RIDASCREEN® Gliadin
酶联免疫法定量检测麸质及相应的醇溶谷蛋白
订货号:R7001
体外检测试剂
储存温度 2 - 8 °C
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RIDA® 和 RIDASCREEN®
均为R-Biopharm 德国拜发公司的注册品牌标志
制造商:R-Biopharm AG, Darmstadt, 德国
R-Biopharm AG 拥有 ISO 9001 认证。
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RIDA® and RIDASCREEN®
are registered trademarks of R-Biopharm AG
Manufacturer: R-Biopharm AG, Darmstadt, Germany
R-Biopharm AG is ISO 9001 certified.
2 RIDASCREEN® Gliadin 12-04-18
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产品简介
RIDASCREEN® Gliadin(订货号:R7001)麸质检测试剂盒,采用夹心酶联免疫
反应,用于定量检测专门标识为无麸质食品中含有的小麦(麦胶蛋白)、黑麦(黑
麦碱)及大麦(大麦醇溶蛋白)中的醇溶谷蛋白。
使用R5 抗体的RIDASCREEN® Gliadin 麸质检测试剂盒已经是:
- AOAC-OMA 官方正式
方法(2012年 1月)
- AOAC 认证(证书号:120601)
- Codex Alimentarius食品法典的一类官方方法
试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂,包括标准品。试剂盒足够进行 96 次
检测(包括标准测定)。定量分析需要使用微孔板酶标仪。
样品处理: 均质和提取
标准物质: RIDASCREEN® 标准物质是根据醇溶谷蛋白工作组机
构的标准而校核的。
检测时间: 样品制备(以 10个样品为例) ...................约 2小时
检测过程(孵育时间) ..................................1.5小时
检测限: 1.5 ppm麦胶蛋白,相当于 3 ppm 麸质蛋白
定量限: 2.5 ppm麦胶蛋白,相当于 5 ppm 麸质蛋白
回收率: 92 - 113 %对于不同的食品样品(参见 12.)
特异性: 单克隆抗体 R5可与小麦中的麦胶蛋白片段及黑麦和大
麦中相应的醇溶谷蛋白反应
交叉反应: 与大豆、燕麦、玉米、大米、小米(黍)、苔麸、荞
麦、奎奴亚黍(quinoa)和苋属植物没有任何交叉反应
相关试剂盒产品:
RIDASCREEN®FAST Gliadin 麸质快速检测试剂盒(订货号: R7002)
RIDASCREEN®QUICK Gliadin 麸质快速检测条(订货号: R7003 / R7004)
RIDASCREEN® Gliadin competitive 麸质竞争法检测试剂盒(订货号: R7021)
Cocktail Solution 样品处理缓冲液(订货号:R7006 / R7016)
RIDA® Extraction Solution (colourless) 无色样品提取缓冲液(订货号:R7098)
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RIDA® Extraction Solution / Extraktions-Lösung样品提取缓冲液(订货号:
R7099)
Set of 3 Gliadin Assay Controls 麸质质控物(订货号: R7010)
SureFood® Allergen QUANT Gluten麸质过敏原定量 PCR检测试剂盒(订货号:
S3206)
SureFood® Allergen real time PCR Gluten 麸质过敏原PCR 检测试剂盒(订货号:
S3106)
4 RIDASCREEN® Gliadin 12-04-18
1. 用途
RIDASCREEN® Gliadin麸质检测试剂盒,采用夹心酶联免疫反应,用于定量检测
小麦(麦胶蛋白)、黑麦(黑麦碱)及大麦(大麦醇溶蛋白)中的醇溶谷蛋白,适
用于原料类样品如面粉(荞麦、米、玉米、燕麦、苔麸),也适用于经过加工的食
品样品如面条、熟食、烘焙食品、香肠、饮料和冰激凌。
所有的样品都要使用Cocktail Solution 样品处理缓冲液(订货号:R7006, 官方正式
的R5抗体方法)或RIDA® Extraction Solution 样品提取缓冲液(订户好: R7099)
进行样品提取处理。其他的样品处理方法可以向德国拜发 R-Biopharm集团索要。
2. 概要
小麦粉及麸质因其耐热性和诸如质地、缩水性和芳香等方面的特性被极为普遍地用
作食品原材料。麸质蛋白是醇溶谷蛋白和麦谷蛋白的混合物,存在于小麦、黑麦和
大麦中。
乳糜泻是因对麸质蛋白的不耐性而导致的常发性疾病,若避免食用麸质蛋白,则该
病自消。
根据 Codex Alimentarius食品法典(08/31/26),将食品中麸质含量的标签标注分
为两个等级:
1.“无麸质”食品,为含有不超过 20 mg/kg的麸质蛋白的食品。
2. 标签上标注为“含有极少量麸质”的产品,其中允许含有超过 20 mg/kg的麸质
蛋白,但最多不能超过 100 mg/kg。
3. 检测原理
检测的基础是抗原抗体反应。微孔板中包被有针对麦胶蛋白的特异性抗体。加入标
准品或样品,其中含有的麦胶蛋白和特殊的捕获抗体结合形成抗体抗原复合物。没
有结合的部分在洗涤步骤中被除去。随后加入过氧化物酶标记的抗体。抗体酶连接
物和抗体抗原复合物结合,形成抗体-抗原-抗体复合物(三明治)。没有结合的抗
体酶连接物在洗涤步骤中被除去。将底物(过氧化脲)和发色剂(四甲基对二氨基
联苯)加入孔中。和抗体结合的酶将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终
止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在 450 nm 处测量。吸光度值与样品中的麦胶蛋
白浓度成正比。
4. 试剂盒组份
每一个盒中的试剂足够进行 96个试验(包括标准测定),盒中的组份如下:
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1 x 96孔微孔板(12条每条 8孔)
包被有针对麦胶蛋白的抗体
6 x 麦胶蛋白标准品,每瓶 1.3 ml
0 ppb(零标准品),5 ppb,10 ppb,20 ppb,40 ppb,80 ppb麦胶蛋白
水溶液,即用型
1 x 酶连接物(1.2 ml) ..........................................................................红色瓶盖
过氧化物酶标记的抗体,浓缩液
1 x 底物(7 ml) ....................................................................................绿色瓶盖
含有过氧化脲
1 x 发色剂(7 ml).................................................................................蓝色瓶盖
含有四甲基对二氨基联苯
1 x 反应终止液(14 ml)........................................................................黄色瓶盖
含 1 N的硫酸
1 x 样品缓冲液(60 ml)........................................................................白色瓶盖
5倍浓缩液
1 x 洗涤缓冲液(100 ml)......................................................................棕色瓶盖
10倍浓缩液
5. 另需的试剂和设备
5.1. 设备:
− 微孔板酶标仪(450 nm)
− 离心机 + 离心管
− 振荡器
− 粉碎机,研钵,Ultra-Turrax匀浆机或者均质器
− 水浴锅(50 °C)
− 刻度移液管
− 可调式 20 µl - 200 µl 和 200 - 1000 µl 微量移液器
5.2. 试剂:
− 蒸馏水或去离子水
− 脱脂奶粉(食品级)
− Cocktail Solution提取液,订货号:R7006,(105 ml)用于样品处理
− 乙醇溶液(80 %),用于 Cocktail Solution 样品处理缓冲液进行样品提取:每
120 ml乙醇和 30 ml蒸馏水充分混合
或者
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− RIDA® Extraction Solution(样品提取液),订货号:R7099,(105 ml)用于样
品处理
− 异丙醇溶液(68 %),用于RIDA® Extraction Solution样品提取缓冲液进行样品
提取:每 68 ml异丙醇和 32 ml蒸馏水充分混合
6. 操作者应该注意之事项
反应终止液含 1 N硫酸(R36/38, S2-26)。
缓冲液中含有硫柳汞。避免皮肤接触。
7. 储存条件
保存试剂盒于 2 - 8 °C,不要冷冻。
将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于 2 - 8°C
条件下。
无色发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
对过了有效期(见试剂盒标签)的试剂盒不再提供任何质量保证。
不能交叉使用不同批号的盒中试剂。
8. 试剂变质的迹象
− 发色剂在使用前颜色变蓝
− 标准品 6的吸光度值小于 0.6 (A450 nm < 0.6)
9. 样品处理
9.1. 检测前的准备
空气中含有的谷物粉尘以及受污染的实验室设备会导致检测过程被麦胶蛋白污染。
因此在检测前要佩带手套:
− 器物
面、玻璃容器、粉碎机和其他的设备用 60 - 80 %乙醇或者异丙醇(参见
5.2.)清洁
− 样品处理和酶联免疫分析应在独立的房间进行
− 试剂和设备使用RIDA® QUICK Gliadin(订货号:R7003 / R7004)快速检测条检
测是否被麦胶蛋白污染
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− 建议在通风厨中进行检测操作,因为Cocktail Solution 样品处理缓冲液(订货
号:R7006)和RIDA® Extraction Solution样品提取缓冲液(订货号:R7099)中
含有ß-Mercaptoethanol ß-巯基乙醇
− ß-Mercaptoethanol ß-巯基乙醇会破坏后面的 ELISA反应。所以需要将处理好的
样品进行至少 1:500 的稀释(建议对麸质含量大约在 20 mg/kg 的样品进行 1:500
的稀释,对麸质含量大约在 100 mg/kg 的样品进行 1:2500的稀释)
9.2. 用 Cocktail Solution样品处理缓冲液液提取(订货号:R7006,AOAC认证的
官方标准检测方法)
取足够大量的样品(至少 5 g或 5 ml),充分均质(仔细捣碎,碾磨,充分混
合)。
− 液态食品样品: 0.25 ml 均质样品中加入 2.5 ml Cocktail Solution提取液,密闭
上容器并充分混合
− 其他食品样品(例如含有大豆或小米的食品样品):称取 0.25 g均质样品,加入
2.5 ml Cocktail Solution提取液,密闭上容器并充分混合
− 含有丹宁和多酚的食品样品(如巧克力、咖啡或可可、板栗粉、奎奴亚黍
(quinoa)或含有荞麦的食品):称取 0.25 g均质样品,加入 0.25 g脱脂奶粉
和 2.5 ml Cocktail Solution提取液,密闭上容器并充分混合
− 肉类和香肠样品: 这类食品中麦胶蛋白的含量可能非常不均衡,所以称取样品
50 g并均质
− 称取 0.25 g均质样品,加入 2.5 ml Cocktail Solution样品处理缓冲液,密闭上容
器并充分混合
请按照以下步骤对样品进行提取操作:
− 50 °C条件下孵育 40分钟
− 冷却样品,然后加入 7.5 ml 80 %乙醇(参见 5.2.)
− 密闭上容器在室温条件下(20 - 25 °C)回旋振荡或借助旋转器振荡 1小时
− 离心:10 min / 至少 2500 g / 室温(20 - 25 °C)
− 上清液收集于可密闭的试管中
− 按比例至少 1:12.5(1+11.5 / 80 µl + 920 µl)用稀释后的样品缓冲液(参见
10.1.)继续稀释:最后的稀释倍数至少为 500
− 取 100 µl每孔进行检测
9.3. 使用RIDA® Extraction Solution样品提取缓冲液(订货号:R7099)提取
使用RIDA® Extraction Solution样品提取缓冲液进行样品提取,相比使用Cocktail
Solution样品处理缓冲液,时间上要更节省一些。
取足够大量的样品(至少 5 g或 5 ml),充分均质(仔细捣碎,碾磨,充分混
合)。
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− 液态食品样品: 0.25 ml 均质样品中加入 2.5 ml RIDA® Extraction Solution样品
提取液,密闭上容器并充分混合
− 其他食品样品:称取 0.25 g均质样品,加入 2.5 ml RIDA® Extraction Solution样
品提取液,密闭上容器并充分混合
− 含有大豆、粟、藜麦、荞麦的食品样品及含有丹宁和多酚的食品样品(如巧克
力、咖啡或可可、板栗粉、调味料等):称取 0.25 g均质样品,加入 0.25 g脱脂
奶粉和 2.5 ml RIDA® Extraction Solution样品提取液,密闭上容器并充分混合
− 肉类和香肠样品: 这类食品中麦胶蛋白的含量可能非常不均衡,所以称取样品
50 g并均质
称取 0.25 g均质样品,加入 2.5 ml RIDA® Extraction Solution/ Extraktions-
Lösung样品提取液,密闭上容器并充分混合
请按照以下步骤对样品继续进行提取操作:
− 60 °C条件下孵育 15分钟
− 冷却样品,然后加入 7.5 ml 68 %异丙醇溶液(参见 5.2.)
− 密闭上容器在 60 °C水浴锅中孵育 10分钟
− 离心:10 min / 至少 2500 g / 室温(20 - 25 °C)
− 上清液收集于一可密闭的试管中
− 按比例至少 1:12.5(1+11.5 / 80 µl + 920 µl)用稀释后的样品缓冲液(参见
10.1.)继续稀释:最后的稀释倍数至少为 500
− 立刻取 100 µl每孔进行检测
备注:
离心后的上清液至于良好密闭的容器中,在室温条件下(20 - 25 °C)暗处可保存 8
周。
10. 检测步骤
10.1. 检测前的准备
使用之前将所有试剂回温至室温(20 - 25 °C)。
样品缓冲液为 5倍浓缩液。检测当日取需要的缓冲液按比例 1:5(1+4)用蒸馏水稀
释(例如:3 ml浓缩液 + 12 ml蒸馏水,足够用于 10份样品的稀释)。应确保缓
冲液不被样品污染。
抗体酶连接物(红色瓶盖瓶子)为 11 倍浓缩液。由于稀释的酶连接物的弱稳定
性,所以只稀释实际需用量的酶连接物物。在吸取浓缩液之前,要轻轻的振摇以便
充分混均。用缓冲液以 1:11(1+10)的比例稀释酶连接物浓缩液(参见 4)(例
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如:200 µl浓缩液 + 2.0 ml缓冲液,足够 2个微孔板条用)。注意水不要被麦胶蛋
白污染。
洗涤缓冲液为 10 倍浓缩液,在使用前必须按比例 1:10(1+9)用蒸馏水稀释(例
如:100 ml 缓冲液浓缩液 + 900 ml 蒸馏水)。在稀释前注意,如果存在结晶,应
在 37 °C水浴锅中加热完全溶解。稀释后的缓冲液在 2 - 8 °C条件下可保存 4周。
10.2. 检测操作
仔细洗板非常重要。避免在操作过程中微孔出现干燥。
1. 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架,均做两个平行实验,
记录下标准品和样品的位置。
2. 将 100 µl 标准品及处理好的样品溶液加到相应的微孔中,均做两个平行实验。
在室温条件下(20 - 25 °C)孵育 30分钟。
3. 倒出孔中的液体,将微孔板架倒置在吸水纸上拍打(每轮拍打 3 次)以保证完
全除去孔中的液体。每孔加入 250 µl 稀释后的洗涤缓冲液(参见 10.1.)洗涤
微孔。上述操作重复进行两遍。
4. 向每一个微孔中加入 100 µl 稀释后的酶连接物溶液(参见 10.1.),在室温条
件下(20 - 25 °C)继续孵育 30分钟。
5. 倒出孔中的液体,将微孔板架倒置在吸水纸上拍打(每轮拍打 3 次)以保证完
全除去孔中的液体。每孔加入 250 µl 稀释后的洗涤缓冲液(参见 10.1.)洗涤
微孔。上述操作重复进行两遍。
6. 向每一个微孔中加入 50 µl 底物和 50 µl 发色剂,充分混合后在室温(20 - 25
°C)条件下暗处孵育 30 分钟。
7. 向每一个微孔中加入 100 µl 反应终止液,充分混合。在加入反应终止液后 30
分钟内于 450 nm 处测量吸光度值。
11. 结果评估
请使用R-Biopharm德国拜发公司专门为RIDASCREEN® 系列产品
的应用软件
RIDA® SOFT Win(订货号:Z9999)来进行结果分析。
关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书。建议使用 Gliadin Assay Controls
麸质质控物(订货号:R7010)来进行质量控制。
和标准曲线中的数据尤其是和零标准品进行比较,如果吸光度值(A450 nm)较高,
可认为是未充分洗涤或被麦胶蛋白污染。
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如果样品吸光度值(A450 nm)大于标准品 6,应继续稀释后再次检测。稀释后的样
品的检测结果值应该处于标准曲线的线性范围内。
从校正曲线上读出的麦胶蛋白浓度为 µg/kg(ppb),其必须乘以相对应的至少 500
倍的稀释倍数。此结果再乘以 2 可以得到麸质蛋白的浓度(麸质蛋白含量一般为麦
胶蛋白的 50 %)。
计算举例:
一样品的吸收值对应标准曲线中浓度为 10 µg/kg的麦胶蛋白。乘以建议的稀释倍数
500 得到 5000 µg/kg 即 5 mg/kg(ppm)麦胶蛋白,也就是 0.0005 %麦胶蛋白。
再乘以 2得到麸质蛋白含量为 10 ppm(0.001 %麸质蛋白)。此样品可视为不含有
麸质蛋白,因为其浓度小于 20 ppm。
备注
该检测试剂盒的产品手册和其他信息可从 R-Biopharm 德国拜发公司当地子公司或
经销商处获取。
以上信息是基于我们现有知识的基础上对我们的产品及其相关应用的说明。而
并非对产品的任何特定性能或特定使用目的进行担保。R-Biopharm 德国拜发
公司不承担除试剂基本品质之外的任何责任。除因产品使用而造成的直接或间
接损坏及损失外,其它有缺陷的试剂盒可退换。
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