马铃薯培养基及其制作

马铃薯培养基及其制作 马铃薯培养基及其制作 马铃薯除可以食用或加工成各种食品和工业用品外，还可以制作成各种试验需求的生物培养基。 材料: 马铃薯20g、蔗糖 2g、自来水 100mL、琼脂 2g、pH 自然(约6.0) 灭菌:1.05kg/cm2，20min 马铃薯处理方法: 马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min(注意火力的控制，可适当补水) ，用纱布过滤，滤液加糖，补足水至100ml，装入三角瓶。 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 葡萄糖 20克 维生素 10毫克 琼脂 18克 先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。分装，灭菌，备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖)，补足水分，分装，灭菌，备用。 把这培养基的pH值调到7.2,7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 按所用原料不同，可分为两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的，称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的，称为合成培养基或综合培养基。马铃薯培养基就是天然培养基，综合马铃薯培养基就是人工合成的。 不同的生物需要不同培养基，注意配方的选取，称取要准确，误差不能太大对于特殊物品，不能灭菌的要用过滤方法除菌。配好后高温高压灭菌，可以在室温下放置很久，如果打开使用过一次，请放置冰箱。如果长时间不用，一定要重新配置，不能拿以前的用来培养，避免污染。 培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。但一般培养基的程序主要可分为:配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8个步骤。 (一)配料 按培养基处方准确称取各种成分，先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水，再加入各种成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。 (二)溶化 将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应随时搅拌，如有琼脂成分时更应注意防止外溢。溶化完毕，补足失去的水分。 (三)矫正pH 1.pH测定 取与管同口径的试管(通常用华氏试管)3支，于第1、3管各加入欲测定pH的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g/L的酚红0.25ml作为测定管，混匀;于第2管加入蒸馏水5ml，第4管为pH标准比色管。 2.pH的校正 若测定管过酸或过碱可用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸溶液矫正，直至颜色与标准管相同为止，加碱或加酸时要精确缓慢，每加1滴后要充分混匀，比色后再加第2滴(有时仅加半滴)准确记录加入的量。 3.计算 设5ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L氢氧化钠0.15ml，现有培养基4990ml，需加氢氧化钠的量可按下列方法计算:5?4990=0.15?X X=0.15×4990/5=149.7(ml) 如将此0.1mol/L的氢氧化钠改用1mol/L的氢氧化钠时，则需14.9ml即可。 (四)过滤澄清 培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现，需过滤成清晰透明后方可使用，常用的过滤方法如下: 1.液体培养基 液体培养基必须清晰，以便观察细菌的生长情况，常用滤纸过滤，亦可在加热前加入用水稀释的鸡蛋白(1000ml培养基用1个鸡蛋白)在100?加热后保持60,70?40,60分钟，使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤。 2.固体培养基 如系琼脂培养基，于加热融化后需趁热以绒布或两层纱布中夹脱脂棉过滤;亦可用 自然沉淀法，即将琼脂培养基盛人铝锅或广口搪瓷容器内，以高压(103.43kPa)蒸汽融化15分钟后，静置高压锅内过夜，次日将琼脂倾出，用刀将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的琼脂培养基。 (五)分装 1.根据需要将培养基分装于不同容量的三角烧瓶、试管中。分装的量不宜超过容器的2/3以免灭菌时外溢。 2.琼脂斜面分装量为试管容量的1/5，灭菌后须趁热放置成斜面，斜面长约为试管长的2/3. 3.半固体培养基分装量约为试管长的1/3，灭菌后直立凝固待用。 4.高层琼脂分装量约为试管的1/3，灭菌后趁热直立，待冷后凝固待用。 5.液体培养基分装于试管中，约是试管长度的1/3. 6.琼脂平板:将灭菌(或加热融化)后的培养基冷至50?左右，以无菌手续倾人灭菌平皿内，内径225px的平皿倾注培养基约13,15ml，轻摇平皿底，使培养基平铺于平皿底部，待凝固后即成，倾注培养基时，切勿将皿盖全部启开，以免空气中尘埃及细菌落入。 新制成的平板培养基(简称平板)，面水分较多，不利于细菌的分离，通常应将平皿倒扣搁置于37?培养箱内约30分钟待平板平面干燥后使用。 (六)灭菌 不同成分、性质的培养基，可采用不同的灭菌方法。高压蒸汽灭菌法:高压灭菌的温度与时间随培养基的种类及数量的不同有所差别， 一般培养基少量分装时高压(103.43kPa)灭菌15分钟即可，培养基分装量较大时，可高压(103.43kPa)灭菌30分钟，含糖的培养基高压(55.16kPa)灭菌15分钟。以免糖类被破坏。 (七)检定 每批培养基制成后须经检定方可使用，检定时将培养基放37?温箱内培养24小时后，证明无菌，同时用已知菌种检查在此培养基上生长繁殖及生化反应情况，符合者方可使用。 (八)保存 制好的培养基，不宜保存过久，以少量勤做为宜。每批应注明名称，分装量，制作日期等，放在4?冰箱内备用