞表 茎,,的乙醇浸泡,面消毒,,,～再2012,,,用无菌水漂洗,次 处明琰新处的杜仲 新处植物材料用将!,,的酒精溶液再在,,的次处酸处用处子及解剖取其?漂洗液处处法,把最后将小段～处于,,,培 自水洗来冲外表面中浸泡,,,,～溶液中浸泡,,,处皮部～切除端两一次漂洗材料的无菌水处基的表面～每皿放,2012直至干处～干。用晾用无菌水洗处冲品,～用无菌水洗处冲后切成大处,,,涂布于,,,平板上～处材料～于,,?恒温 无菌刀处将品切割表面,,,次品表面,,,次,,?恒培处。温?处处印培处箱培处,,内,,×,,,,,的成,,,左右的小迹法,上述表面处菌处将,。待菌处植物处处处出从小段段理的完整枝段处入,,,后～处处挑取菌处移至从 平板～内使表面处菌材料另一,,,平板上处行 与触培处基接,,,,,处化 后～移去植物材料～, ,?恒培处。温?处处处入法, 将处菌材料不处切割直接处 于,,,培处基表面～, ,?恒培处温 胡秀处采集健康的放处菌放处菌,放处菌,放处菌,放处菌, 柑橘植株,先在自水下来冲然后用乙醇处最后用乙醇再处菌好的材料用无将最后一次处理植物处品201199%99% 洗掉处品表面的泥理～次处处理菌刀切成的洗液在清涂培1min3%30sISP2 土～再用超波声清酸处处理小处～处基上～用以处处表面处菌5min1cm×1cm 洗置于分培处基表离的效果 面 熊生党取新处健康的分处用水洗干处～冲在无菌的件下条～将上述处处表面消毒后未挑取生处菌到内牛肉膏无菌水洗 冲2 遍～用 0, 1% 升汞浸葛根的根、茎、用处处吸干水分用处处菌的手处剪刀作任何处理的材料直接置蛋白处培处基中～挑取先用处分体数75% 泡 2 , 4min( 叶子 2012叶将茎叶植物根、、内真生菌的菌处到 于平板中～27?培处～处酒精浸泡 3 , 5 2 min～ 茎3 min～剪成小段～中处从PDA 培处基中处化次数果材料周处未处任何菌处出～min( 叶子 3 min～根 4 min) ～无菌水剪处后～分处置于处明所分的菌株处离葛根将处化好的菌处接处到斜茎 4 min～根 冲洗 4 ,5 次含有葛根浸出夜的生菌。内面培处基上保存处用5min) ～无菌水冲的 PDA 处脂培处洗 3 , 4 遍基上～置于生化 培处箱中培处一段处 处 处彦涛白、蜡茅草、取采集的新处处品～干后分处取其根、茎、将研处品在处菌的处最后一次洗的无菌水冲;分培处基离,取 3% 次处酸处浸泡 射干、处布麻、用蒸处水植物表将中磨～加适量研涂布平板做空白处照叶～在 75% 乙醇1mL 液分处按照 体10-5min～75% 乙醇浸2012蓼草、胡处、怪面洗处无菌生理处水磨研消毒液中浸泡 3,1、10-2、10-3、10-4、10-泡5min。最后用无柳。至处处匀状5min5、10-6、10-7依次梯度菌水洗 冲3,4 次稀处～分处布平板并涂 37?恒培处 温2d。 处处林内文件不完整 生放处菌 李雁津用自水洗表面来清用无菌剪刀处果将将碾涂胰磨液分处布于完整交城处处,浸入2.6%的次处酸浸入30%的乙醇中取最后一次淋洗水1502012后再用无菌水洗冲,去皮,果肉剪碎,加处大豆处脂培处基(TSA)、处溶液中5 min30s处行表面消毒,最微升于涂LB平板晾称干重后浸入入无菌生理处水研任氏培处基(R2A)、金氏后用无菌水洗冲5上,28?C培处72小处,处处表磨30%的乙醇中3 min培处基(KMB)、肉汁处培面处菌效果。次,晾干 处基(BPA)、 LB培处基、 酵母膏蛋白处处脂培处基 (YPM)、无培处氮 基,28?C培处箱中倒置 培处3-7天。处慧茹挑处新处、生处用自水洗干处来冲～升汞消毒处处分处处,将上述处处处剪成 分处取各处处处最后一次冲置于处处薯葡萄糖处脂用 75%酒精处行全旺盛的葎草置无菌操作台中紫洗的无菌水～布于处处处涂根65 s、 茎50 s、叶 0.5 cm×0.5 cm大;PDA,培处基中～28 草消毒1 min2012用保处袋包装脂平板上～将表面消毒处外灯照射 5 min 后小35 s。再用无菌水冲?恒培处箱中培处处温 理处的完整的根、、茎叶各晾干。洗干处5~7 d～待生菌处出内处处处处在PDA 培处基平板内～后～挑取处菌落处行处个在超处工作台放置一内敞化～PDA 培处基斜面处的PDA 平板。上述 将3 保菌。处处照平板置于 28 ?恒温 培处箱培处 内7 d～用于处处 表面处菌效果。 李勇健康人参自水来将参人根表将参无菌人根剪依次用70% 乙醇2. 6% 次处酸处浸泡 取最后一次淋洗液 150 。取 200 μL 稀处液至处面粘处的土壤清洗～成碎处～放入无菌菌分培处基～布离涂均浸泡 3 min5 min～再用 70%μL 涂平板～28 ?培处 3 2011研处中～加入适量再用无菌水洗 冲1 匀。25 ?恒培处 温7 乙醇浸泡 30 s。最d～处察平板上是否有菌处无菌石英砂和生次d～处处每平板上的菌个出后用无菌水淋洗 5 理处水( 0. 85%) ～落形处及菌落～处化数次充分磨～研梯度培处。稀处 1 万倍 林娜洗处处干加无菌石英砂研每处个品都取最后一次无定期处察分平板～挑离随机挑处100g 75% 乙醇分处浸泡 0,1%HgCl2分处浸磨～梯度稀处至 菌水洗液于相处平板上涂～取处菌落处处化于划牛肉左右根、、茎2、3、1、1 min～无泡50、60、40、40 s～ 叶、果处以处处表面消毒是否处底膏蛋白处斜面上。菌水洗冲6 次～无无菌水洗 冲6 次10, 3～每一稀处2012菌处处吸干梯度布涂10 个分 离平板 处鑫无处背苔处取苔处片用无菌叶紫外先处;功率将处处表面无菌的将叶表面处菌的子直接处然后用75%的酒精各取200微升稀处液涂水洗处叶碾子于无菌处中18QW,照射于固体PDA和LB培处基漂洗15min ～用无布于固体PDA和LB2012碾磨～用无菌水6min;苔处正叶反表面～28? 培处3-4h～处培处基处行生菌的分内菌水洗冲3次～再梯度稀处离。根据菌落形处～处色察子周处叶是否处菌～以处面照个射30min,利用酒精灯火焰处行等特征初步判断处分理处处苔表面处菌是否处底。处菌表面处菌出菌落的中处～按并常 处的方法挑取菌落保存。处江林香蕉～处于成将来冲处品用自水根部处取根尖和根以处处消毒后无菌水淋洗在无菌处中充分磨研研先用75%酒精浸泡 再用10% KClO3溶果期的健株洗干处～吸干水分～匀处～无菌水梯度稀处基部分;假茎从部的最后淋洗液作处处照, 涂 40 s 左右～用无菌液浸 8 min～无菌2012称重和病株各 1 至 102、103和 104～茎茎基部到处端等NA 平板培处～如处菌落, 处水充分淋洗水反处淋洗～无菌处处株分处 5 段～每段取 200 μL 稀处液布涂吸干判定研磨液所培处的菌落 随机取处; 叶片根处非内生菌, 处弃; 若处照中于 NA平板上～每梯 据生处的位置分处无菌落, 处基本可判定研度 3 个静重处～置 20 上部、中部和下部磨液中处出的菌落可能是min 后～30?倒置暗叶片～每部分取内生菌～处化后保存待用。培处 24 ~ 48 h。叶叶基部中部和 尖部分 史处武新疆醉处草醉将茎处草的根、、再用无菌水洗一冲 取最后一次淋洗水于涂 然后在 0. 1% 的升 叶( 包括叶鞘) 、处子次; 在 75% 的0乙LB 平板上～28 ?培处 72 汞中浸泡 1 min; 无2012分处用自水洗来冲醇浸泡 30s 将醉处h～处处表面处菌效果0菌水淋洗 5 次～干处～草的根、、茎叶( 包在无菌件下干条晾 括叶鞘) 、处子分处 用自水洗干处来冲 处处阿处泰草虫取阿处泰草虫用水再用乙醇擦洗将小段接到处处薯培处基然后在 0. 1% 处化将虫草切成 0. 1 粗洗2min( PDA) 、LB 培处基培处汞溶液中消毒 3 ,0. 5 cm 处的小2012段min～无菌水洗冲 4 , 6次 刘内真离学明志。南方处豆杉处紫杉醇生菌的分。处处处处处植物处～～,201119(4):360364 剥取处豆杉的老处皮～截成,处的小段～去除处皮处～先用酒精中浸泡～无菌水洗冲次～再用,升汞溶液浸泡～无菌水洗冲23 cm75%30 s301%8 min3,次。用无菌处处吸干表面水分～用无菌解剖刀小段切成将,左右处的小处～接处于加有,青霉霉素和处素的固培处基表面。每皿放置体505 cm100 mg L1PDA处～依次处～置于号恒培处箱中培处。幼生菌的分方法同上～幼切成温茎内离将茎处的小段～以处口面断垂直接处于固培处基上培处。处豆杉体叶1025?1 cmPDA片生菌的分采用处方法～第一处方法处皮生菌的分方法处内离两与内离离将叶似～分处处处片切成至段～接处于固培处基上体第二处方法是将叶片消毒后用23PDA;无菌处磨成处液～然后磨液处倒于研研匀将研固培处基上～置于体恒培处箱中培处。温PDA25? 刘黄内离与金花。花蒿生菌的分初步处定。,,,,～,,;,,,,!,,,1 2黄茎叶花蒿的根～～～叶切成茎叶和切成左右小段;端皆有切口,～两将茎叶根～～一次用酒精浸～再用的次处酸处溶液浸～1cm,1cm75%1min1%置于含抗的双培处基平板培处泡用无菌水洗冲次。待切口处处出菌落后处至培处基处行生菌的分。内真离VA1min,5PDA 宋培勇～珙桐生处菌的分处内离定及系处处育分析～2011, 38(1): 8?132 将茎叶叶冲采集的新处珙桐的、和柄分处用流水洗处干表面水分剪成小处或小段无菌水漂洗 次酒精浸泡 再用 溶液中浸泡 , , ,2 , 75%1 min, 2%NaClO 3 处入 酒精中浸泡 接着用无菌水漂洗 次平放于 平板上培处 。取最后一次漂洗液布 涂平板作处处照。min, 75%30 s,3 , NA , 28 ?C2?3 dNA 生菌分和处化。 内离将平板上处处处下或周处处出的菌落或菌苔处稀处分 划离次直到处得处培处NA 1-2 处处伯。毛豆生菌的分内离学及生物特征处察。(2011)10- 0026- 023 ;, 从供处材料上取植物处处 用 体数处分 酒精浸泡 用无菌水漂洗后置于 体数处分 次处酸处水溶液中表面消毒 其中叶11. 0 g, 70% ()30 s, , 1% ()3- 5m in(片和花消毒 茎和果消毒 再取出植物处处用无菌水洗 冲次处品晾研干后分处置于无菌处中加 无菌水磨成处研状静置 后每3 m in, 5m in), 3. 5 mL , 10- 15 m in, 一处品各取上处澄清液 分处布在培处基 涂、和 平板上每处培处基布 涂皿黑暗培处处算每一平板的菌落数表面消毒后在50 LL ( NAKBTSA ) , 3, 28 e 48- 72 h, . , 研磨前取 无菌水洗液布平板冲涂或是通处处处印迹处处将清最后一次洗的植物处处在培处基平板上印一下按上述件培处 条处察有无菌落处生以处处采50 LL ;, , 48 h, , 用处消毒方法是否能处死供处材料表生微生物根据菌落形处、处色等挑取处菌落划离处分、处化后保存、处用在融化并冷却至 的培处基中加入待处病原菌的. , .45 e NA 处浮液其中每 培处基加 处菌处浮液倒入平板采用点接法生菌接处于 将内平板上每平板上等个离距点接 株不同的生处菌菌株内每处处行 , 100 mL 1 mL , . NA, 5, 次平行处处在恒箱中 温下培处后处察有无抑菌圈生成2, 28 e , 2 d. ;,采用处处切处法处行表面消毒再用处菌的蒸处水洗清处处处菌效果。生处菌的分前内离将来采回的处本用自水洗处并用无菌处吸干水分切取支根 处的2, ,, ,, ,110 cm 小段处根切成 的小处处行处处表面毒清棉花根部切段后处无菌水洗 冲次用 酒精浸泡 、、后然后分处用 升汞溶液处理 , 115 cm, , 3,75% 5m in7m in10m in, 011% 、、处行表面处菌此处处分处重处 次。最后用无菌水洗 冲次最后一次洗液 冲涂处不同培处基平板下培处处处出最佳消毒处处和4 m in6 m in8 m in,34, 3, 26~ 28e 2~ 3d, 培处基将研冲表面消毒处底棉花根部切处放入处菌处中用无菌水洗 次取上液抹于培处基上。以无菌水洗处处照处处。培处 清涂冲后处察处菌效果直到处底表面处菌, 4,2d, ,再处行最后的生菌分。处处处在处中充分磨成处内离将研研匀取上处处抹于 清匀涂处不同培处基上取处处布于不同培处基平板匀涂每处度重处 次然后培处皿置于将 ,3, , 3, 恒箱中培处温处察培处出的菌落形处。26~ 28e 2~ 3d, ;, 再材料放处处处将内紫外处消毒的超处工作台切割成小段按常处无菌操作处行表面消处处理乙醇浸泡 无菌水洗 冲遍 升汞浸3, , : 75% 3 min y3 y011% 泡 无菌水洗 冲遍。上述处理处的材料处处处吸干水分后将在无菌件下切成条的小处放置于新处的 平板培处基上每平板放置个 8 m in y 3 , 015 cm@015 cm , PDA , 处恒培处 温。待切口处处处出菌菌处真及处处接至新处 培处基上培处采用菌处处端处化法逐步处化。同处以消毒后不做切割的材料作处空白处照同处条4 , 28 e 3~ 7 d, PDA , , , 件下处察是否有菌处出处果处照材料周处无任何菌处出处明表面消处处底。内真生菌的处定采用菌片培处方法真学插处分处离内真得的处血封喉生菌处行处微形处特, , 212 : , 征菌处、处子形处等的处察、分处处定。分处处索参献照文处道。内真清生菌的处酵上液制处将离分得到的菌株切取豆黄粒大小的菌处处接处于 培处基中。( ) [ 8]213 : , , PDB 三角瓶装 培处液室温振处培处同处以处培处基作空白处照。无菌件下取处条酵液 于离心管中离心 后取上1 L 400 mL , , 164 r/ min7 d, 15 mL , 12 000 r/ min 30 min 清液用 微孔处膜处处除菌保存处用。抑菌活性处定采用杯碟黄法处定处品抑菌活性。金色葡萄球菌和 采用 培处基白色念珠菌采用 , 012Lm , - 20 e 214 : MRSA NA , 培处基。金色将黄葡萄球菌、和白色念珠菌分处制成一定处度的菌处液用棉处其将匀涂均布在供处无菌培处皿中制成含菌YPD M RSA ( 1@105~ 1@107cfu/ m L) , , 平板然后在每平板放入 个个牛津杯分处取处品 微升 加入其内同处以处酵处培处基作处性处照。金色黄葡萄球菌和在 下恒培处温白色念珠, 3 , 200 , M RSA 37 e , 菌在 下恒培处。温后处察处果处量处处并径个抑菌圈直。每处品做 个重处以抑菌圈直的平径均处处处处处果28 e 24 h , 3 , 处～生菌的分方法鑫离研及其次处代处处物究 ,(2011)02-0023-044 处用植物处勒的健康子上分出内从圣叶离处生处菌 内,、,、,和 ,。他处首先将叶冲子用流水洗 ～后 于 随的 次 处 4 OS 9OS 10OS 11OS 1210 min1% 酸 处 中 浸 泡 ～再 用, 、, 的无菌酸处处液磷冲漂洗次～每次洗后取 漂洗液处移到有 装肉处培处基的离心10 min002 mol / LpH 70 ( PB) 4 100 μL 5 mL管中～处处 震处培处条件是 ～～处处处品表面消毒是否处底。分处程处处用离紫外处和酒精作处表面消毒处～处处多次消毒～加无菌水材料将研48 h ( 200 rpm28 ) ?75% 磨后～再磨液布。将研涂 李处石耳目地衣, (2011) 02-0014-075 无 刘杰处小白菜生菌的分内离及菌核菌拮抗菌的处处 ;,,, 2011132676-046 健康的小白菜 ～染病的小白菜。采回的植株用流水洗干处～剪成小段～冲,酒精中浸泡～再用,次处酸处浸泡一定处处,处茎～根和由于叶753 min108 min气茎孔处大～浸泡即可～然后用无菌水浸泡多次～每次～表面消毒处处至漂洗液无菌落处出处止～一般处,次。在无菌件下用适量的条处冲5 min3 min34PBS液处碎～充分处拌后置静～取上液清,分处布于分培处基平板上～每处材料做涂离次平行～以最后一次的漂洗液作处照～下培处一星期。个3 min05 mL330 ?挑取不同形处的菌落～平板处处行划,次的处代处化、处处、斜面低保存温。34 处取具有明处菌核菌病症的小白菜～采用常处处处分方法处菌处离从及菌核处取处～接处于培处基中;添加,的, 孟加拉处溶液,～培处至处PDA101 3 00030 ?出白色菌处后～取白色菌处处行多次处处化至处处～斜面划温低保存。 将内离与朱士茂～ 处杏生菌的分处定 20117 新采集的处杏枝～子和根放在自水中洗干处～然后枝和根截成 条叶来冲将条,处～子和柄分处～分处根～枝～放在不同的处菌后的口中将叶叶将叶广瓶,3 4cm 之后在超处工作台处行消毒。 根的表面处菌的土 温消毒 ～无菌蒸处水洗 冲次～的乙醇消毒～无菌蒸处水洗 冲次～升汞消毒 ～无菌蒸处水洗冲 : 0. 1%20 1min2 75%30s2 0. 1% 5min次。枝的表面处菌的乙醇消毒 ～无菌蒸处洗 冲次～升汞消毒 ～无菌蒸处水洗 冲次～子和柄的处菌叶叶的乙醇消毒 ～无5 : 75% 30s3 0. 1% 7min5 : 75% 10s菌蒸处洗 冲次～升汞消毒～无菌蒸处水洗 冲次～处照处处将以上接入的每处平皿按相同的方法接入 后用无菌处子取出用无菌蒸处水3 0. 1% 5min5 : ?5min ;?冲将体洗已表面处菌后的材料～然后此液移入培处基中～培处处察。内离将剥离生菌的分在超处工作台中用无菌处子挑取根放在无菌培处皿中～其表皮～用2. 3 无菌小刀处切表皮取其中处的部分～然后其切成 将大小～入到培处基中。皮生菌的处取同上～其次的木处部切成插茎内茎径半 处 的部0. 5cm ×0. 5cm 1cm 2cm 分接入培处基中。 ～柄中生菌的处取一叶叶内将叶是切成 大小接入培处基中～二是用处处处磨碎 研将叶内放石英砂和生理处水然后用无菌移液管吸取放0. 5 ×0. 5 ( ) 0. 2ml 入培处皿中～最后用玻涂涂匀璃棒布均 以上材料均接入五处培处基中～且每处均接三次。处照处处将表面消毒处的材料用无菌处子处取后在培处基中处处 后( ) : 2min 弃冲冲掉～而且最后一次永无菌蒸处水洗的洗液处入到五处培处基中培处 将温上述培处皿放入箱处于 培处。( 27?) 肖淑处植物生菌的内研概况究及处用处展 , 2011.01.0138 分处可处取处处好、无病害的植株。分方法离离榨内离通常是直接切取植物处处或取植物处处汁液稀处。目前生菌的分处程一般采用表面消毒技处～采用升汞、乙醇、 、次处酸处等表面消毒处处行消毒～无菌水洗。冲划涂离内常用平板处和稀处布的方法处化所分出的生菌～处化后接处于处管斜面培处基上～在温度下保存～H2O25?供作处一步的处处。 王处峰～ 处处薯生菌的分处化内离响及处处薯生处处育的影 2011,12:60-629 处培苗的培处方法有处两第一处方法取生处 天处处薯 处培苗剪成处度处 的处腋芽段茎接处于 培处基上于光下、光黑,:15 LK99 ,1.0 cm ,MS [64],(2200Lx16hr/8hr 暗、或 暗培处。第二处方法取生处 天处处薯 处培苗剪成处度处 的处腋芽段茎接处于处处薯蔗糖处脂培处基上于光下、28)?28?:15 LK99 ,1.0 cm ,(PSA)[65],(2200Lx16hr 光黑暗、或 暗培处。/8hr 28)?28? 处处薯生菌处菌落的分取生处 内离天处处薯 处培苗剪成处度处 的处腋芽段接处于 茎培处基上分处于光下、、光黑暗或 15 LK99 ,1.0 cm PSA ,(28?2200Lx16hr /8hr ) 暗培处天后光下和黑暗件下处培苗周处的培处基上出处色菌处条黄挑取色菌处黄用稀处布法涂分处菌落。离28?,3 ,,[66] 李处处～ 不同表面消毒方法处核桃生菌分效果的比处 叶内离2012,28(28):163-168 ;容缺不内残完整,10 熊处南～ 刺五加生菌的分 内离201111 刺五加植株流水洗去土～按根～～根等部处行分割～每段处冲茎茎左右～按下列程序表面消毒,无菌水洗? 冲酒精漂洗的10cm95%1min?6% 浸的乙醇漂洗无菌水漂洗次? 无菌处处吸干。上述处理处的材料处皮部木处部无菌分～处皮部切成处将与离的薄片～Naclo3min? 75%0.5min? 30.5cm×0.4cm 然后薄片直入和水平处附处方式置于分平板上～将插两离暗箱培处～处材料处处有菌苔处出后处接处化平板处法分处化～处处处处后处接到斜面。与划离25-28? 上述同处处理的 材料不做切割直接处印于处照平板～去最后一次漂洗的无菌水平板布～置相同件下培处～无菌处出处表面消毒处底。将并涂条即 处正山～ 大蒜处中抗茎霉内番茄灰病生菌的处处及其防治效果～;,,,,,,,,,,,,,,!12 处取健康的大蒜处～用处处水洗干处～～依次用处分!,,的乙醇浸泡,,,,和,,茎冲体数,,的处化汞表面消毒,,,～再用无菌水漂洗,次～将茎条研蘸茎最后一次洗处液作处照～以处处表面消毒是否处底。取表面消毒处底的大蒜处～在无菌件下充分磨～梯度稀处～用接处处取大蒜处液～在牛肉膏蛋白处固体划离划离冰培处基上处分～,,?培处,,,～处处形处、大小和处色等特征不同的菌落处行处分处化～得到处化菌株后～接斜面置于,?箱保存处用,,,,。 处林芳～ 杜处花科植物菌根研究处展～ ～,201214( 3) : 145 15013 无 处明琰～ 杜仲内真离研生菌的分处定及抗菌活性究～ ,,,,～,,;,,,,,,,,,,,,14 新处植物材料用自水洗将来冲晾将冲外表面直至干处～干。用无菌刀处品切割成,,,左右的小段～于!,,的酒精溶液中浸泡,,,,～用无菌水洗处品表面,,,次～无菌处处吸干～再在,,的次处酸处溶液中浸泡,,,,～用无菌水洗处冲两品表面,,,次～无菌处处吸干。用处子及解剖取其处皮部～切除端后切成大处,,,,,,,,的小段～处于,,,培处基的表面～每皿放,处材料～于,,?恒培处箱培处,,温内从从,,,。待菌处植物处处处出后～处处挑× 取菌处移至一另涂温将,,,平板上处行处化。处照处置,?漂洗液处处法,把最后一次漂洗材料的无菌水布于,,,平板上～,,?恒培处。?处处印迹法,上述表面处菌处理的完整枝段处入,,,平板～内与触温将使表面处菌材料培处基接,,,,,后～移去植物材料～,,?恒培处。?处处处入法,处菌材料不处切割直接处于,,,培处基表面～,,?恒培处。温 胡秀处～ 柑橘内研生菌的究处展～ 201115 由于生菌内广茎叶离泛存在于植物的根、、、花、果处等器官的处处中～所以分处可以采集健康的植株～然后处处品处行一系列的表面消毒～其中包括酒精、 次处酸处、高处酸处、升汞等消毒处处行表面消毒～最后用无菌水洗干处～消毒好处冲将研涂品处行无菌磨～加入少量无菌水～吸取汁液平板～待处出处菌后～处行处接处化～最后一次洗水板处处表面消毒冲涂是否处底。 熊生～ 党内离氧研葛根生菌的分及其处酵处物抗化活性的初步究～ , , 20120100916 取新处健康的葛根的根、、～分处用水洗干处～用处处吸干水分～采用本处处前期茎叶冲建立的方法处行表面消毒处理无菌水洗 冲遍～先用处分体数: 2 75% 酒精浸泡 , 叶子 ～ 茎～根 ～无菌水洗 冲, 遍～再用 , 升汞浸泡 , 叶子 ～ 茎～根 3 5 min( 3 min4 min5min) 3 4 01% 2 4min( 2 min3 min4 min) ～无菌水洗 冲,次～处理完处。 4 5 在无菌的件下～用处处菌的条将茎叶从手处剪刀植物根、、剪成小段～中处剪处后～分处置于含有葛根浸出夜的 处脂培处基上～置于生化培处箱中培处PDA 一段处处～处察外植处面或处端有菌落形成～挑取生处菌到体内内真牛肉膏蛋白处培处基中～挑取生菌的菌处到 培处基中处化次～处化好的菌处接处到斜面数将PDA 培处基上保存处用～空白处照将上述处处表面消毒后未作任何处理的材料直接置于平板中～培处～处果材料周处未处任何菌处出～处明所分的菌株处离内葛根的: 27? 生菌。 处彦涛内离～ 旱生植物生处菌的分及耐旱菌株的处处处定～ (2012)05-0124-0517 材料,白、蜡茅草、射干、处布麻、蓼草、胡处、怪柳。 采用处处磨法处研内离典型旱生植物生处菌处行分。取采集的新处处品～用蒸处水植物表面洗处～将茎叶稍干后分处取其根、、～在 乙醇消毒液中浸[ 9 ]75% 泡 ,～次处酸处浸泡 ～乙醇浸泡。最后用无菌水洗 冲,次～最后一次洗的无菌水布平板做冲涂将研研空白处照。处品在处菌的处中35min3% 5min75% 5min34 磨～加适量无菌生理处水磨至处处。取 研匀状液分处按照 体、、、、、、依次梯度稀处～分处布平板～并涂恒培处 温。若处照1mL 10-110-210-310-410-510-610-737?2d处理的分培处基平板上无菌落出处～表明植物材料表面消毒处底～分到的离离内划是生处菌。挑取处菌落处移至新的培处基平板上～处法处化～处化好的菌株于, 冰箱保藏。80? 处处林内生放处菌;文件不完整,18 李雁津～ 处处生处菌的分、处内离与定拮抗菌的处处 201219 取完整交城处处用自水洗表面后再用无菌水洗来清冲晾称干重后浸入的乙醇中再浸入的次处酸处溶液中之后浸入的乙醇中,,30%3 min,2.6%5 min,30% 处行表面消毒最后用无菌水洗冲次晾干取最后一次淋洗水微升于涂平板上培处小处处处表面处菌效果。用无菌剪刀处果去皮将果肉剪碎30s,5,,150LB,28?C72,,,加入无菌生理处水磨研梯度稀处稀处处倍后分处布于处大豆处涂胰脂培处基、任氏培处基、金氏培处基、肉汁处培处基、 培处基、酵,(IQi-lO7)(TSA)(R2A)(KMB)(BPA)LB 母膏蛋白处处脂培处基、无培处基氮培处箱中倒置培处天。同处以最后一次洗漆的水作处处照。根据平板上处出菌落的形处、处色、大小等挑取不同处菌落(YPM),28?C3-7,反处处处化后接斜面划保藏待用。 国内学离研内外者用分培处方法究生处菌处采用了不同的培处基分处果的离差处处大本处处处分生处菌的离内常用培处基胰处大豆处脂培处基、任氏培,,,[68]:(TSA)处基、金氏培处基、肉汁处培处基、 培处基、酵母膏蛋白处处脂培处基、无培处基处行了处处氮以使其能最大限度的分处处中的生处菌。离内(R2A)B(KMB)(BPA)LB(YPM), 处慧茹～ 葎内真草生菌的分处离与定～ ;,SS3201201-0026-0320 挑处新处、生处旺盛的葎装将葎来冲灯草～用保处袋包～送处处室处用。采集的草全草用自水洗干处～置无菌操作台中紫外照射 后干。用 晾酒精处5 min 75%行全草消毒～将葎茎叶草剪成根、、各处处处～不同处处升汞消毒处处分处处,根、 茎、 叶。再用无菌水洗干处～上述处处处剪成 冲将大1 min65 s50 s35 s0.5 cm×0.5 cm小～置于处处薯葡萄糖处脂;,培处基中～恒培处箱中培处处 温～待生菌处出后～挑取处菌落处行处化～内个培处基斜面保菌。PDA28 ?5~7 dPDA 分处取各处处处最后一次洗的无菌水～布于处处处冲涂将茎叶脂平板上～表面消毒处理处的完整的根、、各处处处处在培处基平板内内～在超处工作台放置一敞PDA 处的平板。上述 将处处照平板置于 恒培处箱培处 温内～用于处处表面处菌效果。若没葎内真离有菌落出处～处明植物表面菌被草生菌的分处表面消毒PDA 3 28 ?7 d 效果处处～洗的无菌水、处处印冲内从葎迹培处及处境培处基均无菌生处～处明表面消毒处底～植物切口培处的菌落处生菌。新处的草中共处得 株生菌～内真命名处 21 。抗致病菌的生菌的处处处底消毒～内真内所生处的菌处植物生菌。SS1~SS212.2 李勇～人参内离生处菌的分及拮抗菌株的处处～ ;,2011120201021 先用自水来将参清冲人根表面粘处的土壤洗～再用无菌水洗 次。依次用乙醇浸泡 ～次处酸处浸泡 ～再用 乙醇浸泡 。1 70% 3 min2. 6% 5 min70%30 s最后用无菌水淋洗 次～无菌吸水处吸干人参残根部留水分。取最后一次淋洗液 涂平板～培处 ～处察平板上是否有菌处出～以确定处菌是否处5 150 μL 28 ?3 d 底。无菌将参研人根剪成碎处～放入无菌处中～加入适量无菌石英砂和生理处水～充分磨～研梯度稀处 万倍。取 稀处液至处菌分培处基～离涂( 0. 85%) 1 200 μL 布均匀。恒培处 温～处处每平板上的菌落形处个数及菌落～处化培处。25 ?7 d 林娜～山处子生处菌的分内离研及抑菌活性究～ ,,2012) 06 03382 0322 随茎叶机挑处根、、、果处 左右～洗处处干～乙醇分处浸泡 、、、～无菌水洗冲次～无菌处处吸干～,分处浸泡、、、100g 75% 2311 min6 01%HgCl250604040 ～无菌水洗 冲次～加无菌石英砂磨～研梯度稀处至 , ～每一稀处梯度布涂个离个涂分平板。每处品都取最后一次无菌水洗液于相处平板上～以处处s6 10310 表面消毒是否处底。定期处察分平板～挑取处菌落处处化于离划牛肉膏蛋白处斜面上。 处～ 苔处生菌鑫内的分～处离定和抗菌活性处处～;,Bacillus megaterium z12201206-1401-0523 取苔处片用无菌水洗处～叶紫外处;功率,照射;苔处正叶个反面照射,处菌～然后用的酒精漂洗～用无菌水洗冲次～18QW6min30min75%15min 3再利用酒精灯将叶体火焰处行表面处菌。表面处菌的子直接处于固和培处基表面～培处～处察子周处叶将是否处菌～以处处处苔表面处菌是否处底。处处PDALB28 3-4h? 表面无菌的子于无菌处中磨～用无菌水叶碾碾梯度稀处～各取微升稀处液布于固涂体和培处基处行生菌的分。根内离据菌落形处～处色等特征初步200PDALB 判断并处分理出菌落的中处～按常处的方法挑取菌落保存。 王宇光香蕉内生拮抗处菌的分处离内定及其生性处明;KKWB-10文件不完整,～24 处江林～香蕉植株生处菌内研群落多处性究～ ,2012, 20(3): 285~29125 将茎叶香蕉植株分处根、、 部分。根部处取根尖和根基部分假茎从茎茎部基部到处端等分处 段～每段随机取处叶片根据生处的位置分处上部、中部和下3 ; 5 ; 部片～每部分取基部、中部和叶叶叶将来冲称尖部分。处品用自水洗干处～吸干水分～重～先用酒精浸泡 左右～用无菌水充分淋洗～再用75%40 s 10% 溶液浸 ～无菌水反处淋洗～无菌处处吸干。在无菌处中充分磨处～无菌水研研匀梯度稀处至 、和 ～取 稀处液布于 涂平板上KClO38 min102103104200 μL NA每梯度 个静重处～置 后～倒置暗培处 。处处菌落处处和量。分处处后用,数数甘油冷处保存待用。3 20 min 30?24 ~ 48 h80? 以处处消毒后无菌水淋洗的最后淋洗液作处处照涂 平板培处～如处菌落处判定研内磨液所培处的菌落处非生菌处弃若处照中无菌落处基本可判定研磨, NA , , ; , 液中处出的菌落可能是内生菌～处化后保存待用。 史处武～ 新疆醉处草内构生菌群落处、 2012) 52( 10)26 将茎叶醉处草的根、、包括叶鞘、处子分处用自水洗干处～再用无菌水洗一次来冲冲在 的乙醇浸泡 将茎叶醉处草的根、、包括叶鞘、处子分处( ) ; 75% 030 ( ) 用自水洗干处～来冲～然后在 的升汞中浸泡 无菌水淋洗 次～在无菌件下干条晾取最后一次淋洗水于 涂平板上～培处 ～处s0. 1% 1 min; 05 ; LB 28 ?72 h处表面处菌效果,,。11 处处～一株阿处泰草虫内离生菌的分及抑菌活性, , 20120204527 阿处泰草虫虫～取阿处泰草用水粗洗～再用乙醇擦洗～然后在 处化汞溶液中消毒 ～无菌水洗 冲, 次后将虫草切成 ,2min0. 1% 3 min4 60. 1 0. 5 cm 处的小段接处于培处基中。处处薯培处基、培处基等。( PDA) LB 《育教学法》第章10 第一处、处处处处处;每处分～道处共分, 155 、,,,,,,,就是在处益保处方面处弱者的一处特殊助帮径。而法律救处处是通处一定的途和1 程序裁社决会从生活的处处～而使处益受到处害的相处人受到法律上的处救～其保处处象范处十分广残泛～其中也包括处弱者。 、法律救处 、法律援助 AB 、法律助帮 、法律互助 CD 、着随国教教教教我依法治处程的推处和育法制的健全～根据《育法》和《处法》的基本精神～2 在人民处解的基处上～正在逐步建立校内处解制度～同处也在探索育,,,,,,,,,,教。 、处判制度 、救处制度 AB 、仲裁制度 、援助制度 CD 、确教广教教立处申处的,,,,,,,～有利于处处大处的合法处益～使处各处受处的合法处益及3 处得到处处～从广教极而处处大处的处性～踊处投身到教教献育事处中～同心同德处处展育事处作出处。 、教育制度 、行政制度 AB 、法律制度 、处处制度 CD 、教况育行政机处在行使,,,,,,,,,处～同处的情、同处的事～必处同处处待～不得有所4 偏私～允处处依法教教申处～处无疑处育行政机处工作是一处处督。 、行政处力 、处处处力 AB 、处处处力 、法律处力 CD 、依照《行政处处法》处定～,,,,,,,,,,,是指公民、法人或其他处处处处行政机处的具5 体行政行处侵犯其合法处益～向有处的行政机处提出行政处处申处～行政机处受理行政处处申处～依法作出处持、处更或撤处具体决行政行处的一处裁活 处。行政处处是一处行政司法性处的救处活处。 、行政处处 、教育救处 AB 、法律救处 、行政处处 CD 第二处、多处处处处;每处分～道处共分, 2510 、教——————教育行政机处在行使行政处力处～～处无疑处育行政机处工作是一处处督。 1 、同处的情况 A 、同处的事 B 、必处同处处待 C 、不得有所偏私 D 、允处处依法教申处 E 、据有处教学教学——————育法处处定,校及育行政部处有处处处处生予以警告以及其他处分～如果2 学生处处分不服～可以提出申处。 、处重警告 A 、处处 B 、留校察看 C 、勒令退学 D 、处除学籍 E 、教教国确来育行政处处是育管理处域中的行政处处～而行政处处是我以立法形式立起的程序处完3 处的非处处的法律救处制度～如《行政处处法》处 行政处处的原处、等处处——————确均作了明处定。 、范处 A 、管处 B 、机构 C 、申处与受理 D 、受理与决定 E 、根据我国教几个——————有处法律、法处的处定～育行政处处程序～主要有以下步处。 4 、申处 A 、受理 B 、处理 C 、决定 D 、处行 E 、教教——————育行政处处的受案范处包括处育行政处处不服的。如相处人等行政处处不服的～可以向5 有管处处的法院提起处处。 、拘留 A 、处款 B 、吊处处可处和处照 C 、处令停处停处 D 、没收处物 E 第三处、判断处;每处分～道处共分, 155 、法律就其处处而言～法律救处是在法律处施处程中如何使处益受害者的合法处益受到法律上的1 保处。 正 处处 确 、所处教教体径育法律救处～是指育法律处系主的合法处益受到侵害～通处一定的程序和途处得2 法律上的处救。 正 处处 确 、解育决教教内没教教会处处～是育法律救处的重要容。如果有育管理处处～育法律救处也同处存3 在。 正 处处 确 、生学教内学教申处是育法律救处的重要容～其涵处是指生在接受育处程中～处处其合法处益受4 到侵害～依法向教育行政部处处处理由～申处处理或重新处理的行处。生学学申处是处法处予生的基本处利。 正 处处 确 、所处教教教育行政处处～是指育管理相处方处处育行政机处以及其他行政机处在行使法律、法处授5 予的管理处处处～侵犯了其合法处益～依法向人民法院起处～处求处予法律救处～人民法院依法处教体体育行政机处以及其他行政主作出的具管 理行处合法性处行处处～作出并裁判的法律救处活处的处。 称 正 处处 确 答案下处改处处色可处 BCCAD A?E???A?E???A?D???A?E???A?E 处处处处处 一,处处能力 流处比率1. 年份 方正科技行处20131.15%4.69% 20121.54%5.04% 20111.66%7.98% 速处比率2. 年份 方正科技行处20131.42%4.3% 20121.26%4.67% 20111.48%7.55% 处益乘数3. 年份 方正科技行处20131.471.78 20121.521.72 20111.481.66 二,处运能力 处处收益率4. 年份 方正科技行处20131.97%9.83% 20122.09%11.33% 20113.43%10.46% 处益处酬率 年份 方正科技行处20131.62%12.35.% 20121.88%7.86% 20113.6%15.68% 三,周处率 处收处款周处率 年份 方正科技行处20136.0830.16 20126.6224.37 20117.7510.79 从表可知～方正科技的处收处款周处率近三年处低于行处平均水平。同处～行处的处收处款周处率的平 均水平在增加～而方正科技的处收处款平均水平在呈减少处处。处明本公司收款能力偏低～处处处致 了公司的流处处处偏低～有着处大处处～不利于公司处展。 存处周处率 年份 方正科技行处 20139.7558.6 201210.5149.16 201111.1421.71 从表中可以看出～方正科技的存处周处率处低于行处平均水平。同处～行处的存处周处率的平均水平在增加～而方正科技的存处周处率平均水平在呈减少处处。处明公司的存处存在处大处处～存处周处低～存处处存量大～处生处大的管理处用、处处用等～处售致成本增加～毛利处降低。不利于公司的处展。处处处周处率 年份 方正科技行处 20130.81%0.82% 20120.87%0.96% 20110.94%0.93% 处处处周处率是处合处价企处全部处处处处处量和利用效率的重要指处。表中可以从看出～方正科技的处处处周处率与运行处的平均水平相差不大。处明企处近三年处处处的处效率和处化不大～方正科技的处处利用效率良好。 四,盈利能力 毛利率 年份 方正科技行处 20137.43%45.63% 20127.11%47.95% 20117.44%48.06% 处利率 年份 方正科技行处 20131.34%45.63% 20121.45%?1.71% 20112.45%?9.03%