一种减少皮肤色素沉淀的二氢芳基萘类木脂素化合物外用凝胶项目可行性报告概要

一种减少皮肤色素沉淀的二氢芳基萘类木脂素化合物外用凝胶项目可行性报告概要 项目可行性研究报告 项 目 名 称 一种减少皮肤色素沉淀的二氢芳基萘类木脂 素化合物外用凝胶的应用研发 1立项的背景与意义 1.1立项背景 黑色素(Melanin)是动物皮肤或者毛发中存在的一种黑褐色的色素，通常以聚合的方式存在，它主要由皮肤表皮基底层的黑色素细胞产生。黑色素的含量及分布决定了皮肤的颜色，此外它还能减小紫外线对皮肤的伤害。然而，黑色素在基底层的异常蓄积会造成色素沉着过度引起黑斑病、雀斑、老年斑、黑色素瘤等，给人们的生活工作带来困扰，严重的如黑色素瘤还危及生命。该类皮肤病的治疗一直是皮肤科及医学美容工作者研究的重要课题。 在皮肤黑色素的形成过程中，酪氨酸酶(Tyrosinase，TYR)扮演了重要角色，它是酪氨酸(Tyrosine)和多巴向黑色素转变过程中的主要限速酶，它的过量表达是导致色素沉着过度的主要原因。日晒过度、内分泌失调和化妆品使用不当等，都有可能引起色素沉着过度。临床上对该类疾病的治疗主要从两方面入手，一种是对因治疗，另一种是对症治疗，后者是采用物理或者化学方法来祛除黑色素，皮肤磨削术、激光疗法和药物治疗是常用的治疗手段。由于操作相对简单，临床上对色素沉着的治疗多优先以药物治疗入手，治疗中常使用酪氨酸酶抑制剂来抑制人体内TYR的活性，从而阻断黑色素的生物合成反应链。常用的酪氨酸酶抑制剂有氢醌、曲酸等，但它们存在作用强度弱或安全性差等缺点，如近年来日本学者研究发现曲酸可能有致癌性，氢醌对皮肤刺激性较强，会引起灼烧感，长期使用会诱发褐黄病和胶样粟丘疹等。因此，对黑色素生物合成机制的深入研究及寻找新型高效的酪氨酸酶抑制剂一直是一项重要的工作。 1.2立项意义 本项目为寻找新的酪氨酸酶抑制剂，而对黑色素生物合成机制进行深入的研究，开发了一种对黑色素生物合成的限速酶酪氨酸酶(TYR)有较强的抑制作用的VBE-1凝胶。VBE-1是一种从黄荆子(Vitex negundo L.)中提取出的二氢芳基萘类木脂类化合物，化学名为6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘。2006年，Azhar-ul-Haq发现，VBE-1对黑色素生物合成的限速酶酪氨酸酶(TYR)有较强的抑制作用，因此可能抑制黑色素的生物合成。与常用的酪氨酸酶抑制剂曲酸相比，VBE-1对TYR的抑制 作用更强，有望成为一种新型的天然植物源治疗皮肤色素沉着的药物。课题组前期研究发现VBE-1口服生物利用度低，在体内易代谢失活，提示系统给药不是发挥VBE-1抑制黑色素作用的理想途径，将其制成局部外用制剂是较好的选择。因此，根据VBE-1的生物特性，制成VBE-1外用凝胶是最为有效的办法，该凝胶具有制备工艺简单、成本低、易于控制剂量、使用方便、便于携带的优点，可以满足现有市场对高效的天然酪氨酸酶抑制剂的日益强烈的需求，具有良好的社会经济效益。 2国内外研究现状与发展趋势 2.1研究现状 1)黑色素淡化机理 黑色素其实是一种蛋白质，在每个人的体内都有。它们存在于皮肤基底层的细胞中间，此时并不是真正意义上的黑色素，而是一种叫“黑色素原生物质”的物质，也叫做“色素母细胞”。色素母细胞分泌麦拉宁色素，当紫外线(B波、A波)照射到皮肤上(B波即UVB作用于皮肤基底层，而A波更厉害，作用于皮肤的真皮层)，肌肤就会处于“自我防护”的状态，藉由紫外线刺激麦拉宁色素，激活酪氨酸酶的活性，来保护我们的皮肤细胞。酪氨酸酶与血液中的酪氨酸反应，生成一种叫“多巴”的物质，多巴其实就是黑色素的前身，经酪氨酸氧化而成，释放出黑色素，黑色素又经由细胞代谢的层层移动，到了肌肤表皮层形成雀斑、晒斑、黑斑等形状了。要减少黑色素沉淀，可以通过两个途径实现:一种是防止色素的生成;另一种是促使生成的色素的排泄出体外。由于操作相对简单，临床上对色素沉淀的治疗多优先以药物治疗入手治疗中常使用酪氨酸酶抑制剂来抑制人体内TYR的活性，从而阻断黑色素的生物合成反应链，常用的酪氨酸酶抑制剂有氢醌、曲酸及其衍生物。由于现有产品有不足之处，加上美白产品的需求量不断增大，对黑色素生物合成机制与酪氨酸酶抑制剂的作用机理的深入研究吸引了众多学者的关注;同时，由于开发新型高效的天然酪氨酸酶抑制剂的市场需求日益强烈，越来越多的学者开始从植物提取物中筛选活性化合物，比如Ahmad Gholamhoseinian曾对80种植物进行筛选，发现绿茶、小茴香等6 种植物的提取物能有效抑制酪氨酸酶。这类研究将进一步加深人们对黑色素及其抑制剂的认识，为皮肤的美白提供新的思路。 2)现有主要酪氨酸酶抑制剂 氢醌:是一种白色针状结晶，可溶于14倍的水，是一种传统且有效的淡化黑色素沉淀的成分，它具体凝结蛋白质的作用，通过凝结氨酸酶中的氨基酸，使酶冻结而失去催活性。但是，氢醌对皮肤刺激性较强，在一定浓度下可致黑色素细胞变性、死亡，大量使用会引起灼烧感，长期使用会诱发褐黄病和胶样栗丘疹等。 曲酸:又称为曲菌酸，是目前研究的最为深入的酪氨酸酶抑制剂，它是一种真菌的代谢产物，常作为美白添加剂和食品添加剂。曲酸在单酚酶活性上表现出竞争性抑制作用，在双酚酶活性上表现出混合型抑制作用，说明曲酸可以和游离酶(Emet或Eoxy)以及酶底物复合物(EmetD或EoxyD)结合。曲酸5位羟基 2+和4位酮基能与底物竞争酪氨酸酶活性中心上的Cu，从而抑制酶的活性，使重要中间产物的生成阻断从而抑制了黑色素的生成，它对酶的抑制作用为可逆过程。曲酸化学式如下图所示: 图1-1 曲酸结构式 由于曲酸对光、热及金属离子不稳定，而且皮肤吸收性较差，人们开发了大量的曲酸衍生物来改善它的性能，它们的作用机理与曲酸相同。衍生物的开发主要是对曲酸分子上的两个羟基进行修饰，主要进行的是酯化和烷基化反应。目前美白产品中曲酸双棕榈酸酯是最流行的曲酸类美白剂，其较曲酸在光、热稳定性上有很大提高，美白效果更佳，更易被皮肤吸收。然而，曲酸存在安全性差的问题，近年来日本学者研究发现曲酸可能有致癌性。 多酚类化合物:特指自然界中含多个酚类官能团的化合物，是酪氨酸酶抑制剂中最大的一类。一些多酚类化合物是酪氨酸酶的底物，其中包括黄酮类化合物、芪类和香豆素衍生物。黄酮类化合物通过竞争性抑酪氨酸酶对左旋多巴的氧化来 抑制黑色素的生成，比如栎精、非瑟酮等，根据它们的结构推测它们是以螯合酶活性中心的铜来抑制酶活力。研究显示对该类化合物苯环上的羟基进行糖基化和甲氧基化修饰能显著影响其抑制强度。芪类包含一个由乙烯基取代的苄基环，这一类抑制剂在单酚酶活性和双酚酶活性上均表现为非竞争性抑制剂，它们可减少黑素瘤细胞中的色素沉积，其作用机制是直接抑制酶的活性而不影响基因的表达。 蒽醌类化合物:它有着非常广泛的药理学活性。研究显示大黄素甲醚对酪氨酸酶的抑制作用与曲酸类似，而经羟基和甲氧基修饰后，其活性有大幅度提高Azhar-ul-Haq对黄荆子提取物中的木脂素类化合物进行了研究，有7个单体对酪氨酸酶的抑制作用强于曲酸，其中的VBE-1抑制强度大约是曲酸的2倍，该化合物的研发已被列为“十一五”重大专项题目，由于黑色素主要在皮肤基底层产生，药物可能通过滞留在皮肤中发挥药效。 2.2发展趋势 综合对淡化黑色素药品的临床研究和市场分析，淡化黑色素类产品将成为未来临床药品和化妆品发展的重要品种之一，其开发、研究将会成为全球尤其是亚洲临床研发关注的重点。今后此类产品的发展将会呈现如下趋势: (1)为了实现长期使用、安全、高效的理想，研究人员将在改善现有减少色素沉着产品成分不足的基础上，不断开发新型减少黑色素沉淀成分，以满足不断增长的临床需求; (2)天然提取淡化黑色素的药品会有所增加，实践证明，一些天然成分具有很好的淡化黑色素的效果，且安全可靠，世界各国植物药资源丰富，中草药因其药效温和、副作用小而被广泛认同，回归大自然的思想具有较好的市场号召力，天然酪氨酸酶抑制剂的开发将成为未来一个备受瞩目的课题。 3项目实施主要内容、技术关键与创新点、预期目标 3.1实施主要内容 1、项目实施主要内容 A、已研究开发内容 1)处方前研究:建立VBE-1的分析方法，考察VBE-1的溶解度及油水分 配系数。 VBE-1的基本理化性质能影响其在皮肤内的转运能力，也是制剂处方设计的基础和质量控制的依据。本项目建立了VBE-1的HPLC分析方法，考察了VBE-1在一些非水溶剂和水性溶剂中的溶解度以及在正辛醇-水和正辛醇-缓冲盐体系中的油水分配系数，并用UV法考察了VBE-1的pH稳定性，用荧光法推测了其结构变化，为药物的处方设计提供参考。 结果显示，VBE-1在非水溶剂中的溶解度由大到小依次为:PEG-400,1，2-丙二醇,RH-40,MCT,IPM，在水性溶剂中的溶解度由大到小依次为:30%PEG-400生理盐水,20%PEG-400生理盐水,10%PEG-400 生理盐水,超纯水?生理盐水。VBE-1有一定的亲脂性，lgP值为1.27左右，pH值为4.0-8.0时，lgP随着pH值的升高而降低。pH能够改变VBE-1的结构，在5.0-7.2范围内，VBE-1在200-400nm范围内最大吸收波长处的吸光度值随着pH值的升高而降低，但这种变化可逆。在pH,6时，VBE-1能产生荧光，其结构可能发生了酮式-烯醇互变，其荧光强度随着pH值的升高而增强。 2)VBE-1经皮渗透行为的考察:药物的体外经皮渗透实验是经皮给药系统开发中用来预测药物经皮渗透的速率，研究介质、处方组成和透皮吸收促进剂等对药物经皮渗透行为的影响，是药物经皮给药系统有效性和安全性的前提保障。 本项目建立体外经皮渗透实验方法，采用改良Franz渗皮扩散池和离体乳猪皮肤模型，将VBE-1制备成溶液和混悬液后研究其体外经皮渗透规律，探讨了药物存在形式对其体外经皮渗透行为的影响。 2结果显示，溶液和混悬液的稳态渗透速率分别为1.41?0.59μg/h?cm和0.69 2?0.07μg/h?cm，渗透时滞分别为0.55?0.09h和5.29?0.71h。两组的24h单位面积皮肤累积渗透量和单位质量皮肤累积滞留量有明显差异(P,0.05)。提示分子状态的药物有更强的能力进入皮肤。pH值为5.0和7.0时，溶液中VBE-1的24h单位面积累积渗透量和单位质量皮肤滞留量无明显差异(P,0.05)，此现象可能是药物的理化性质和皮肤的缓冲能力共同作用的结果。以上结果将为处方设计提供指导。 3)VBE-1凝胶的构建及质量评价:以羟丙甲基纤维素(HPMC)为凝胶基质，PEG-400为溶媒，甘油为保湿剂，苯甲酸钠为防腐剂，制备VBE-1凝胶， 考察凝胶基质浓度、载药量对VBE-1凝胶体外经皮渗透的影响，并对凝胶进行质量评价。 结果显示，在用量为1.5%~3%时，凝胶的稠度随着HPMC浓度的升高而增 2大，载药量为1%的凝胶24h单位面积皮肤累积渗透量从2.84?0.60μg/h?cm 2减小到1.12?0.75μg/h?cm，单位质量皮肤累积滞留量从10.71?2.27μg/g减小到7.48?0.78μg/g。提示凝胶稠度的增加会阻碍药物的经皮渗透。HPMC用量为1.5%时即可满足涂展要求，制得的凝胶为均匀、细腻、稠度适宜的黄色半固体，有较好的涂展性;25?条件下放置，无变色、析晶、异臭等现象，提示在该基质用量下，药物能以分子状态稳定的存在。凝胶pH值为5.53左右，锥入度为391~403。该凝胶于4?、40?及强光条件下放置30天，基本稳定。载药量为0.5,、1%和2,的凝胶中VBE-1的累积渗透量和皮肤滞留量呈载药量依赖性(P,0.05)。 4)VBE-1凝胶对皮肤色素沉着的干预作用:本项目利用棕黄色豚鼠作为动物模型进行VBE-1的药效研究，利用中波紫外线(UVB)照射诱导豚鼠皮肤色素沉着，以氢醌乳膏为阳性对照，考察VBE-1凝胶对皮肤色素沉着的干预作用。 结果显示，氢醌乳膏(阳性对照)、2%VBE-1凝胶和1% VBE-1凝胶组的黑色素增加量明显低于UVB对照组(P,0.01或P,0.05)，组之间的差异无统计学意义(P,0.05)。氢醌乳膏和2%VBE-1凝胶组的黑素含量指数明显低于UVB对照组(P,0.01)，两组之间的差异无统计学意义(P,0.05)。2%VBE-1凝胶组的酪氨酸酶活性明显低于UVB对照组(P,0.05)，与阳性对照组无明显差异(P,0.05)。 B、待研究开发内容 1)进一步研究VBE-1干预皮肤色素沉着的机制及量效关系; 2)从分子水平探讨VBE-1对黑色素相关基因的调控; 3)进行在体实验，完成在体各项生化指标的测定; 4)外用制剂的中试放大及相关质量研究等。 2、项目解决的关键问题 (1)研究开发一种安全的新型天然提前物成分以淡化黑色素沉淀; (2)提供一种新型高效的给药机制，以提高药物临床使用效率。 3、项目技术开发路线 本项目具体技术开发路线如下图所示: VBE-1的提取 VBE-1结构确证 VBE-1经皮渗透行为的考察 VBE-1理化性质的考察 VBE-1凝胶剂的制备 VBE-1凝胶剂质量评价 作用机制研究 初步稳定性研究 体内外经皮渗透试验 VBE-1凝胶中试放大生产 药动学研究 安全性评价 质量及稳定性研究 图3-1 技术开发路线图 4、生产工艺流程图 本项目产品主要生产工艺过程如下图所示: HPMC VBE-1 甘油 PEG-400 分散均匀 超声加热溶解 溶胀完全 去离子水 凝胶基质 苯甲酸钠 搅拌均匀 VBE-1凝胶 图3-2 主要生产工艺流程图 3.2技术关键与创新点 1、工作原理 酪氨酸酶抑制剂的作用机理可以归纳为以下几点:1)减少多巴醌的生成，比如维生素C，它能够减少多巴醌向多巴的还原，从而阻止多巴色素和黑色素的生成;2)清除多巴醌，比如含硫化合物，它能与多巴醌反应生成无色的产物，黑色素的生成速度会因此而减慢，直至多巴醌清除剂耗尽;3)与底物竞争酪氨酸酶，大部分的酪氨酸酶抑制剂是苯酚或儿茶酚衍生物，结构与酪氨酸或多巴类似，它们通过与底物竞争酪氨酸酶而减少黑色素的生成，当它们与酶的亲和力较强时，多巴色素的合成会受阻，酪氨酸酶的活性被间接的抑制;4)非特异性的酶灭活剂，比如一些酸类和碱类，它们可以非特异性的使酶变性;5)特异性的酪氨酸酶灭活剂，这一类抑制剂也称为自杀底物，这些底物可以与酪氨酸酶形成共价键，从而使酶在催化反应期间被不可逆的钝化，这种抑制被称为“自杀反应”;6)特异性的酪氨酸酶抑制剂，这一类化合物通过与酪氨酸酶可逆的结合来减弱其催化活性。具有以上6种作用机理的化合物中，只有特异性的酪氨酸酶灭活剂和特异性的酪氨酸酶抑制剂能直接作用于酪氨酸酶，它们的抑制作用相对较强，而其他几类化合物都是间接作用于酪氨酸酶，抑制作用相对较弱。 黄荆子是马鞭草科植物黄荆的果实，原产于印度，主要分布在南亚、东非和南美地区，局有免疫增强、解热镇痛等作用，其化学名为6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R，4S)-2-醛基萘。该类化合物能有效抑制黑色素生物合成中的限速酶酪氨酸酶的活性，且作用强于常用酪氨酸酶 抑制剂曲酸。因此，该类化合物有望制成一种减少色素沉着的新型酪氨酸酶抑制剂。而VBE-1水溶性差，口服吸收少，易代谢，代谢产物无活性，具有一定的皮肤渗透性，局部外用可以避免系统给药后的代谢失活。因此，需要将其制备成一种外用制剂，使其易于在皮肤上施用，能够进入并滞留在皮肤中，抑制皮肤表皮基底层黑色素细胞中的酪氨酸酶，减少皮肤色素沉着。 2、创新点 本项目产品是一种天然中药黄荆子提取物制作而成，且其对酪氨酸酶的抑制作用是曲酸的两倍，具有制备工艺简单、成本低、易于控制剂量、使用方便、便于携带的优点，其主要创新点如下: (1)天然中药黄荆子提取出的VBE-1成分，能有效抑制黑色素合成，使用安全可靠。 本项目产品涉及的VBE-1是一种从黄荆子提取出的木脂类化合物，化学名为6-羟基-4-(4-羟基-3-甲氧基苯基)3-羟甲基-7-甲氧基-3，4-二氢(3R,4S)-2-醛基萘，其化学式如下: 图3-3 VBE-1的化学结构式 该化合物为天然提取物，制作工艺简单、成本低，能有效抑制黑色素生物合成中的限速酶酪氨酸酶的活性，且作用强于常用的酪氨酸酶抑制剂曲酸，且具备传统中草药因其药效温和、副作用小的特点，可长期使用。 (2)外用凝胶设计，提供新的给药途径，更好的发挥了药物效率。 VBE-1在体外对黑色素生物合成的抑制强度大约是传统酪氨酸酶抑制剂曲酸的2倍，在水中溶解性较差，在体内吸收速度较快，但生物利用度低，吸收后在体内迅速代谢，对活性有影响，因此，口服给药不是发挥VBE-1抑制黑色素作用的理想给药途径。皮肤黑色素主要由皮肤基底层细胞间的黑色素细胞产生， TYR主要分布于其细胞质中的黑色素小体内，药物需在皮肤中发挥治疗作用。与系统给药相比，局部施用可提高局部药物浓度，使药物直达病灶区，不仅可避免肝脏的“首过效应”和胃肠道的破坏，还可减少药物在全身的循环，降低出现潜在不良反应的风险，此外局部施用还可以提供可预定的和较长的作用时间，提高疗效，减少给药次数，可根据使用情况及时停药，使用方便。因此，局部施用应为VBE-1的首选给药途径。 药物常用的局部施用形式有凝胶剂、溶液剂和软膏剂等。软膏剂易造成涂布不均匀并且污染衣物，溶液剂易挥发或流失，因而它们的临床应用受到了一定的限制。凝胶剂是指药物与能形成凝胶的辅料制成的均一、混悬或乳剂型的乳胶稠厚液体或半固体制剂，临床上应用较多的是水性凝胶剂。凝胶剂的制备方法简单，其质地均匀细腻，涂展性好，涂布在皮肤上能形成薄膜，并且滞留时间长，可提高药物的局部浓度，延长药物的释放或扩散过程。此外，凝胶剂在使用时对皮肤和黏膜无刺激性，舒适度高，且不污染衣物，因此，在治疗皮肤疾病方面凝胶剂得到了广泛应用。与溶液剂相比，凝胶剂作用时间长，可避免溶液剂在使用时流失导致的剂量不准;与软膏剂相比，凝胶具有更好的生物相容性，易清洗、稳定性好，制备工艺条件要求低等特点。因此，VBE-1凝胶设计是一种较好的施用形式，对更好的发挥VBE-1对黑色素沉淀的淡化作用。 (3)创新 本项目提供的VBE-1凝胶包含以下重量百分含量的组份制成: 二氢芳基萘类木脂素 0.1-5%， 凝胶基质 1.5-3%， 防腐剂 0.1-1%， 保湿剂 5-20%， 醇溶剂 10-30%， 水 余量。 3.3预期目标 本项目旨在开一种能有效淡化黑色素沉淀，使用安全可靠的天然中药提取物VBE-1凝胶，其主要技术性能指标如下: 1)筛选VBE-1凝胶合适的浓度，以达到最佳治疗效果; 2)确认VBE-1在抗黑素生成过程中的分子靶点; 3)获得的凝胶剂均匀、细腻、稠度适宜，有较好的涂展性; 4)在常温下保持凝胶状，不干涸或液化; 5)pH为5.53左右; 6)其他各项检测指标符合2010版药典附录?U凝胶剂要求; 7)样品带外包装经过在4?、40?和强光条件下加速6个月稳定。 3.4主要技术成果 本项目由本公司自主研发，已申请并受理发明专利1项(专利名称:一种含二氢芳基萘类化合物的减少皮肤色素沉着的凝胶及制备方法，申请号:2014022600651380)。通过项目实施，还将实现以下技术成果: (1)完成VBE-1凝胶的研究开发，产品性能得到进一步完善; (2)产品在体药效得到进一步的证明; (3)申请相关专利1项。 4应用或产业化前景与市场需求 4.1产业化前景 黑色素(Melanin)主要由人体皮肤表皮基底层的黑色素细胞产生，它能减小紫外线对皮肤的伤害。黑色素的含量及分布决定了皮肤的颜色。然而，黑色素在基底层的异常蓄积会造成色素沉着过度引起黑斑病、雀斑、老年斑等，影响人们的生活质量。随着对黑色素生物合成研究的不断深入，研究者发现酪氨酸酶在黑色素生物合成中扮演重要角色，它是酪氨酸和多巴向黑色素转变过程中的主要限速酶，它的过量表达是导致色素沉着过度的主要原因。因此，抑制酪氨酸酶的活性可以阻断黑色素的生物合成反应链，减少黑色素的生成，可实现减少黑色素沉着的效果。近年来，越来越多的化合物被证实能够有效抑制酪氨酸酶的活性，它们被称为酪氨酸酶抑制剂，比如曲酸、熊果苷。但是现有的酪氨酸酶抑制剂药效并不理想，而且有些还具有一定的安全隐患，比如，近年来日本学者研究发现曲酸可能有致癌性。 由于现有产品有不足之处，加上美白产品的需求量不断增大，对黑色素生物合成机制与酪氨酸酶抑制剂的作用机理的深入研究吸引了众多学者的关注;同 时，由于开发新型高效的天然酪氨酸酶抑制剂的市场需求日益强烈，越来越多的学者开始从植物提取物中筛选活性化合物。比如:Ahmad Gholamhoseinian曾对80种植物进行筛选，发现绿茶、小茴香等6种植物的提取物能有效抑制酪氨酸酶。由于酪氨酸酶抑制剂在化妆品中的广泛使用，研究可以长期使用、安全、有效的药物将成为人们要考虑的主要问题。世界各国植物药资源丰富，中草药因其药效温和、副作用小而被广泛认同，随着化妆品研发中“回归大自然”的理念日渐深入人心，天然酪氨酸酶抑制剂的开发将成为化妆品领域一个备受瞩目的课题。项目产品是一种天然中药黄荆子提取物制作而成，且其对酪氨酸酶的抑制作用是曲酸的两倍，具有制备工艺简单、成本低、易于控制剂量、使用方便、便于携带的优点，避免了现有产品存在的问题，能很好的满足现在市场的需求。 综上所述，项目产品市场前景广阔。 4.2市场需求 本项目研究开发的减少黑色素沉淀用VBE-1凝胶，是一种由天然植物黄荆子提取的木脂类化合物为原料制成，不仅能用于临床治疗，满足临床治疗需要，其原理亦可以用作化妆品的制作研发。 近年来，国内美白、祛斑类产品已成为护肤品的主流产品之一，中国美白化妆品有着悠久的历史，东方女性历来崇尚“肤如雪，凝如脂”的美白效果，但我国由于受近代科技发展水平的限制，在生物理论上对美白剂的研究目前尚处于起步阶段，较日本、韩国有较大的差距。由于国民经济的飞速发展，人们生活质量有了明显提高，公众对美白型化妆品的需求成倍增长。20世纪末期，皮肤学、药理学、生理学、生物学等已开始渗透到化妆品科学中，高安全性并具有一定生理共享的化妆品正逐步被广大消费者接受。“绿色”是21世纪化妆品的主题，天然活性化妆品顺应回归大自然的发展潮流和人们的消费心理。随着我国加入WTO，国内化妆品与国外名牌的竞争将加剧，天然活性化妆品，特别是中草药化妆品将是我国化妆品的取胜法宝，从销售额和人均消费水平看，我国天然化妆品具有很大的发展空间。本项目产品研发的天然植物提取的VBE-1凝胶具有很大的发展潜力，能够满足我国天然化妆品需求，市场前景广阔。 5现有工作基础、条件和优势 5.1工作基础 目前，本项目已完成了产品处方前研究、VBE-1经皮渗透行为的考察、VBE-1凝胶的构建及质量评价、VBE-1凝胶对皮肤色素沉着的干预作用的药学研究，完成了产品的提取工艺、流程等关键技术的研究，实验结论的各项指标达到了要求，最后选用HPMC作为凝胶基质制备了不同载药量的VBE-1凝胶，该凝胶对UVB诱导的黑色素沉着表现出一定的干预作用。研究结果为VBE-1新适应症及给药途径研究开发奠定了基础，印证了项目技术实施的成熟性和可行性，制剂现处于研发小试阶段，制剂下一步将进行中试放大和在体实验，从分子水平探讨VBE-1对黑色素相关基因的调控等。在后续开发工作中，项目组将继续其他酪氨酸酶抑制剂模型的药效学研究、在体生化指标的测定，进行外用制剂的中试放大及相关质量研究等，项目研究开发阶段完成时要达到中试阶段。 项目研究成果已申报国家发明专利1项(专利名称:一种含二氢芳基萘类化合物的减少皮肤色素沉着的凝胶及制备方法，申请号:2014022600651380);经查新机构查新结论表明:国内公开的中文文献中，已有黄荆子抗肿瘤有效部位化学成分研究报道，但未见VBE-1用于一种减少皮肤色素沉淀的外用凝胶报道;已有1-O-(4-羟基苯基)-β-D-呋喃核糖苷作为酪氨酸酶抑制剂的应用报道，但未见利用VBE-1有效抑制黑色素生物合成中的限速酶酪氨酸酶的活性的作用并结合制剂新工艺，开发外用制剂报道;已有一种药物组合物及其在治疗或预防血管炎症药物中的应用、维胺酯在制备皮肤美白及祛斑化妆品或皮肤美白及治疗色素沉着性疾病药物上的应用、皮肤磨削及术后外用硅凝胶或积雪苷治疗面部增生性瘢痕的疗效比较、8-甲氧基补骨脂素皮肤靶向纳米脂质体凝胶的研究及评价及壬二酸衍生物凝胶的研制及治疗黄褐斑的临床和实验研究报道，但未见研究VBE-1的生物特性，筛选安全、稳定、有效的外用制剂处方，确定一种外用凝胶作为产品的局部施药给药途径报道。 5.2项目条件 1、研发条件 公司汇聚了一批中医、药学、药理、医学临床、天然药物化学等方面的专业技术人才，掌握了国内领先的成熟技术，具有坚实的理论基础和丰富的实践经验，严谨的科学作风和团队攻关协作精神，在中药新制剂、药理学方具有较为深入的研究。公司有独立的研发课题组，研发队伍由13人组成，占企业总人数的92%。 公司科研梯队职称结构、专业结构和年龄结构合理，全部具有本科以上学历和职称，其中博士2名，硕士5名，本科6名。为了激发科研人员的积极性与创造性，以进一步提高公司的研发能力，公司还每年提出利润的8%作为奖励基金，鼓励有突出贡献的科研人员;为保持持续的创新活力，公司正通过相关人才、技术引进机构引进本行业技术人才及前沿技术成果，以获取技术储备。 2、科研经费投入 公司成立至今，在科研经费的投入方面，已累计投入100多万元(含成立前投入)用于产品研发，并计划今后每年投入整个销售收入10%以上的资金用于技术开发;每年投入公司利润的8%作为对研发人员的奖励，从而为产品研发提供可靠的资金保障，保证研发人员的积极性，保证公司项目实施的持续性。在接下来的发展阶段，公司将继续加大科技投入，加大技改投资，同时引进人才，改进管理，不断提升产品性能、降低成本、加快产品更新换代，通过不断技术创新，不断超越自我，不断发展壮大企业。 3、科研设施、设备建设条件 (1)生产设备 我公司是一家主要从事新药产品研究、开发的初创型企业，主要以药物研发为主其生产设备主要是药物的小批量试生产。现角生产设备情况如表5-1所示。 表5-1:现有主要生产设备表 序号 设备名称 规格 数量(台) 真空均质乳化剂 Lab fisco-1, , 1 高剪切分散乳化机 2 Fluko 1 恒温磁力搅拌器 3 85-2B 3 旋转蒸发仪 4 RE-52AA 3 旋转蒸发仪 5 OSB-2100 1 锥入度计 6 ZHR-5A 1 药物透皮扩散试验仪 7 TK-6H 3 药物透皮扩散试验仪 TK-20B 8 1 (2)研发设备 我公司是一家主要从事新药产品研究、开发的技术型企业，公司现有研发试验室380余平方米，拥有高效液相色谱仪、透皮扩散试验仪、离心机等相关实验、生产仪器20多台。此外，未来更好的完善项目产品的质量，公司正在策划引进真空均质乳化机、质谱分析仪等一批先进的实验和检测设备，以进一步完善公司 的科研条件。现有研发设备情况如表5-2所示: 表5-2:现有主要研发设备表 5.3优势 1、人才优势 公司现有科技人员13人，全部为本科以上学历，在中药、药学、药理、医学临床、天然药物化学等相关专业和技术领域具有较为深入的研究。此外，公司与XX大学XX医学院、XX医药大学、XX大学第三医院等高校及临床医学机构建立了良好的合作关系，并从高校引进相关技术人才，为项目产品的研发奠定了坚实的人才基础。 2、技术优势 本项目产品由公司自主研究开发，公司成立以来一直致力于新药产品研究，公司曾承担过多项中药创新药的研究开发工作，如中药创新药吴茱萸止痛软膏的研究等。目前，项目已完成产品基本产品处方前研究、VBE-1经皮渗透行为的考察、VBE-1凝胶的构建及质量评价、VBE-1凝胶对皮肤色素沉着的干预作用的药学研究，已为产品的进一步研发开发提供了基础;与湖南中医院大学、中南大学、湘雅医院等省内多家著名大学和医院建立了伙伴关系，进一步增强了公司的研发能力。 3、设备优势 公司在注重对科研资金、人员投入的同时，也在不断地完善科研所需的硬件设备条件。公司计划新增全套检测仪器、仪表，拟定购置岛津液相色谱仪、生物显微镜、电子天平、真空均质乳化机等相关科研设备，极大地充实了公司产品研发的硬件设施，为公司项目产品开发能力的提升打下了坚实的基础。公司现有科研设备清单参见前文中表5-2，为了配合项目后续实施，公司还将采购一批科研生产设备(新增设备清单详见下表5-3)以增强公司科研及生产能力。 表5-3:拟定新增设备清单 设备名称 规格 数量(台) 金额(万元) 岛津液相色谱仪 LC-20A 1 25 生物显微镜 BK2000 5 5 电子天平 PL-4002-IC 3 3.5 真空均质乳化机 —— 3 8.5 合计 12 42 6项目实施、组织方式与课题分解 6.1实施方案 本项目是研发项目，是在公司处方前研究、VBE-1经皮渗透行为的考察、VBE-1凝胶的构建及质量评价、VBE-1凝胶对皮肤色素沉着的干预作用的药学研究基础上做给药途径的研发及产品在体性能测试的进一步研究，故在项目实施过程中采用如下方案: 本项目研究开发由公司自行组织实施，结合中南大学药剂学院相关资源，采取以研发课题组为中心，技术人员为研究组员的方式进行。项目课题组对项目课题制订明确的任务及目标，分工到位、责任到人并实施定期考核，在任务分配上做到分工合作，同时公司在人力、物力、财力上竭尽全力支持，确保项目顺利进行。同时，公司还将从管理团队建设、战略规划管理、开发体系管理、人力资源管理、资金管理等方面着手，保证项目顺利实施。 6.2组织方式 项目组织遵循技术部牵头，与财务、销售各部门密切配合，有效整合公司各部力量和资源的项目组织思想。项目实施过程中坚持项目课题组组长负责制与民主集中制相结合的组织方式，坚持整体规划、分步实施的原则。为保证项目的顺利实施，项目组制定了详细的项目实施方案，该方案对项目研究开发内容和实施任务进行整体规划，针对项目组成员各自的特点及优势，对项目任务进行仔细划分，明确各人所负责的开发任务和内容，并规定对项目研究过程中遇到的问题和分歧，采用协商、讨论和论证的方式进行解决。按照项目实施计划，要求各单位遵照实施计划按时按量进行科研活动，并定期召开项目实施进展会议，以便及时掌握彼此的研究进展，加强项目实施进度全程跟踪，搞好项目阶段性和结题总结，同时还能增强项目组成员的团队凝聚力。 在经费管理方面，项目组制定了严格、科学的科研经费#管理制度#，该制度严格遵循国家科技三项费管理办法，严格履行公出人员差旅费报销和项目经费使用规划，做到开销科目、数额公开透明，使科研经费发挥最大效能。以上各种制度和协议的制定，从组织方式和科研机制方面确保了项目的顺利实施。 6.3课题分解 本项目分解为以下几个阶段来完成: 1、项目启动阶段 此阶段处于整个项目实施的最前期，由成立项目组、分配课题组、编制总体项目计划三个阶段组成，确定VBE-1凝胶研究开发的基本路线，构建研究开发理论基础。 2、项目开发阶段 此阶段主要完成VBE-1凝胶的处方研究，主要包括处方前研究、VBE-1经皮渗透行为的考察、VBE-1凝胶的构建及质量评价、VBE-1凝胶对皮肤色素沉着的干预作用等部分，完成VBE-1凝胶给药途径研究，并从分子水平探讨VBE-1对黑色素相关基因的调控。 3、项目完善阶段 此阶段完成产品在体研究和其他酪氨酸酶抑制剂模型的药效学研究、在体生化指标的测定，进行外用制剂的中试放大及相关质量研究等，进一步完善产品性能。 7进度安排与年度计划内容 7.1实施进度安排 项目进度安排如以下表所示: 表7-1 项目产品化进度安排表 工作进度 工作内容和目标 资金投入(万元) 2013.06,2013.12 成立课题组，开展产品试验研究，完成凝胶初步构建 42.58 2014.01,2014. 12 完善凝胶处方，申请相关专利，进行在体生化研究 94.21 进行外用制剂的中试放大及相关质量研究，进一步完2014.01,2015.06 88.25 善产品 7.2年度主要工作内容 本项目各阶段具体实施工作内容规划如下: 第一阶段:2013年06月到2013年12月，建立课题组，完成相关理论依据的查找和项目的可行性分析，进行项目产品前期试验研究，包括出发前研究、VBE-1经皮渗透行为的考察、VBE-1凝胶的构建及质量评价、VBE-1凝胶对皮肤色素沉着的干预作用，为产品开发提供理论依据。 第二阶段:2013年12月到2014年6月，完成VBE-1凝胶的初步构建，拟 定申请相关专利，进一步开展VBE-1新适应症及给药途径的研究开发，探讨VBE-1干预皮肤黑色沉着的机制及量效关系。 第三阶段:2014年6月到2014年12月，完善VBE-1凝胶处方，进行在体生化研究，测定用药后动物皮肤中生化指标的改变，进一步证实其对皮肤黑色素沉着的干预作用。 第四阶段:2014年12月到2015年6月，实验室及工厂中试放大，完成处方的质量及稳定性考察，完善VBE-1凝胶处方。 7.3年度主要目标 2013年度:主要目标是确定项目实施方案，完成项目的可行性分析，并初步构建VBE-1凝胶。 2014年度:完善VBE-1凝胶处方，测定在体实验生化指标。 2015年度:处方质量及稳定性考察。 8承担单位和主要研究人员简况 8.1项目承担单位 XXXX 8.2项目主要承担人员 XXXX 9经费预算来源、使用计划 9.1经费来源 本项目计划总投资225.04万元，其中已完成投资42.58万元，计划新增投资182.46万元，新增投资资金来源说明如下: 表9-1:新增投资资金来源情况 本企业承诺以自有资金补足申请额和财政拨款立项额之间的差额 项目新增投资 182.46万元 其中:企业自筹 132.46万元 银行贷款 00.00万元 财政拨款 申请长沙市科技计划专项资金50.00万元 其他 00.00万元 企业自筹资金来源说明如下: 1)现有货币资金:从2014年2月份财务报表可以看出，公司现有货币资金101.01万元，可以用于本项目实施。 2)公司其他项目利润的滚动投入:从报表可见，公司现有未分配利润71.48万元，根据企业发展预测，未来两年来公司累计未分配利润将达到128.80万元，新增未分配利润57.32万元。为保障本项目顺利实施，公司股东会就利润分配决议如下:“自2013年度起，对公司累计未分配利润停止进行利润分配，用于本项目研究发展，直至项目完成”。 综上，公司自筹资金到位有保障。 9.2经费使用 本项目计划总投资225万元，近期已完成的投资额为42.54万，资金来源是公司自有资金投入，主要用于设备购置、技术研发费用及试验用材料购置等;计划新增投资182.46万元，其中新增固定资产100.38万元，主要用于生产场地建设和生产设备购置，流动资金投资82.08万元，新增资金使用计划详见表9-2: 表9-2:新增投资资金使用计划 (单位:万元) 建设期 序号 项目 合计 备注 第一年 第二年 新增总投资 182.46 86.80 95.66 1 固定资产投资 100.38 46.41 53.97 1.1 工程建筑 8.50 4.50 4.00 1.2 设备购置 67.00 32.00 35.00 1.3 安装工程 7.00 3.00 4.00 1.4 建设期利息 0.00 0.00 0.00 1.5 预备费 9.20 3.65 5.55 1.6 其他费用 8.68 3.26 5.42 2 流动资金投资 82.08 40.39 41.69 表5-3:拟定新增设备清单 设备名称 规格 数量(台) 金额(万元) 岛津液相色谱仪 LC-20A 2 50 生物显微镜 BK2000 5 5 电子天平 PL-4002-IC 3 3.5 真空均质乳化机 —— 3 8.5 合计 13 67 9.3还款能力分析 项目投资根据项目进度进行筹措，计划新增投资182.46万元，其中公司自筹资金132.46万元，申请长沙市科技计划资金支持50.00万元，无贷款，不存在还款支出。 10经济、社会效益分析 10.1经济、社会效益分析 1、经济效益分析 本项目主要成本包括技术人员工资、设备购置费、材料费、试制费、测试费、管理费和其他费用。项目执行期内，项目仍处于研发阶段，不会实现收入。预计五年后投入市场，进度安排如下:2015年和2016年进行临床实验研究、注册申报、生产批件等工作，2016年年底开始进行试生产，2017年初开始投产进入市场。本公司主要以技术转让形式获取收益，预计项目投产第一年可获得销售收入1000万左右，公司净利润约120万元;第二年获得销售收入1500万左右，公司净利润约190万元。 2、社会效益分析 (1)提供一种天然淡化黑色素沉着的中药凝胶，可满足长期、安全、高效使用的要求。 本项目研究开发的天然植物提取中药凝胶具有制备工艺简单、成本低、易于控制剂量、使用方便、便于携带的优点，排除了现有淡化黑色素沉着产品存在不安全性的问题，是一种可以长期使用、安全性能高、药效好的新型减少黑色素沉着的外用凝胶，可以满足现有市场对高效的天然酪氨酸酶抑制剂的日益强烈的需求。 (2)促进当地就业 本项目的实施不仅可以给公司带来较好的经济效益，增加当地税务收入，为了本项目的顺利实施，公司还拟定新增人员8人，对促进当地就业有积极的推动作用。 书中横卧着整个过去的灵魂——卡莱尔 人的影响短暂而微弱，书的影响则广泛而深远——普希金 人离开了书，如同离开空气一样不能生活——科洛廖夫 书不仅是生活，而且是现在、过去和未来文化生活的源泉 ——库法耶夫 书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者———史美尔斯 书籍便是这种改造灵魂的工具。人类所需要的，是富有启发性的养料。而阅读，则正是这种养料———雨果