血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离
太原二十中问题导学案
使用时间: 年 月 日 科 生物 课 题 血红蛋白的提取与分离 目
课 新课 第 1 课时 主备人 黄晓倩 审核人 型
学习 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白
目标 2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 学习 重点 【学习重点】凝胶色谱法的原理和方法 与 【学习难点】样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 难点
学法 指导
【自主学习】 备注 ? 凝胶色谱法(分配色谱法):
1、概念:根据被分离蛋白质的 ,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,来分离...
血红蛋白的提取和分离
太原二十中问题导学案
使用时间: 年 月 日 科 生物 课 题 血红蛋白的提取与分离 目
课 新课 第 1 课时 主备人 黄晓倩 审核人 型
学习 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白
目标 2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 学习 重点 【学习重点】凝胶色谱法的原理和方法 与 【学习难点】样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 难点
学法 指导
【自主学习】 备注 ? 凝胶色谱法(分配色谱法):
1、概念:根据被分离蛋白质的 ,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,来分离蛋白质的有效方法。 2、原理:当不同的蛋白质通过凝胶时,相对
的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程 ,移动速度 ,而 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在 移动,路程 ,移动速度 ,相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3、具体过程:
(1) (2) (3) (4) (5) 相对分子质
量较小的蛋学 粒凝白质 胶 颗
习 相对分子质多 量较大的蛋孔白质 板
A 过
B
A. 的蛋白质由于 作用进入凝胶程
颗粒内部而被滞留; 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面,在了里之间迅速通过。
B.(1) 混合物上柱;
(2)洗脱开始, 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内; 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外;
(3) 的蛋白质被滞留;
的蛋白质被向下移动。
(4) 不同的蛋白质分子完全分开; (5) 的蛋白质行程较短,已从 中洗脱出来, 的蛋白质还在行进中。
【合作探究】(小组讨论、交流、展示) 备注
思考1:分离生物大分子的基本思路是什么,
思考2:蛋白质的分离和提取的原理是什么,
思考3: 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用,作
用结果是什么被破坏,
思考4:人们用鸡的红细胞提取DNA,用人的红细胞提取血红
蛋白的原因是什么,
学
习
过 【答疑解惑】
在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么,它的目的是什
么,
程 使用的是磷酸缓冲液,目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环
境,保证血红蛋白的正常结构和功能,便于观察(红色)和材
料的科学研究(活性)
如何测定蛋白质的分子量,
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量时,可选
用一组已知分子量的
蛋白同时进行电泳,根据已知分子量
的标准蛋白的电泳区带位置,用电泳迁移率和分子量的对数作
标准曲线,可以测定未知蛋白质的分子量。
【梳理巩固】 备注
例1:凝胶色谱法是根据( )分离蛋白质的有效方法。
A(分子的大小 B(相对分子质量的大小
C(带电荷的多少 D(溶解度
例2:缓冲液的作用是:在一定范围内,抵制外界的影响来维
持( )基本不变。
A(温度 B(pH C(渗透压 D(氧气浓度
例3:电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷
( )的电极移动。
A(相同 B(相反 C(相对 D(相向
例4:哺乳动物和人的成熟的红细胞中的( )与氧气的运输
有关。
A(血红蛋白
B(肌红蛋白
学 C(肌动蛋白
D(肌球蛋白
例5:血液由血浆和各种血细胞组成,其中( )的含量最多。 习 A(白细胞 B(血小板 C(红细胞 D(淋巴细胞
例6:为防止血液凝固,在采血容器中要预先加入抗凝血剂
( )
过 A(NaCl B(甲苯 C(蒸馏水 D(柠檬酸钠
例7:将搅拌好的混合液转移到离心管中,离心后,可以明显
看到试管中的溶液分为4层,其中第3层是( ) 程 A(无色透明的甲苯层 B(脂溶性物质的沉淀层 C(血红蛋
白的水溶液 D(其他杂质的暗红色沉淀物 例8:利用凝胶色
谱法分离蛋白质,最先洗脱的蛋白质特点是( )
A(相对分子质量大的
B(溶解度高的
C(相对分子质量小的
D(所带电荷多的
例9:凝胶色谱法中所用的凝胶化学本质大多是( )
A(糖类化合物 B(脂质 C(蛋白质 D(核酸
【达标检测】 备注 1.用凝胶色谱法分离蛋白质时,分子量大的蛋白质 ( ) A(路程较长,移动速度较慢
B(路程较长,移动速度较快
C(路程较短,移动速度较慢
D(路程较短,移动速度较快
2.蛋白质提取和分离分为哪几步 ( )
A(样品处理、凝胶色谱操作、SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳
B(样品处理、凝胶色谱操作、纯化
C样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定
D(样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定
3. 在血红蛋白的整个提取过程中,不断用磷酸缓冲液处理的目的是 ( )
A(磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程
学 B(血红蛋白是一种两性物质,需要酸中和
C(防止血红蛋白被0氧化 2
D(让血红蛋白处在稳定的pH范围内,维持其结构和功能 4(在盛有红褐色的Fe(OH)3,胶体的U形管的两个管口,各插习
一个电极,通直流电后,发现阴极附近的颜色逐渐加深,这说
明 ( )
过 A(Fe(OH)胶体粒子带正电荷,向阴极移动 3
B(Fe(OH)胶体粒子带负电荷,向阳极移动 3
C(Fe(OH)胶体粒子带正电荷,向阳极移动 3
D(Fe(OH)胶体粒子带负电荷,向阴极移动 程 3
5.样品的加入和洗脱的操作不正确的是( ) A. 加样前,打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面
B. 加样后,打开下端出口,使样品渗入凝胶床内 C. 等样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口
D. 用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端,不要破坏凝胶面
【作业布置】 备注
1 利用凝胶色谱法,什么样的蛋白质先洗脱出来( )
A. 相对分子质量大的 B. 溶解度高的
C. 相对分子量小的 D. 所代电荷多的
2 蛋白质提取和分离分为哪几步( )
A. 样品处理、凝胶色谱操作、SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳 学习 B. 样品处理、凝胶色谱操作、纯化
过程 C. 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D. 样品处理、纯化、
粗分离、纯度鉴定
3用凝胶色谱法分离蛋白质时,分子量大的蛋白质( )
A路程较长,移动速度较慢
B路程较长,移动速度较快
C路程较短,移动速度较慢
D路程较短,移动速度较快
板书 设计
本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离,使学生能够体验从复课后 杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法,并了解色谱法、电泳法等反思 分离生物大分子的基本原理,为今后学习运用这些技术打下基础。
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