天麻活性成分及大川芎粉针剂的研究

天麻活性成分及大川芎粉针剂的研究 天麻活性成分及大川芎粉针剂的研究 代码: 单位: 沈阳药科大学 研究生姓名:黄占波 所学专业:生药学 学位类别:博士 职务: 教授 培养教师:陈发奎 职称: 教授 评阅人:袁吕鲁 职称: 教授 崔征 职称:研究员 评议人:张满来 职称:教授 杨松松 职称:教授 曹颖林 职称:教授 李玉山 职称:教授 殷军 学位论文完成期:年月 答辩委员会主席:袁昌鲁 答辩时间:年月同 计:学位论文页 格个 插 图幅摘要 沈阳药科大学博。学位论文 摘 要天麻为兰科天麻属植物天麻 的干燥块茎,《中国药典》各版列为收载品种,广泛用于治疗头痛、周期性偏 头痛、眩 晕、破伤风、癫痫、神经痛、偏瘫,以及其它神经性疼痛和神经疾病。 本文对天麻原植物、化学成分和药理活性以及大川芎方的研究进展进行了综 述。 从天麻干燥块茎的%乙醇提取物中,利用液一液萃取以及大孔树脂吸附柱色 谱、 .和柱色谱等手段分离得到了个化合物,根据 硅胶柱色谱, 和谱学数据,个化合物的结构被鉴定为:乙氧甲基苯基.一伊一吡喃葡萄糖苷 一?一?,,对羟基苯甲醇 ,,天麻苷,,对羟基苯甲醛一,,对甲基苯基 一一吡喃葡萄糖苷一??伊?,,一二甲氧基苯甲 酸一?伊一吡喃葡萄糖苷,一 ?,,, 二羟基二苄醚’一 ,一对羟苄基腺苷 ,,谷 【?一一,,腺苷,,丁二酸 甾醇,,胡萝苷,。其中,化合物为新化合物,化合物, ,为首次从天麻属中分离得到。 本研究利用高浓度的氯化钾和谷氨酸诱导的细胞损伤作为模型,测试了白天 麻中分离得到的个酚类化合物~的神经保护活性。与模型组相对照可知,在细 胞培养液中预先加入个酚类化合物作保护剂的细胞,存活率显著增加。以上结果表明, 这些化合物能够对抗由氯化钾和谷氨酸诱导的细胞的细胞毒性;同时表明在治疗 神经毒性方面,天麻具有能够成为新的治疗药剂的可能性,至少在一定程度上天麻的酚 类化合物有可能开发成为新的神经元保护剂。 建立了天麻的指纹图谱,对个批次天麻药材的指纹图谱进行了分析,并 将获得的数据进行了相似度评价。结果表明,个天麻样品分为三类,三类样品的相似 度分别在.一.,...和.?.之间。结果表明,不同产地天麻药材含有的化学成 分基本一致,但各成分之间的含量比例有很大差别。 同样,建立了川芎药材的指纹图谱,对个批次川芎药材的指纹图谱进行分析, 所获得的数据进行了相似度的评价。除样品,和,其余样品的相似度均在.以 。摘受 沈药科人学博。学位论文 通过一系列试验设计,分别以天麻素和阿魏酸为指杯成分,研究天麻和川芎 原药材 的提取、精制工艺以及大川芎粉针剂的制备工艺。 对批大川芎粉针及其中间体的指纹图谱进行了分析,用相似度评价了所 获得的数据。通过指纹图谱研究了原料药材、中『日体和大川芎粉针之问的 相关性。 建立了.测定药材、中间体及大川芎粉针剂中天麻素和阿魏酸的方法,并 进行了测定。 综合以上研究,制定了大川芎粉针剂及其中间体的质量。 关键词:天麻;化学成分;神经保护;大川芎粉针剂;.沈阳药科人学博.学位论 文 摘要 , ,,’, ., . % , 一 . .:??伊?,? , , ,一?毋四 , ,一 一肛一舀, , ?一,’ ,伊 ,. ,?? , .曲 . ? ., , ,?. . . . .... . .. .... 沈阳药科人学博学位论文 摘受.. .. ...,,. ,... , .,. . : ; ;; ;? 前击 沈懈药科人学博学位论史 前 言 神经退行性疾病是一类严重影响人类健康的常见病,不同类型的神经退行性 疾病的病变部位及病因各不相同,但这类疾病的共同点是都出现神经细胞退 行性 病变近年来,提出了神经细胞保护这个概念,用神经元保护 剂治疗急性和慢性神经退行性疾病是一个新的课题 由于细胞分子生物学技术的发展,已能够利用培养神经细胞元的方法研究药 物对神经元的保护或延长生存时间的作用经元保护剂的研究很可能寻找到对 慢性神经元退行性疾病如帕会森病和阿尔茨海默病有效的药物研究表明,氧化损 伤是神经退行性疾病的主要致病机制因而,保护神经元避免受到氧化损伤成为有 益的治疗方式天麻的化学成分具有直接清除自由基降低脂质过氧化物水平及消 除自由基产生的活性 天麻始载于《申农本草经,列为上品,认为它“久服益气力,长阴肥健,轻身 增年”,现代中医药学也认为它属于抗衰老中药常用于热极生风和肝风内动诸证, 为治疗眩晕头痛之要药,有“定风神药之誉:现代药理学的一系列研究表明,天 麻天麻活性成分及天麻制剂可以通过影响兴奋性毒性?氧化氮系统胶质 细胞生物膜氧化损伤及细胞凋亡等因素起到神经保护作用对神经细胞的损伤具 有保护作用的天麻及其复方制剂受到越柬越多的关注 在过去的十多年中,科学家们为寻找能够减轻由谷氨酸和细胞内钙超载引发 的神经元损伤的药物做了大量的工作,其中始载于宋代《宣明论办的大川芎方引起 了人们的注意大川芎制齐主要由天麻和川芎两味药组成,主治缺血性脑中风血瘀 头痛等瘟现代药理研究表明,大川芎制剂具有拮抗神经元胞浆中增加的作 用:能够阻滞神经细胞钙离子通道和营养神经细胞,对神经细胞缺血性损伤具有 保护作用;对硝酸甘油型偏头痛大鼠神经细胞凋亡具有抑制作用;抑制皮层扩展 性抑制;能够降低血清中吲哚类神经递质含量以及引起神经胶质细胞受 体表达增加,治疗偏头痛 本论文首先对天麻进行化学成分及有关活性的研究,并结合曾经对川芎的有 关研究结果,进行大川芎粉针剂的制剂工艺质量标准研究,为传统大川芎方的开 发及科学规范的临床应用提供可靠的科学依据沈药科人学博:学位论史 第~带文献综述 第一章文献综述 . .天麻的原植物研究 ..天麻的本草考证 天麻原名赤箭,首载于《神农本草经》,列为上品。《吴普本草》载:茎如箭赤无叶,根 如芋子。《名医别录》:赤箭生陈仓川谷、雍州及太山、少室。陶弘景日:赤箭亦是芝类。其 茎如箭杆,赤色。《新修本草》:“此芝类。茎似箭杆,赤色。端有花,叶远看如箭有羽。四 月不花,惟无心脉。《雷公炮炙论》首载“天麻”之名,详述了天麻的炮炙方法。《不宝本草》 重出一条“天麻”。《本草衍义》把“赤箭”与“天麻”合为一条。《本草别说》云:天麻即是 赤箭根。《梦溪笔谈》:赤箭即今之天麻也。《本草别说》:今医家见用天麻,即是此赤箭根。 《本草纲目》将《神农本草经》“赤箭”与《不宝草本》重出“天麻”并为一条。《梦溪笔谈》 云:《神农本草经》明言赤箭采根。上品血芝之外,补益上药,赤箭为第一。根据各家草本所 述特征,赤箭与天麻为同一植物,与今用之天麻相符。 天麻的异名较多,《神农本草经》中名为赤箭、离母、鬼督邮。李时珍日:“赤箭以状丽 名,独摇、定风以性异而名,离母、合离以根异而名,神草、鬼督邮以功而名。天麻即赤箭 之根。”天麻者,其物寄生,不知所自,仿佛天生,故名“天”;《尔雅》云:“大鼗谓之麻。” “鼗”即今波浪鼓,以摇为事,此草善摇,因有“麻”之名,合称“天麻”。 习 .国内天麻属植物的分布研究 天麻属 在兰科中。在全世界已发现约有余种,分句 于热带、亚热带、温带及寒温带的山地。主要包括中国、印度、泰国、澳大利亚、同本、朝 鲜、前苏联远东的阿穆尔州、沿海边疆区,千岛群岛等地区。非洲和欧洲、美洲未发现本属 植物。 我国是世界上野生天麻分布的主要国家之一,南起滇中地区,北至黑龙江省的尚志、林 口等县;东起台湾省的兰屿岛及黑龙江的东宁等县,西至西藏的错那等地。主产于四川、云 南、陕西、安徽、河南、辽宁、吉林、湖北、湖南、贵州、甘肃、西藏及台湾等地。 天麻 最早的记载见于神农本草经,据其所述,以花茎青赤色来看,应是 天麻的原变型,习称为红天麻的。绿天麻、乌天麻及黄天麻等变型均可作天麻药用。疣天麻 和原天麻民问办作天麻使用。经常可以看到花的颜色、花茎的颜色、块茎的形状、块茎含水 沈阳药科人学博‘学位论文 第一章文献综述 量不同的天麻。根据以上特点,将天麻划分为几个类型,在生产中栽培的主要是红天麻和乌 天麻。 红天麻也称红杆天麻,我国陕西省汉中地区各县,以及陕南、豫西、 等地主要野生 和栽培的是红杆天麻。花茎肉红色,花茎浅姜黄色、微带淡红色,果实椭圆形、肉红色、块 茎长椭圆形、淡黄色、重余克,一般.埏左右可加工干商品,商品天麻节数多、 纵皱纹多且明显。 乌天麻也称乌杆天麻、铁天麻,花茎灰褐色,带有明显的白色纵条斑。花黄绿色,果实 有棱,间隔淡黄绿与褐色条纹,为上粗下细的倒圆锥形。块茎短柱形,前段有明显的肩,淡 黄色,最大者可达余克,含水量%左右,一般.左右可加工干天麻。我国东 北长白山区有乌天麻生长,南方主要分布在海拔米以上的高山区,在高山区栽培的主要 是乌杆天麻。此变型根状茎折于率特高,是优良品种,在云南栽培的天麻多为此变型。 除上述两种天麻外,红杆天麻分布地区常混生少数绿杆天麻,花茎黄绿至蓝绿色,花黄 色,花卵圆形,绿色,块茎圆锥形,含水量介于红杆与乌杆之间。一般可干,种子 发芽率及繁殖率均高,是较稀有的栽培天麻。我国天麻属植物己发现有个种及个变型, 见协..。 .. 沈阳药科大学博:学位论文 第一章文献综述 ?妇日 冼天麻 厶南中部?定、昆明,富民、禄劝 .天麻的主要伪品及易混品嗍 .马铃薯 为茄科植物马铃薯 .的块茎。经仿照天麻正品特征,人 工加工成扁椭圆形,表面刻有沟及纵皱纹,顶端有时具人工用绳索捆扎而成的“鹦哥嘴”,并 染成红色。底部无圆脐形疤痕。环节纹不明显,质峰硬而韧,难折断,断面平坦,角质。味 淡而不苦。因马铃薯富含淀粉,切片遇碘则显蓝色,比较容易鉴别。 .大丽菊 为菊科植物大丽菊 .的块根,呈长纺锤形,微弯或扁, 表面灰白色或类白色,未去皮者显黄棕色。纵沟明显而不规则,无环节纹。顶端茎基及末端 均呈纤维状。质硬而较正品为轻,不易折断。断面类白色,角质状,或纤维状。与萨品最明 显的区别点是,断面中心木质化或中空。 .紫茉莉 为茉莉科植物紫茉莉 .的根。经蒸后刮去外皮来冒充正 品,加工压扁,平直或稍弯曲,顶端残留茎基或凹陷。主体表面白色或灰棕黄色,半透明, 有纵沟或呈扭曲状,无环节。质硬。断面呈同心环纹,纤维状。味淡,有刺喉感。 .芋艿 为天南星科植物芋艿 .的子块茎。经刮皮蒸制晒 干而成,外观呈压扁状,有纵沟及皱褶,顶端有芽苞残基,无环节纹,断面粉白色,微甜。 在贵州见有以此冒充天麻者。因含淀粉,切片遇碘显蓝色。 .黄精 . .的干燥根茎 蟛 主要为百合科植物滇黄精 的节块,全体有细皱纹及稍隆起的环节。茎痕显著,呈圆盘状,上布许多小麻点。每一节间 形似大白及。味甜,嚼之有粘性。 .大九股牛 为槭树科植物大九股牛 ..的块根,多呈纺锤 形,一端常扭曲成羊角状,固有羊角天麻之称。表面有须根痕及线样横环纹,顶端有残茎基, 纤维性,昧淡。云南有以此充天麻。 .天花粉 为葫芦科植物栝楼 的干燥根。充天麻之天花 粉多为块根之小者。呈纺锤形,一端有茎基残留或扎成短嘴状,纵剖面可见棕黄色条状筋脉 维管束,断面点状维管束散在,排列成放射状。导管孔甚大。质坚重,不易断,富粉 性。无臭,味淡,微苦。贵州有以此充天麻者。 .芭蕉芋 为美人蕉科植物芭蕉芋 .的干燥块茎,外形与正品天麻很 相似,茎基处有残留叶鞘,纤维外露。底部渐尖。断面不平坦,淡黄白色,质韧,有焦糖气, 味甘。在四川、福建、广东、浙江等地曾有以此冒充天麻。 沈阳药科大学博‘学位论文 第一章文献综述 .赤雹根 为葫芦科植物赤雹根 的二燥块根。药材呈纺锤形, 长.,直径.”.,具棱脊。表面灰黄色或灰黄棕色,有纵沟及横长皮孔样疤痕。质 颦硬难折断。断面平坦,呈粉性。味微苦而刺舌。在河北安国等地曾发现以此冒充天麻。 .羽裂蟹甲草为菊科植物羽裂蟹甲草 ..一.的干燥 块茎。在西北地区办叫鸡多囊、猪肝子等。块茎呈长椭圆形或椭圆形,长~,直径.”. 有的已被压扁,表面黄棕色,有明显的环节、不规则的沟纹绉纹及须根痕,断面呈隔板状或 中空。加工去皮蒸煮后则为灰棕色,半透明,断面呈角质样。无臭,味微苦。在甘肃及宁夏 个别地区以此充天麻。 ,双舌蟹甲草 为菊科植物双舌蟹甲草 ....的块 茎。在四川将此称为角天麻,又叫红川乌。其块茎的形念特征与羽裂蟹甲草相似。 .竹芋 为竹芋科植物竹芋 .的干燥根茎。本品外表与天麻相 似,亦有“鹦哥嘴”及“肚脐眼”,但纤维性强,质粗糙,表面呈浊白色。在广东省个别地区 有以此混充天麻。 .慈菇 为泽泻科植物慈菇 ...的球茎。在 贵州省部分地区以本品的球茎加工后混充天麻。伪品多呈长卵圆形,压扁状,长~包 括芽苞在内,宽,表面暗褐棕色或褐绿色,微呈透明状,有个环节,环节上常 残存有膜质鳞叶片,中部多凹陷,有纵向细皱纹,上端有粗大的芽苞,下端有致密的皱褶, 底部有浅灰色的圆脐形“疤痕”或为短柄状凸起。质重而孥硬,难折断,断面中空,组织不 紧密,微呈角质状。气微,味淡。含有大量淀粉。 .天麻化学成分的研究进展 天麻化学成分的研究始于年,等测得天麻中含有微量元素及维生素类物质圈; ,此后的研究中均未见到相关报 年,有报道从天麻中分离出香荚兰醇 道,故有学者认为可能是误将对羟基苯甲醇鉴定为香荚兰醇。对不同产地及 不同种天麻的 化学成分定性地比较表明,不同产地天麻的化学成分基本一致,而不同种的 却有一些差别。 ..酚类化合物 酚类化合物为天麻中的特征性成分。天麻苷即天麻素,其化学组成为对羟 甲基苯。‖.吡哺葡萄糖苷,对其进行了全合成;其它酚类化合物见..。 沈阳药科大学博学位论文 第一帝文献综述 一廿掣? ?卜呻 . 删茹一 九一邺一洲 .. 一? 卜心卜一 删~删一 一。?~ 岫卜哟~, ?陀 一?细?吣。 .“ 一。叫。一“ 帕卜恍?卜” 第一章文献综述 沈药科犬学博学位论文 ..有机酸类化合物 有机酸类化合物主要有柠檬酸嘶 、棕榈酸 及其对称单甲酯 一、焦谷氨酸、柠檬酸双甲酯捌、 、琥珀酸 丙三醇.一软脂酸单酯鲥州以及邻苯二甲酸二甲酯科硎。对天麻化学成分研 究中,分离鉴 ,其结 和 定了个强极性成分,分别鉴定为加、 构组成分别为三睁?喃葡萄糖氧苄基】柠檬酸酯瞰 】,,.和,一喃葡萄糖氧苄基】柠檬酸酯,,【“, 沈阳药科人学博学位论史 第一章文献综述 叫蠢一芦訇嚣孽誉豪. ... 从天麻地上部分分离鉴定了 , , , 档, ;这些化合物均是首 次从天麻地上部分分离得到,其中化合物 为一新化合物 嘲。 ..其它化合物 从天麻甲醇提取物的乙酸乙酯层中分得化合物,其结构组成为% 一一一 ,这是从天麻中分离得到的第一个呋喃类化合物 例;化合物哪锄讪心呦五未见文献报道。 洲、厂洲洲?洲。 耵 . ...虹 天麻中尚含有.谷甾醇、胡萝卜苷勰两个甾醇类化合物。在对密环菌与 天麻化学成分的对比研究中,从天麻中分离得到了种与密环菌发酵物中相同 的成分腺嘌呤 、腺嘌呤核苷锄、:,、和蔗糖 睁,其中为一新型生物碱;又从天麻注射液中检出微量生物碱;从生产天 , 麻注射液后的残渣中分得天麻匀多糖,是由葡萄糖分子组成:另有报道分出 种杂多糖: 和.,均具有细胞免疫活性。 从天麻球茎中分离并纯化了一种抗真菌蛋白 矗 ,简称, 沈阳药科人学博卜学位论文 第一章文献综述 是一种碱性蛋白?。从天麻仞生球茎中分离并纯化了几丁质酶和序’葡聚糖 酶,二种酶对平 板上培养的木霉菌丝的生长均有抑制作用,但抑菌活性均较低,被认为在天 麻初生球 茎消化蜜环菌菌丝的过程中起重要作用。微量元素以含量最高,、、、、 次之,这些人体必需的微量元素对延缓衰老和防治疾病有一定效果嘲。 .天麻药理作用研究进展? .天麻的神经保护作用阅 ..对抗兴奋毒性的作用 天麻可以从调节兴奋性氨基酸的释放和摄取,抑制甲基.天门冬氨酸受 体活性,防止超载等方面对抗兴奋毒性。天麻素可以拮抗氯化钾诱导的体外培养 细胞谷氨酸释放的增多,减少谷氨酸培养皮层神经细胞的死亡率。香荚兰醛和对羟基苯甲醛 可显著的抑制谷氨酸引起的人.成神经细胞瘤细胞内的升高和细胞凋亡,天麻素也 可抑制谷氨酸引起的细胞含量的升高,提示通道可能是天麻成分抗兴奋毒性 的作用靶点。应用小鼠双侧颈总动脉结扎.再灌注模型造成兴奋毒性损伤,口服天麻促智颗粒 由天麻钩藤饮化载而成可以调节模型小鼠脑组织内递质性氨基酸的含量,维持兴奋性氨基 酸和抑制性氨基酸的动态平衡;还能够抑制缺血再灌注损伤引起的大恼皮层、海马两部位 受体活性的增高,从而对抗兴奋毒性。 ...对?氧化氮及?氧化氮合酶州的影响 天麻通过对的双相调节发挥其益智和神经保护作用。天麻可以拮抗铅中毒引起的大鼠 小脑匀浆水平的降低和学习记忆损害。缺血再灌注损伤则引起体外培养星形胶质细胞 表达的上调,天麻素和川芎天麻液可对抗这种上调,从而抑制本身及由其而产生的一系列 氧自由基的毒性。 ..对胶质细胞的影响 口服天麻可以明显使大鼠大脑胶质细胞增生,胶质细胞群面积增大,胶质细胞数量增多, 这是天麻益智作用的机理之一。天麻素可以明显地抑制的增多,即通过抑制胶质细胞 的过度增生以减弱其对神经细胞的进一步损伤,还能够减弱胶质细胞纤维样改变的程度。 ...稳定细胞膜作用 天麻素具有维持神经细胞膜流动性的作用,且效果优于阳性药尼莫地平,其机制可能是沈阳药科大学博士学位论文 第一章文献综述 抑制磷脂酶的激活而阻止磷脂的降解。细胞膜受损达一定程度,膜的通透性增大,使生理情 况下很少漏出的乳酸脱氢酶大量漏出,细胞外的浓度可以反映细胞膜损伤的程度。 缺血再灌注以及谷氨酸的兴奋毒性使培养神经细胞膜和胶质细胞膜损伤,大 量漏出,表 现为培养液中的含量增高;天麻及其有效成分天麻素可以显著的减少上述损伤造成的 的漏出。 .抗氧化作用 天麻可以升高老年大鼠或神经损伤模型大鼠肝脏及血清中水平,降低其含量。 对体外培养的缺血再灌注神经细胞,天麻素能明显地抑制其的增多。荚香兰醇则能够显 著的抑制脑内注射氯化铁造成的大鼠癫痫模型皮层内的升高。荚香兰醛和对.羟基苄醇均 可以抑制大鼠脑匀浆、微粒体、线粒体的脂质过氧化反应。川芎天麻液可提高缺血再灌注损 伤大鼠脑为的含量。天智颗粒可在体内和体外显著抑制大鼠/卤的生成;使反复缺血 再灌注小鼠皮层和海马活性增高;但对脑组织的活性未见影响,提示天智颗粒抗氧 化作用的机制主要是提高的活性。研究表明,天智颗粒还可以抑制缺血再灌引起的清醒 自由活动大鼠海马羟自由基的升高,进一步证明了天智颗粒的抗氧化作用。 天麻制剂可通过调节神经元凋亡调控基因的表达对神经细胞起到一定的保护作用。 ..对中枢神经系统的作用 ....镇静作用 天麻的不同制剂及成分均对动物的自主活动有明显抑制作用。天麻能对抗咖啡因所致的 中枢兴奋作用。天麻的镇静作用可能与其降低中枢神经系统的兴奋性有关。天麻能明显延长 催眠剂的催眠时间,而天麻素无效。天麻多糖与氯丙嗪合用可使其作用增强,并可对抗苯丙 胺所致的小鼠活动亢进。 天麻素或天麻苷元能对抗咖啡因引起的兴奋,与硫贲妥钠有协同作用,并延长麻醉时间。 香荚兰醇和香荚兰素能使环乙烯巴比妥钠的睡眠时间延长。初步认为天麻的镇静,催眠作用 与其降低脑内的含量有关。 天麻能协同阈下剂量的催眠剂产生催眠作用,但天麻素的作用不明显,因此认为天麻素 不是天麻的有效成分 垃抗惊厥作用 天麻浸膏有明显的抗惊厥作用,天麻及其苷元能延长戊四氮阵发性惊厥的潜伏期,天麻 沈僻药科大学博学位论文 第一章文献综述 素对马桑内酯所致家兔癫痫有延长潜伏期、减轻大发作程度、缩短大发作时 『日、加快恢复过 程降低死亡率的趋势。天麻均能降低戊四氮所致动物惊厥率和死亡率,但对士的宁惊厥作用 不显著。说明它们对神经系统的作用部位可能不在脊髓。天麻可提高实验性癫痫豚鼠『自脑和 脑干区内去甲肾上腺素的含量,并使脑尾状核和脑干内多巴胺的含量增高, 提示天麻可能通过影响中枢不同脑区儿茶酚胺含量而制止癫痫发作。 天麻对豚鼠实验性癫痫的治疗机理与调整中枢不同部位儿茶酚胺的代谢有关。 ..镇痛作用 天麻具有非常明显的镇痛作用。另有实验证明,天麻浸膏、天麻注射液、香草醇和香草 醛无镇痛作用。天麻注射液/腹腔注射可使大鼠皮质的多巴胺含量减少,对丘脑、脑干 和纹状体三脑区的多巴胺含量也有降低作用;天麻注射液./可使皮层、脑干和纹状体 的人工脑脊液中的多巴胺含量明显增多,初步认为天麻的镇静、镇痛作用可能与降低脑内多 巴胺的含量有关,而脑内多巴胺含量的降低可能与天麻抑制中枢多巴胺能神经末梢对多巴胺 重摄取和储存有关。 &对心血管的作用 天麻注射液对氯化钾及一羟色胺引起的兔主动脉收缩有明显抑制作用,天麻注射液可 使血压明显下降。天麻注射液能扩张大鼠肠系膜微血管,并能使血流加快。另有报道,天麻 针剂对脑血管具有轻度缩血管作用。合成天麻素能使心肌细胞搏动频率加快,收缩力增强, 节律规则,并能明显增加糖原、核糖核酸、脱氧核糖核酸、三磷酸腺苷酶、琥珀酸脱氢酶及 乳酸脱氢酶的含量。合成天麻素可使丝裂霉素所致盼肌细胞变性减轻,坏死减少,对细 胞中毒性损伤有保护作用。天麻注射液可明显延长死亡时间,并降低在低压缺氧时的死亡时 率。天麻注射液能降低血清脂质过氧化产物丙二醛水平;缩小心肌梗死面积。天麻还具有抑 制血小板聚集的作用。 .对免疫系统的作用 天麻和增锌天麻注射液能提高小鼠血清中溶菌酶含量和溶血素水平,增加脾指数和增加 由刀豆球蛋白诱导的体外脾淋巴细胞增殖反应。天麻多糖具有增强机体非特异 性免疫功能及细胞免疫和体液免疫的作用。 .抗衰老作用 天麻具有抗衰老作用,天麻能显著恢复.半乳糖衰老模型小鼠被动回避反应能力的下沈阳药科大学博。学位论文 第一章文献综述 降,明显提高中活力,皮肽羟脯氨酸含量,减少心肌脂褐质,而对脑、肝脂褐质 减少不明显。天麻注射液可使血中超氧化物岐化酶和谷胱甘肽过氧化物酶【 活力明显增高,降低血清中羟脯氨酸含量,起到抗氧化作用。天麻有明显的耐疲劳作用,能 缩短果蝇幼虫的发育时间,延长成虫的寿命,表明天麻有促进生长发育,缩短幼年期的作用。 天麻多糖对肝脂质过氧化酶有明显抑制作用。天麻多糖能明显促进机体和蛋白质合成。 天麻注射液可增强小鼠低压耐缺氧能力。天麻还含有多种微量元素,并抑制胶联剂的合成, 增强机体免疫功能,起到延缓衰老的作用。 ..抗炎作用 天麻具有一定的抗炎作用。天麻注射液、天麻注射液去天麻苷部分能对抗巴豆油鼠耳炎 症,而天麻苷无效。天麻注射液能抑制醋酸所致的腹腔毛细血管通透性增加,抑制一羟色 胺和前列腺素所致的毛细血管通透性增加,并能抑制二甲苯所致小鼠耳郭肿胀,琼脂所致 的小鼠足肿胀及角叉菜胶和一羟色胺所致的大鼠足肿胀。 ..药代动力学研究 天麻制剂中天麻素及天麻苷元兔口服吸收差,肌注有较好的生物利用度。天麻素在体内 不易积蓄。有研究证明,各种给药途径以肌注生物利用度最好。 .大川芎方的研究进展 ..处方与方解 大川芎方始载于宋代《宣明论方》,元代《御药院方》名为“芎穷天麻丸”,由川芎和 天麻以:比例配伍而成。方中药物有清利头目、消风化痰、宽胃利膈等作用。古方主要用 于心忪烦闷,眩晕欲倒,颈项紧急,肩背拘倦,神昏多睡,肢节烦痛,偏正头痛,面目虚浮 等症【刁。 方中川芎辛苦,微甘,归肝、胆、心包经;其辛温走窜,走而不守,虽入血分,又能调 气,为血中之气药;能达巅顶、通透周身,功能活血行气,祛风止痛。现代药理证明川芎有 扩张血管,改善微循环,抑制血小板聚集等作用。天麻甘平质润性微寒,专入肝经,其甘以 缓解肝之急,为“治风之神药”。功能息风止痉、平抑肝阳、祛风通络;而且甘润能制约川 芎之过于辛散。现代药理研究证明天麻有镇静、镇痛作用,能够解除脑动脉痉挛,有利于改 善微循环。以此二味组成的大川芎方,天麻与川芎相配,具有平肝、活血、通络、化瘀之功, 沈药科大学博‘学位论文 第一章文献综述 一长于缓肝熄风治晕,一偏于行血熄风止痛,共建活血化瘀、平肝息风、通络止痛之功,符 合中医理论。主要用于血瘀所致血管神经性头痛,证见头痛同久,痛有定处,或兼头晕,夜 寐不安,舌质暗或有瘀斑。血管神经性头痛、紧张性头痛精神性头痛、丛集性头痛等;脑 外伤综合征;眩晕综合征;高脂血症;高黏滞血症;动脉粥样硬化症,尤其是脑动脉粥样硬 化和冠状动脉粥样硬化。中风先兆症、缺血性脑卒中及其后遗症。 ..大川芎方的药理研究 .神经元保护活性 川芎醇提物以及川芎与天麻以一定比例配伍时具有拮抗神经元胞浆【 :增加的作用,与 剂量相关。实验表明,缺氧 后神经元胞浆内【较缺氧前明显增加,川芎的醇提部分、 川芎与天麻以:配伍作用时,较小剂量咖对正常及缺氧时的神经元均有降低胞浆【 的作用,川芎的醇提部分/作用明显减轻缺氧神经元钙超载的同时不影响正 常情况下 神经元胞浆内外的钙离子平衡,与此同时其它川芎与天麻的配伍或只降低正常情况下的胞浆 【,或无作用,或在大剂量时出现反转作用。结果提示,川芎与天麻中有抑制胞浆内 增加的成分,同时有与之相拮抗的成分,随着药物浓度的增加,后者的作用增强。 大川芎方能够阻滞神经细胞钙离子通道和营养神经细胞,对神经细胞缺血性损伤具有保 护作用。研究显示:大川芎方具有调节模型动物相关神经递质和血管活性物质水平、改善血 瘀犬血液粘度等作用。结果表明,大川芎方可以改善缺血神经细胞的形态异常,可以提高神 经细胞存活率、神经细胞活性值以及降低神经细胞胞内钙离子浓度。 大川芎方可以改善硝酸甘油型偏头痛大鼠神经细胞超微结构异常,降低总体凋亡发生率, 降低神经细胞凋亡百分率。说明大川芎方对硝酸甘油型偏头痛大鼠神经细胞凋亡具有抑制作 用四。 ...心脑血管作用 大川芎软胶囊具有很好的活血化瘀、镇静止痛、阻止血栓形成的作用。对急性血瘀模型 大鼠血液流变学全血粘度、血浆粘度、纤维蛋白有明显的降低作用;可抑制家兔体外颈总动 脉.颈外静脉血流旁路法形成血小板血栓,具有明显延长大鼠凝血酶原时间、抑制家兔血小板 粘附聚集的作用。 大川芎丸可显著减少缺血再灌注大鼠神经功能障碍和梗死体积比,证实了大川芎丸治疗 沈阳药科人学博学位论文 第一章文献综述 实验性缺血性脑血管疾病确有效果。实验发现:大川芎丸能够竞争性抑制缸管紧张素与大 鼠肝细胞膜上的血管紧张素受体结合,使微动脉扩张而改善局部血液循环;能够提高血小 板中含量,对血栓胤的活性和生物合成有抑制作用,可降低血小板聚集,且 能使聚集的血小板解聚,从而调节血管活性物质的含量,使其保持平衡:在缺氧条件下,一 定浓度的含药血清能有效地促进脐血内皮细胞中血管内皮生长因子 ,的的表达,提示治疗缺血性疾病的机制可能与促进 。 分泌有关 ..镇痛作用 研究结果显示,经复方天麻制剂治疗后小鼠血清中.、.含量与模型组对比显 著性降低,一、.参与复方天麻制剂外周镇痛机制。此外,复方天麻制剂升高 脑内 .、、的含量,抑制疼痛模型大鼠脑、脊髓、心、皮肤的表达产生镇痛作 用的实验已被证实。因此,推测复方天麻制剂镇痛的杌理为通过抑制血清中一释放,抑制 外周致痛物质释放,减少,抑制一外周受体,减少致痛物质受体去极化,增加抗痛物质 受体去极化,减少痛信息传人冲动,影响某些与疼痛有关核团的神经元,兴奋其中痛抑制神 经元,抑制痛兴奋神经元,激活镇痛系统,对伤害性信息进行调整,抑制疼痛的基因表达产 生镇痛作用册。 连续灌胃大川芎丸后,大川芎丸在高.状态下对皮层扩展性抑 ,有明显的影响,表现为潜伏期和持续时、日明显延长,并具有统计学意义。 潜伏期表明的扩展速度减缓,而持续时『日延长,表明大量细胞去极化、神经元活动消失 的程度加重。可见,高.?瞅态下,使的程度加重,这就使.的代谢紊乱与联系 起来。大川芎丸对正常状态下的能降低幅度,减少发作次数,并可以缩短导致的 持续时问的异常延长。结果表明,大川芎丸无论对讵常状态下诱发的,还是由高. 状态下导致的的异常改变,都直接有抑制作用。提示干预是大川芎丸治疗偏头痛的 重要作用环节,抑,可能是其治疗偏头痛的作用机制之一。 利用体外培养人神经胶质细胞中给予被试大川芎配方药的提取物%浓度,剂量分 别为.、.、. 。结果,各种不同比例配伍药物的提取物均可引起.受体表达增 加。表明大川芎方可作为.受体的激动剂应用于偏头痛,扩张小动脉等嘲。 能延长密闭容器内小鼠耐缺氧时『日和硝酸士的宁引起小鼠出现紧张性肌惊厥的潜伏期,沈阳药科大学博学位论文 第一章文献综述 。 抑制醋酸引起的小鼠扭体反应次数 参考文献 【】围家中医药管理局‘中华奉草》编委会.中牛奉锄】.:海::海科学技术出版社,,.. 【】中国植物忠电子版., 】周铉,降启.囝产天麻属植物的整理‘南植物研究,,: 【郝近犬整理,谢宗万讲挽实用中药材并验鉴;人民卫生;版社,北京:趣 . 】郑虎占,嫠泽宏,余靖中药现代研究’调】.北京:学苑版社.. 【】袁惠南.天麻成分香草醇研究中应】;登清的一砦问题】.中医药卉息,,:彤, 】周俊,涌湘渝,杨雁宾,等天麻的化学研究?.几种国产天麻属植物的化学成铆】.西南植物研究,,; .轧 【刷俊,杨雁宾,杨崇仁天麻中的新酚苷??灭麻素【.科学通报,,;. 【】冯孝章,陈玉武,杨俊山.天麻化学成分的研究 化学学报.,:. 【】周俊,杨雁宾,杨崇仁天麻的化学研究.天麻化学成分的分离和罄司】. 化学学报,,: 【 阁俊,浦湘渝,杨雁竞新鲜天麻的几种酚性成分 .科学通报,,:. ,, 【】 ’/. 如/】 :. 【,砌‘’/.嚣托渤&砌,,. 【】“ , ’舶? /【 . .【】 ’ ,.碍呻冲.幻啪 即’一时 珂丘曲岫函础/】种即蒯,, ’ 【】./幻叮/?】. 】 呜.?出/ 确 和?【】.,,: 沈阳药科人学博‘学位论文 第一章文献综述 ,,&‘.,嗵 , ,..,哪噩, 岫协且啦巧“嘣 ‘瑚凼乱.《 【】肖永庆,李嚼,游小琳天麻有效部位化学成分研究【.中国中药杂忐,,:. . 】莉,肖红斌,粱鑫耘天麻化学成分研究【中草药,, 】 ..,咄.,,卫, 抓曲舾田删懈础撕吐砌 】.,?: 【郝小燕,谭宁华,周饶黔产天麻的化学成铆】.云南植物研究,,”;. 【,【,,../.., ,:.. 缸缸:. 叫 ? 【/龇】. 】孙晓芳,巍,杜贵发,笔天麻及其制剂神经保护机制的研究进展【】.中周中药杂志,,: 【 胡一冰张运发,邱德文,许建阳.复方天麻制剂对清神经递质影响的实验研究】.江苏中医药,。 . 【】摩松洁,周东川芎与天麻的不同配伍对佛外培养大鼠皮层神经元正常和缺暂状态下【神的影响【 .华两药学杂占 ?,: 【】姚干,彭成.周东,壬一海大川芎方对神终细胞缺血性损伤的保护作用【.中成药,,:. 【】姚干,彭成,周东,王?潦大川芎方对偏头痛人鼠神经细胞凋亡的影响【】.中成药,,:.. 【 向绍杰,杜佳林,李显华,张宏,贾冬.大川芎软胺囊的药效学研究 中国中医药信息杂志,,:. 【何俐,张志嚷大川芎丸对大鼠脑缺血的保护作用【】.四川大学学报医学版,,:. 【周沐科,何俐,吴波,杨明.大川芎丸对血管内皮细胞中血管内皮生长因子分泌水平的影响【】.中国临床康复,, :科. 【】杨洪军,边宝林,王永毙’羟色胺对皮层扩展件抑制的影响及丈川芎丸的干预作用【】.中国中医基础医学杂志, 【万莉红,方治平,王正蒙大川芎方提取物对神经胶质细胞斗盯受体的影响】西部医学,,:..第二章天麻的化学成分及对细胞的保护作用 沈药科大学博学位论文 第二章天麻的化学成分及其对细胞的保护作用 一柱色谱等手 利用大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、柱色谱和 段,从天麻中分离出个化合物,通过理化性质和光谱数据鉴定了其中个化合物 的结构,其中个为新化合物,个为首次从天麻属中分离得到。利用高浓度的氯化 钾和谷氨酸诱导细胞产生的损伤模型,对其中的个酚类化合物对抗细胞毒性、 保护神经细胞的作用进行了初步测试,结果均表现出一定的细胞保护活性。 .天麻的化学成分研究 ..化合物的结构鉴定 ...酚类衍生物 化合物 白色针晶,.。氢谱中可见一组’’自旋偶合系统 .,,,. 和.,,,. ,表明存在一个,二取代芳香 环;在高场区可见一次甲氧基单峰质子信号 .,以及一组表明有一个乙氧 基基团存在的偶合质子信号.,,.和.,,‘,.。碳谱 中在低场区可见个芳香碳信号 .,一,..,.,.和 . ..,证明了,.二取代芳香环的存在。碳谱在低场区还有一组糖信号 .仇.一’,.一,.一’,.,和.,与文献数据相比 较,与葡萄糖碳信号基本~致,说明化合物为葡萄糖苷。另外,氢谱在高场区还 给出 了糖的端基氢信号确.?:,. ,因此确认此葡萄糖为伊构型。剩余的个 碳信号 .,“.和.分别归属于个氧代亚甲基一,和个甲基基团 .。在谱中亚甲基氢信号 .一与碳信号.,一和. 有相关,可以推导出化合物的苷元为乙氧甲基苯酚。在谱中,可以看 第二章天麻的化学成分及对细胞的保护作用 沈阳药科人学博。学位论文 .与苯环上碳 到糖的端基质子 ..有远程相关,因此可以确认化合物 为禾乙氧甲基苯基..芦吡喃葡萄糖苷??鼻 。为未见文献报道的新化合物。 化合物 。囝~ .。。氢谱在低场区给出组芳氢质子信号., 白色针晶, ,. 、.,,. ,提示分子中存在个,一二取代的苯坏 结构;在高场区给出个连氧次甲基的单峰质子信号.,。碳谱在低场区给 出组苯环碳信号.、.、.、.;高场区给出个连氧碳信 , 号晒.。综合以上分析,鉴定化合物为对羟基苯甲醇 与文献“相对照基本一致。 化合物 。盈吖旷洲 毯“ ??。碳谱中可见组糖的碳信号, 白色针最?, .,.,.,.,.,其数值与肛.吡喃葡萄糖基的信号相符合,氢谱在糖 区给出了糖的端基质子信号 以及糖上的其它质子信号 .,,.,. .~.。氢谱在低场区给出组芳氢质子信号.,,. 、., ,.,. ,碳谱在低场区给出组苯环碳信号、?、?, .、.,.,提示分子中存在个,二取代的苯环结构。综合以上分析, 鉴定化合物为对羟基本甲醇...?一吡喃葡萄糖苷即天麻苷,与文献“相对 照基本一致。沈阳药科人学博‘学位论文 第一章天麻的化学成分及其对细胞的保护作用 化合物 。‖ .?。氢谱在低场区给出组芳氢质子信号 白色针晶, ,提示分子中存在个 .,,.,. 和.,,‘,.,. ,二取代的苯环结构;在高场区给出个醛基质子信号.,。碳谱在低场 区给出个羰基碳信号瑟及组苯环碳信号.、.、.、.; 综合以上分析,鉴定化合物为对羟基苯甲醛,与文献口相对 照基本一致。 化合物 .?。碳谱中可见组糖的碳信号每.、 无色结晶., .、.、.、.和.,其数值与吡喃葡萄糖的数值相符合,氢谱在糖区给 出了糖的端基质子信号.,,. 以及糖上的其他质子信号巧.~ .,示分子中存在,.日喃葡萄糖基;氢谱在低场区给出组芳氢质子信号 .,,. 、.,,,. ,碳谱中存在组苯环碳信号占.、 .、.、.,提示分子中存在个,.二取代的苯环;综合以上分 析,鉴定化合物为对甲基苯基..‖.口吡喃葡萄糖苷.??口 ..。目前尚未见该化合物有关谱学数据的报道。第一二章天麻的化学成分及 萁对细胞的保护作用 沈阳药科人学博:学位论文 化合物 .?。.给出苷元的碎片离子峰/ 。碳 无色结晶, 谱中可见组糖的碳信号占】.,.、.,.,.和.,其数值与毗喃葡 萄糖的数值相符合,氢谱在糖区给出了糖的端基质子信号占.,以及糖上的 其他质子信号 .~.;氢谱中低场区给出组芳氢质子信号 .,,碳 谱中存在组芳碳信号 .,.、.、.,提示分子中存在个 高度对称的,,,.四取代的苯环结构。综合以上分析,鉴定化合物为,. 一卢 二甲氧基苯甲酸.,.毗喃葡萄糖苷,. .,与文献】对照基本一致。 化合物 。旷。。 .。氢谱在低场区给出两组芳环质子信号., 白色针晶, ,. ,提示分子中存在个,.二取代的苯环; 曲、.,,. 在高场区给出组质子信号.,,.、.,,.;碳谱 在低场区给出组苯环碳信号.、.、.、.,高场区给出 个碳信号.,示分子中存在对羟苄基.结构,与文献该化合物 的数据相对照,鉴定该化合物为,’一二羟基二苄醚,’一 。第一二章天麻的化学成分及其对细胞的保护作用 沈阳药科人学博:学位论文 化合物 . 。改良碘化铋钾反应呈阳性,示可能为含氮化 白色针晶, 合物。?给出一组碎片峰..,%:【】,,, .、.、 ,,,,;碳谱中可见一组糖的碳信号 .、.和.,其糖区数据与文献对照确定该糖为核糖,氢谱在糖区给出了搪 的端基质子信号 .,,‘,. 以及糖上的其他质子信号每.,、 .,、.,、.,、.,。氢谱在低场区给出组芳 氢质子信号每.,,. 、.,,. ,提示分子中存在 个,.二取代的苯环;在高场区给出个次甲基的单峰质子信号巧.,。氢 谱在低场区还可见个单峰质子信号巧.,,.,,.,.,碳 .、 .、 .、 谱在低场区给出个碳信号 .、占.。结合质谱数 据并与文献相对照,可以鉴定化合物为.羟苄基一腺苷 【一一】。 ...含氮化合物 化合物 ~?。改良碘化铋钾反应呈阳性,示可能为含 白色结晶, .、.、.、.和.,其糖区数 氮化合物。碳谱中可见组糖的碳信号 据与文献【】对照确定该糖为核糖,氢谱在糖区给出了糖的端基质子信号 毋.,, ‘,.以及糖上的其他质子信号占.,,,.,.、.,、 ,;氢谱在低场区给出个单峰质子信号占 .,、.,和. 第章天麻的化学成分及嬉对羁玎胞的保护作用 沈啊药科大学博.学位论文 .、 .,,.,,.,.,碳谱在低场区给出个碳信号 .、.、.、.。以上数据与文献】比较基本一致,故鉴定化合物为腺 苷。 ...其它化合物 化合物 ? ??。与溴酚兰试剂呈黄色反应。与酸 无色针晶, 共薄层,值一致。氢谱在低场区给出质子信号瑟.,;在高场区给出个羧 基质子信号占.,。鉴定化合物为琥珀酸 。 化合物 ,?。?反应阳性,% 白色针晶石油醚, 乙醇加热显红色,与伊谷甾醇标准品共薄层值一致,混合熔点不降,故鉴定化 合 物为伊谷甾醇仔。 化合物 .?,?反应阳性, 白色片状结晶., 反应阳性,%乙醇加热显红色,难溶于氯仿、丙酮及甲醇,易溶于氯 仿一甲醇回合溶液中。与胡萝卜苷共薄层,值及斑点颜色一致,混合熔点不降, 故第二章天麻的化学成分及其对璺胞的保护作用 沈阳药科大学博:学位论文 鉴定化合物为胡萝苷。 ..实验部分 ...仪器与 用瑞士公司一和.超导核磁共振仪测定, 作内标;?用日本岛津?质谱仪测定;一用 质谱仪测定;熔点用.型显微熔点测定仪测定,温度未校正。 薄层色谱及柱色谱用硅胶为青岛海洋化工有限公司产品,.型大孔吸附树脂 为天津南开大学化工厂产品,其它试剂均为沈阳化学试剂厂产品。 的 天麻药材购于云南,经沈阳药科大学陈发奎教授鉴定为 干燥块茎。 ....提取与分离 天麻的干燥块茎经%醇回流提取次,每次小时,纱布滤过,合并 滤液,减压回收乙醇,得天麻总浸膏。天麻总浸膏加水混悬,氯仿× 提取。水层挥尽氯仿得残膏,加水溶解,经大孔吸附树脂柱, 依次用水,、和%乙醇洗脱,减压回收溶剂得各层浸膏。%乙醇洗脱部分 通过硅胶柱色谱得到化合物谷甾醇;%乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱得到化合 物、和;%乙醇沈脱部分经硅胶柱色谱,.:洗脱得化合 物,.:洗脱部分进一步经硅胶纯化得化合物和: .:洗脱部分反复经柱色谱、硅胶柱色谱分离纯化得到化合 物、、和。提取分离流程见..。沈阳药科人学博学位论文 第一二章天麻的化 学成分及其对细胞的保护作用 . 衙,.删 :%?, .....理化常数与波谱数据 化合物 ;..? ;%乙醇加热显红色。 ? /.:【.×’,【】.× 【 】.×;:.,,. ,一,.,,, . ,一,,.,,?,.,,,. ,.,,‘,. .,,. 一’;” :.?,. . ,.?,一,.一,一,.一,.一,. ,,.,.一,.,.,. 化合物 , .。矽:., ,?、.,,. ,?,、.,,,. ,?,、., ,.旦、.,,.。函..,.、 .?,?、.,一、.啪。 沈阳药科人学博:学位论文 第二帝天麻的化学成分及具对细胞的保护作用 化合物 .?。 ., 挽.,,. ,一,、,,,. ,.,、., :.、 ,。’。. ,.、,,, 、?,一、一,?、.、.一’、. 一’、..‘、.’、..’、..’。化合物 , .。’: .,,、.,、.,,‘,.,. ,一,、., ,.,. ,.,。”占:..、.、.., 一、.一,一。 化合物 ., .?。.盔: . .,, ,?,、.,,. ,一,、.,, .,.,,,. ,.,。.:.一、..、 .一,一、.?,一、.一、.一’、.一’、.一’、 .’、.?,、.一’ ?。? / 。 化合物 , 一比:.,,一、.,,,、 .,,’。 .占:..、.,.、..、..、 .,、.、.、 .‘、.、.’、.’、 .×一。 化合物淡黄色针晶, .?。.以:., ,. ,?,’;一,、.,,. ,?,’;,,,.,, /.一,’、.,,/.,,;.:., ,、.?,’;一,、.一,,、.一,’;一,’和.一,。沈阳药科夫学博:学位论文 第 二章天麻的化学成分及对细胞的保护作用 化合物 ;? ?;..? /..,%: 】十,’, ,,,; :.,,一,.,.,,.,,一,. ,,. ,一”,”,.,’. ,一”,”,.,,”,. ,,. ,一,.,,’,.,,’,.,,,. ,,’,.,,一;‘’:.一,.?, .,.一,.,.’,.’,.一’,.’,. ?’,.”,.”,.?”,一”,.一”,一”,.”. ~?。改良碘化铋钾反应呈阳性。 化合物白色结晶, 。矽:.,,,.,,一、.,.,、 .,,. ,一’、.,,.,. ,一’、.,, 、.,,一’、.,,一’、.,,一。”一吨弦: .一、.一、.、.一、.?、.?’、.’、 .一’、.’、.’。 ??。与溴酚兰试剂呈黄色反应。 化合物无色针晶, 与丁二酸共薄层,值一致。占:.,,.,。 ’一珠矽: ..、 ..。 化合物白色针晶石油醚,?。?反应阳性, %乙醇加热显红色,与肛谷甾醇标准品共薄层值一致,混合熔点不降。 ??,? 化合物白色片状结晶, 反应阳性,反应阳性,%乙醇加热显红色,难溶于氯仿、丙酮及甲醇, 易溶于氯仿.甲醇回合溶液中。与胡萝卜苷共薄层,值及斑点颜色一致,混合 熔点 不降,故鉴定化合物为胡萝卜苷。 沈阳药科人学博:学位论文 第一二章天麻的化学成分及乓对细胞的保护作 用 .天麻酚类化合物对细胞的保护作用 ..实验部分 ...实验仪器 细胞培养箱,离心机,倒置显微镜,孔板,酶联免疫分析仪,。 ...试剂 /为大连美罗大药厂产 注射用青霉素钠 /、注射用硫酸链霉素 品,甲基噻唑蓝’、胎盘蓝 购于公司;胎牛血清、马 血清购于北京元亨圣马生物试剂公司,.培养,,其它试剂均为分析 醇。 ...药物制备 . 化合物“:乙氧甲基苯基一.卢一一吡喃葡萄糖苷一一?. ,、天麻素, 卢.,、对羟基苯甲醇 、对羟基苯甲醛,、甲基苯基一芦一一吡喃葡萄糖苷 一一芦一?,和,二甲氧基苯甲酸‖毗喃 葡萄糖苷,. .一芦..,为从天麻中分离得 到的单体化合物。 化合物先用二甲基亚砜溶解,并于用『用稀释至所需浓度,其余 化合物直接用溶解并于用;『稀释至所需浓度。实验中所有细胞培养液中 的浓度均低于.%,对细胞生长及死亡均无影响。实验原理 细胞为大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞 ,被广泛用于神经药 理学的研究。细胞上具有许多谷氨酸受体,高浓度的谷氨酸能够使胞内钙离 子 升高,并可抑制胱氨酸的摄取及诱发胞内还原型谷胱甘肽的缺失,从而导致反应性氧 化物的累积,最终导致细胞死亡。 氯化钾和谷氨酸模型,用以模仿在脑部病变时所产生的脑细胞内自由基升商和兴 奋性氨基酸毒性作用。谷氨酸被认为是中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质,是引 起实验动物脑部特殊模式神经退行性疾病的病因,包括原代培养