高效液相色谱法测定银杏叶分散片中总黄酮醇苷含量
医药导报2008年7月第 27卷第7期 ·849·
仪,记录色谱 图;另取醋酸地塞米松对照品适量,用 甲醇制成
25 g·mL~,同法测定。按外标法以峰面积计算样品中醋酸地
塞米松(C H FO )的含量。并将测定结果与紫外分光光度
法。’进行比较,结果见表 2。
表 1 回收率实验测定结果 n=9
070514 96.3
070516 97.6
070927 102.2
0.4
0.6
O.4
99.2
99.5
101.1
0.3
0.3
0.4
3 讨论...
医药导报2008年7月第 27卷第7期 ·849·
仪,
色谱 图;另取醋酸地塞米松对照品适量,用 甲醇制成
25 g·mL~,同法测定。按外标法以峰面积计算样品中醋酸地
塞米松(C H FO )的含量。并将测定结果与紫外分光光度
法。’进行比较,结果见表 2。
表 1 回收率实验测定结果 n=9
070514 96.3
070516 97.6
070927 102.2
0.4
0.6
O.4
99.2
99.5
101.1
0.3
0.3
0.4
3 讨论
在本实验条件下,制剂 中另一有效成分樟脑 ,不干扰醋酸
地塞米松的测定,其他辅料在相应位置上也无干扰峰,理论塔
板数按醋酸地塞米松计算为 5 131,分离度为4.57,以上各项指
标均符合《中华人民共和国药典》的有关规定。
对复方醋酸地塞米松搽剂中的主要成分醋酸地塞米松采
用高效液相色谱法进行含量测定 ,经过方法学的评价,证明该
法稳定 、准确、可靠,可用于本制剂 中醋酸地塞米松 的含量测
定。
实验中发现 ,醋酸地塞米松的回收率实验较理想,但样品
测定中发现贮存期样品的高效液相色谱测定结果均低于紫外
分光光度测定结果;实验中还发现贮存期样品的高效液相谱图
(c )中在保留时间4.12 min的位置多出一色谱峰,这是否与制
剂中醋酸地塞米松在贮存过程中已部分分解成地塞米松有
关 J,有待进一步研究。
[参考文献]
[1] 浙江省食品药品监督管理局.浙江省 医疗机构制剂规范[M .
2005:308.
[2] 顾伟鹰 ,张和平,黄伟芬,等.复方醋酸地塞米松搽剂的含量测定
[J].药学实践杂志,2005,23(3):167—169.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[Z].北京:化学工
业出版社,2005:842—843.
[4] 袁建平 .李文德.HPLC法测定眼药水中的地塞米松磷酸钠及分解
产物f J].现代应用药学,1995,12(3):35.
效液相色谱法测定银杏叶分散片中总黄酮醇苷含量
陈桂红 ,钟锐生 ,黄清松
(1.广东省深圳市宝安区西乡人民医院药剂科,518102;2.广东药学院,广州 510006)
[摘 要] 目的 建立高效液相色谱法测定银杏叶分散 片中总黄酮醇苷含量的方法。方法 用十八烷基硅烷键
合硅胶为填充剂;以甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相;流速为 1.0 mL·min~;检测波长 360 nm;柱温 35℃。结果
线性关系良好,加样平均回收率为99.38%,RSD为 0.72%(n=6)。结论 该法操作简便、分离效果好,结果准确、精
密度高、重复性好 ,可作为该制剂的质量控制方法。
[关键词] 银杏叶分散片;总黄酮醇苷;色谱法,高效液相
[中图分类号] R927,2 [文献标识码] A [文章编号] 1004~781(2008)07-0849-02
银杏叶提取物具有活血化瘀、降低血脂、清除自由基、抗衰
老等功效和作用 ;同时还具有改善血液流变学等多种药理作
用 。银杏叶分散片是银杏叶片的剂型改变,其主要活性成
分为总黄酮苷醇和萜类内酯。笔者参照《中华人民共和国药
典12000年版、2002年增补本中“银杏叶提取物”“银杏叶片”质
量
中总黄酮醇苷的含量测定方法 ,建立银杏叶分散片中
总黄酮醇苷的含量测定方法,并进行系统的方法学考察。
1
1.1 仪器 LC一10A型高效液相色谱仪,包括 SPD一10A uV检
[收稿日期] 2007—10—10
[作者简介] 陈桂红(1972一),女,广东人,副主任药师,学士,从
事临床药学工作。电话 :0755—27956255,E-mail:ehghong@yeah.net。
测器,LC一10A色谱工作站(日本岛津公司)。
1.2 试药 银杏叶分散片(湖南华纳大药厂有限公司产品,批
号:030401);对照品槲皮素、山柰素和异 鼠李素(由中国药品生
物制 品检定所提 供,批号 分别 为:10081 905,0816—200002,
110860—200204);甲醇色谱纯、磷酸为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱 条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;Nova—
PakC 8色谱柱(3.9 mm×150 mm,5 g)以甲醇-0.4%磷酸溶液
(50:50)为流动相 ;流速为 1.0 mL·min~;检测波长 360 nm。
2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取经五氧化二磷减压干
燥 24 h的槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品,各加甲醇制成每
1 mL分别含 0、03,0.03,0.02 mg的溶液,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取本品 10片,除去包衣,精密称定。
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· 850· Herald of Medicine Vo1.27 No.7 July 2008
研细,取相当于总黄酮醇苷 19.2 mg的粉末,精密称定 ,精密加
入甲醇20 mL,称定重量,超声处理 20 min,放冷,再称定重量,
用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液 10 mL,置
100 mL锥形瓶中,加甲醇 10 mL、25%盐酸溶液 5 mL,摇匀,置
水浴中加热回流 30 min,迅速冷却至室温 ,转移至 50 mL量瓶
中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 tzm)滤过,取滤
液,即得。
2.4 测定法 分别 精密吸取对照品溶液与供试 品溶液各
10 ,注入液相色谱仪,测定,分别计算槲皮素、山柰素和异鼠
李素的含量,按下式换算成总黄酮醇苷的含量 j。总黄酮醇苷
含量 =(槲皮素含量 +山柰素含量 +异 鼠李素含量)×2.51。
2.5 专属性实验 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各
l0 L,注入液相色谱仪,记录色谱图,各色谱峰相互之问分离
度良好,柱效高。理论板数按槲皮素峰计算为6 744(>2 500),
山柰素与异鼠李素峰的分离度 2.11>1.5。
2.6 阴性干扰实验 按处方 比例称取空 白辅料,照含量测定
项下供试品溶液制备方法,制成空白溶液,取 10 注入液相
色谱仪,记录色谱图。结果表明在所测定的槲皮素、山奈素、异
鼠李素出峰处无干扰吸收峰 ,说 明辅料不干扰含量测定。
2.7 线I『生关系考察 精密称取经五氧化二磷减压干燥 24 h
的槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品适量,加 甲醇分别制成每
1 mL含槲皮素 0.031 mg、山柰素 0.032 mg、异鼠李素 0.022 mg
的对照品溶液。分别取上述照品溶液 4,8,10,12,16,20 ,注
入液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定,以对照品进样量
(rag)为横坐标 ,峰面积为纵坐标,得 回归方程为槲皮素:Y=
1.887×10。X一71 713(r=0、999 6);山奈 素:Y=1.576×
10。x +22 233(r=0、999 7);异 鼠李素:Y=1、304×10。X一
1 843.7(r=0.999 8)。结果表明,槲皮素进样 量在 0.124~
0.620 mg,山柰素进样量在 0.128—0.640 mg,异鼠李素进样量
在0、088—0.440 mg范围内线性关系良好。
2、8 精密度实验 取批号为 030401的同一份供试品溶液,按
含量测定方法,连续测定 6次,分别以槲皮素、山柰素、异 鼠李
素的峰面积进行计算 ,其 RSD分别为0.36%,0.88%,0.87%。
表明本测定方法的精密度较好。
2.9 稳定性 实验 取批号030401的同一份供试品溶液,按含
量测定方法,分别于 0,1,2,4,8 h进样 10 ,记录色谱图,分别
以槲皮素、山柰素、异鼠李素的峰面积进行计算,其 RSD分别为
0.545% ,0.53% ,0.84% ,表明供试品溶液在 8 h内稳定。
2.10 重复性实验 取批号 030401的样品,按含量测定方法 ,
重复测定 6次,分别计算总黄酮醇苷的含量,其 RSD为 0.36%,
表明本测定方法的重复性较好。
2.11 加样回收率实验 取 已测知总黄酮醇苷含量的银杏叶
片样品(批号:030401,含量为每片26.07 mg,平均片重为
0.402 3 g)约 0.2g,精密称定,共取6份,每份分别精密加入对
照 品 甲醇 溶 液 (槲 皮 素 2.625 mg·mL~、山柰 素 1.905
mg·mL~、异鼠李素0.705 mg·mL )1.0 mL,再分别精密加入
甲醇 19 mL,各份均按上述含量测定方法提取、测定。按外标法
以峰面积计算供试品中总黄酮醇苷的含量,计算回收率 ,结果
见表 1。结果表明,银杏叶分散片含量测定方法准确度较高,6
份样品的平均回收率为99.38,RSD为0.72%。
表1 银杏叶分散片总黄酮醇苷加样回收率结果
2.12 样品含量测定 分别取 3批样品,照上述含量测定方法
分别测定并计算槲皮素、山柰素和异 鼠李素的含量,按下式换
算成总黄酮醇苷的含量。总黄酮醇苷含量 =(槲皮素含量 +山
奈素含量 +异 鼠李 素含量 )×2.51。结 果批 号为 030401,
030403和 040305的总黄酮醇苷含量为每片 26、25,25、81和
25.30 mg。
3 讨论
笔者采用 340,360,380 am波长进行过测试 ,其 中360 am
有最大的吸收峰 ,因此采用 360 am波长。笔者在初实验过程
中,分别比较了以下不同的流动相对测定结果的影晌:甲醇一1%
冰醋酸(30:70)、乙腈一1%冰醋酸(40:60)、甲醇一2%冰醋酸
(32:68)、甲醇-0.4%磷 酸溶液 (50:50)、乙腈一3% 冰醋酸
(15:85)、甲醇-0.8%磷酸溶液(15:85)为流动相。结果发
现,甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相时,被测物分离效果
好 ,杂质干扰少 ,故选择其为流动相,且保留时间也适宜。
从以上方法学考察实验结果可知,本总黄酮醇苷的含量测
定方法简单方便,准确,灵敏度 高,重复性好,能够准确测定样
品中总黄酮醇苷的含量。
[参考文献]
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[4] 国家药典委员会.中华-~-tL共和国药典(一部)[Z].北京:化学工
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