【doc】 伤痛宁胶囊质量
研究
伤痛宁胶囊质量标准研究
第21卷第4期湖南中医杂志Vok21
?
72?2005年7月HUNANJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEJul
No.4
20o5
伤痛宁胶囊质量标准研究
湖南国华制药有限公司(410013)肖德华
摘要目的:建立伤痛宁胶囊的质量标准.方法:用TLC法鉴别制剂中的延胡索,香附,山柰,白芷,用HPLC测定制剂中
欧前胡素的含量.结果:在TLC色谱中均能检出延胡索,香附,山柰,白芷;欧前胡素在0.10,0.51g范围内呈良好的线性关
系(r=0.9999),平均回收率为99.67%,RSD=1.54%.结论:所建鉴别方法专属性强,定量方法简便,准确,可用于伤痛宁胶
囊的质量标准控制.
主题词延胡索/分析香附/分析山奈/分析白芷/分析@欧前胡素/分析色谱法,薄层色谱法,高压液相
@伤痛宁
伤痛宁胶囊由延胡索,白芷,山柰,细辛,香附,甘松等药
物组成,具有散瘀止痛之功效,用于跌打损伤,闪腰挫气.为
了有效控制其质量,采用HPLC对白芷进行含量测定,并对
延胡索,香附,山柰,白芷进行薄层定性鉴别,为伤痛宁胶囊
的质量标准提供了定性和定量的检测方法.
1仪器与材料
Waters510高效液相色谱仪;延胡索乙素对照品,Q一香
附酮对照品,对甲氧基桂皮酸乙酯对照品,欧前胡素,异欧
前胡素对照品,欧前胡素对照品(供含量测定用0826—
200206,中国药品生物制品检定所);硅胶G,硅胶GF254(青
岛海洋化工厂生产);伤痛宁胶囊(湖南国华制药有限公司
提供);甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析
纯.
2定性鉴别.】
2.1延胡索的TLC鉴别取本品内容物3g,加乙醚20ml,
浸渍1h,倾去乙醚液,加浓氨试液3ml使湿润,加乙醚20IIll
浸渍3h,滤过,滤液蒸干,残渣加无水乙醇lml使溶解,作为
供试品溶液.另取延胡索乙素对照品,加无水乙醇制成每
1ml中含0.1mg的溶液,作为对照品溶液.再取除延胡索外
的其他处方量药材,按制备工艺制成缺延胡索的阴性样品,
再同法制成阴性溶液.照薄层色谱法(中国药典2000年版
一
部附录?B)试验,吸取上述3种溶液各5,分别点于同
一
硅胶G薄层板上,以苯一丙酮(17:3)为展开剂,展开,取
出,晾干,置碘蒸气中熏至斑点显色清晰,挥去碘后,置紫外
光灯(365nm)下检视.供试品色谱中,在与对照品色谱相应
的位置上,显相同颜色的斑点.而阴性对照溶液在相应的
位置上无此斑点(见图1).
2.2香附的TIE鉴别取本品内容物5g,加石油醚(30,
60?)30ml,超声处理10min,放冷,滤过,滤液挥干,残渣加
醋酸乙酯lml使溶解,作为供试品溶液.另取一香附酮对照
品,加醋酸乙酯制成每lml含5ul的溶液,作为对照品溶液,
再取除香附外的其它处方量药材,按制备工艺制成缺香附
的阴性样品,再同法制成阴性溶液.照薄层色谱法(中国药
典2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各5ul,
分别点于同一硅胶GF薄层板上,以正已烷一醋酸乙酯(17
:3)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检
视.供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同
颜色的斑点.而阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点
(见图2).
2.3山柰的TLC鉴别取本品内容物2g,加石油醚(60,
90?)50ml,超声处理15min,放冷,滤过,滤液浓缩至lml,作
为供试品溶液.另取对甲氧基桂皮酸乙酯对照品,加甲醇制
成每lml含5mg的溶液,作为对照品溶液.再取除山柰外的
其它处方量药材,按制备工艺制成缺山柰的阴性样品,再同
法制成阴性溶液.照薄层色谱法(中国药典2000年版一部
附录?B)试验,吸取上述3种溶液各5ul,分别点于同一硅
胶G薄层板上,以正已烷一醋酸乙酯(8:2)为展开剂,展
开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视.供试品色谱
中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点.而
阴性对照溶液在相应的位置上无此斑点(见图3).
2.4白芷的TLC鉴别取本品内容物5g,加乙醚50ml,浸
渍1h,时时振摇,滤过,滤液挥干,残渣加醋酸乙酯lml使溶
解,作为供试品溶液.另取欧前胡素,异欧前胡素对照品,加
醋酸乙酯制成每lml中各含lmg的溶液,作为对照品溶液.
再取除白芷外的其它处方量药材,按制备工艺制成缺白芷
的阴性的样品,再同法制成阴性溶液.照薄层色谱法(中国
药曲2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述3种溶液各
5”l,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30,60?)一
乙醚(3:2)为展开剂,在25?以下展开,取出,晾干,置紫外
光灯(365nm)下检视.供试晶色谱中,在与对照晶色谱相应
的位置上,显相同颜色的荧光斑点.而阴性对照溶液在相应
的位置上无此斑点(见图4).
第4期肖德华:伤痛宁胶囊质量标准研究?73?
12345
图1延胡索TLC图谱
1一延胡索乙素对照品
2,3,4一供试品
5一阴性对照
12345
图2香附的TLC图谱
1,2,4—供试品
3—Q一香附酮对照品
5一阴性对照
l234512345
图3山柰的TLC图谱图4白芷TIE图谱
1,2,4一供试品1,2,3一供试品
3一对甲氧基桂皮酸乙酸乙酯对照品4一欧前胡索,异欧前胡索对照品
5__阴性对照5__阴性对照
3含量测定
3.1色谱条件Cl8柱(Kron~l150x4.6ram,5um);流动相:甲
醇:水(4o:60);流速:1.0ml/nfin;检测波长248nm;理论塔板数按欧
前胡素计算应不低于20O0.
3.2供试品溶液的制备取本品10粒的内容物,混匀,取约lg,
精密称定,置索氏提取器中,加乙醚提取6h,乙醚液置水浴上蒸
干,残渣加甲醇使溶解,置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,
滤过,取续滤液,即得.
3.3对照品溶液的制备精密称取欧前胡素对照晶5.1ing,置
10Oml容量瓶中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,
置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(每h中含欧前
胡瓤(P_55mg).
3.4阴性对照溶液试验按处方比例和工艺,同法制成全方缺白
芷的阴性对照液,按样品供试液的制备方法制备,测定.结果表
明,在与欧前胡素对照品色谱相应的位置上无干扰峰出现,说明
方中其它成份对测定结果无影响.对照品,供试品和阴性对照品
的HPLC图谱见图5.
12.3
?
图5伤痛宁胶囊HPLC图
1一欧前胡素对照品2一供试品溶液3一缺白芷阴性样品溶液
3.5线陆关系考察精密吸取浓度为0.051ng/ml的欧前胡素
对照品溶液2,4,6,8,10ml,分别置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻
度,摇匀,精密吸取10ul进样,测定其峰面积积分值,以浓度为横坐
标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为:A=
16(I3316.85×C一25O3.69,r=O.9999.结果表明欧前胡素在0.1一
O.51g范围内具有良好的线性关系.
3.6精密度试验精密吸取同—份斌品溶液10ml,按色谱条件
重复进样5次,测定其峰面积,结果RSD为0.43%,表明精密度良
好.
3.7稳幽文验分别精密吸取同—份供试品溶液10ul,于0,3,
6,9,12h进样,测定峰面积,结果RSD为0.59%,表明供试品溶液
在12h内稳定性良好.
3.8重现l生试验取同—批样品(批号为axmzos)5份,按供试
品溶液制备方法平行处理并测定,计算含量,测得平均值为0.
085mg/粒,RSD为1.22%,表明重现性良好.
3.9回收率试验精密称取已知含量为0.2553mg/g(批号
20Q21206)样品0.5g,分别精密加入欧前胡素对照品溶液(0.
0510mg/m1)2.5ml,gpo.1275mg,低温干燥挥去甲醇后,按上述含量
测定项下的方法测定含量,并计算回收率(结果见表1).
表1加样回收率试验结果
注:平均回收率为99.67%,RSD为1.54%
3.10样品的测定取10批样品按含量测定项下方法测定并计
算含量(结果见表2).
表2伤痛宁胶囊中欧前胡素含量测定结果(n=3)
注:平均值o.o~3mr,/粒
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第21卷第4期湖南中医杂志Vo1.21N4
2005年7月
HUNANJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEJu1加晒
桃红四物汤治疗运动损伤性血瘀证机理研究
广少~lhtg学院(510o75)王大安肖雅?周小青?罗尧岳?
摘要目的:探讨挟红四物汤治疗运动损伤性血瘀证机理,观察桃红四物汤对急性缺血组织病理改变及细胞凋亡干预作用.方法:
采用结扎冠状动脉左前降支的方法复制急性组织缺血模型,15条犬随机分为对照组,模型组,挟红四物汤组,每组5务.采用HE染色及
DNA末端标记法(TI1J)分别观r{慰日织病理变化和细胞凋亡的变化.结果:对照纽组织无明显变性与坏死等改变,仅见少量凋亡阳性细
胞;模型纽有明显组织坏死,细胞凋亡增多;桃红四物汤组示细胞坏死及细胞凋亡均较摸型纽显着减轻.结论:桃缸四物汤可有效却制细
胞坏死及凋亡,减轻组织损伤,对缺血纽织有保护作用.
主题词运动损伤/中医药疗法血瘀桃红四物汤/治疗应用
祖国医学认为血瘀证应包括两个方面.—是血不循经,溢出
脉外,不能及时消散的—类瘀血.二是运行于脉中之运行不畅的
瘀血.由此可见目前运动损伤造成的血瘀证均可以用此种理论
加以分析,并且可以以此为据指导治疗.目前,临床上多用桃红
四物汤为基础方进行加减配伍治疗运动损伤性血瘀证,并目取得
了很好的疗效.为了了解桃红四物汤治疗运动损伤性血瘀证的
具体机理,笔者就桃红四物汤对急性gtgn,~织病理改变及细胞凋
亡的干预作用进行了实验研究.
1实验材料
1.1实验运动和药物健康成年杂种犬,体重11-I-3kg,雌雄不
拘;桃红四物汤按文献剂量购买中药材,浸泡,煎煮,浓缩,灭菌,
4~C冷藏保存备用;戊巴比妥钠由上海化学试剂厂进口分装.
1.2实验器材DH一1动物人工呼吸机(型号:DH一1,浙江医科
大学医疗仪器实验厂制造,流量:10ml/kg,呼吸频率20次/分,呼
吸比1:2);1t3双目摄影生物显微镜(麦克奥迪实业集团公司);体
视显微镜图象系统SNZ一143(麦克奥迪实业集团公司);61—1海
鸥照相机(上海光耀电影照相厂);Finesse325(印mShanDon
lirmtedAs嘶吣r.al,llicorn,shI妯,WATIPRIJK);气管插管及相
应的手术器械.
2实验方法
2.1动物模型复制参考文献用戊巴比妥钠(3kg?iv)麻
醉犬,固定,铺巾单,行气管插管并连接动物呼吸机.分离股静脉,
插管予0.9%生理盐水补液.取胸骨正中切口暴露心脏,剪开心
包并缝至胸壁呈摇篮状,于冠状动脉左前降支第二角支处穿线,
对照组仅穿线不结扎,余各组行完全结扎.
2.2动物分组与给药实验分组:先按体重分层,再用随机数字
表达随机分为3组:对照组廷组四物汤组,每组5条.造
模前灌胃给药,每天1次,给药剂量20/kg,连续5天,对照组及
模型组:
蒸t留水;桃红四物汤(含生药14.Og/lO~,,.d).连续灌胃5d,
并于第5d灌胃后2h行完全结扎术,对照组仅穿线不结扎.
2.3心肌组织切片的制备实验结束后处死动物,摘取动物心
脏于4%多聚甲醛中固定,常规石蜡包埋,每隔lmm横断面切
数张4um厚的切片,分别做HE染色及细胞凋亡检测.
2.4心肌细胞凋亡原位标记检测及计算机图象分析每张
切片取3个不同部位的切片各2张,以脱氧核苷酸转移酶
(TdT酶)介导的荧光的dUTP缺口末端标记法(TdT—medi-
atedfluoreseein—dUTPniekendlabeling,TUNEL)标记凋亡细
4讨论
中药复方制剂成分复杂,薄层鉴别是有效的方法,本实
验所得的TIC条件能检出伤痛宁胶囊中所含延胡索,香附,
山柰,白芷;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,
显相同颜色的斑点,而阴性样品无干扰,所建鉴别方法专属
性强.
方中自芷中含香豆精类成分,以欧前胡素含量较高.
据文献报道,欧前胡索的含量测定方法可采用薄层扫描法
及高效液相色谱法【3等,因此采用高效液相色谱法测定本
品中欧前胡素的含量.试验结果表明,缺白芷的阴性溶液
无干扰,且样品分离效果好.测定10批样品中欧前胡素含
量,其平均值为0.0803rag/粒.考虑大生产时的损耗等问
题,现按平均含量的75%折算,暂定本品限度为每粒中含欧
前胡素不得少于0.06rag.
参考文献
[1]中华人民共和国药典2000年版(一部)[s].北京:化学工业
出版社,2O00.23.
[2]吕武清.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京:人民卫生
出版社,1997,202-205,239—240,413.
[3]王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京:中国医
药科技出版社,1994,216—218.
[4]赵陆华.高效液相色谱法分析中药成份手册[M].北京:中国
医药科技出版社,1994,304—308.
(收稿日期:2005一o4—05)
?本课题为教育部青年骨干教师科研基金资助项目(NO.axx~);
?江苏省中西医结合医院;?湖南中医学院.