日本血吸虫感染大鼠血清特异性IgG及IgG2aIgG2c同？…

日本血吸虫感染大鼠血清特异性IgG及IgG2aIgG2c同？… 日本血吸虫感染大鼠血清特异性IgG及 IgG2aIgG2c同,… 弹S一/.70 ? 148? 日本血吸虫感染大鼠血清特异性IgG 及IgG2aIgG2c同型水平的动态观察 鱼蝣'堕吴宜琴张耀娟.章子豪. R?l' 【摘要】目的观察日本血吸虫感染大鼠血清中虫卵和成虫特异性抗体同型 IgG,lgG2a,IgG2c 的动态变化.方法ELISA结果三种特异性抗体同型均有明显升高,且变化趋势基本 一致.于 感染后第3,8周升高,约在12周达高峰并维持至观察结束的第14周.结论提示 IgG2a,lgG2c 在日本血吸虫感染的免疫中可能具有一定的作用. 【关键词】主大鼠堡堡旦型旦旦塾' STUDIESONTHEDYNAM1CCHANGESINSPECIFICANTIBODIESISOTYPES 0FlgGlgG2algG2cINSERAFROMRATSINFECTEDWITHSCH1STOSOMAJAPONICUM Xiaoceng,??Guanling,WuYiqin,Zha~gYa??,ZhangZihao1Department.,f— ufarGenetics,GeneticsInstituteofChineseAcodemySciencestBeOing100101}2Departm entnr尸r- asitology?NangMedicalUniversity 【ABSTRACT]ObjeetiveToobservethedynamicchangesofspecificIgG,IgG2aandlgG2c againsttheeggandtheadultofSchistosomajaponicum()inse『afromratsinfectedwith MethodELISA.ResultsThethreespecificantibodiesisotypesininfectedratsincreasedandt heir changedtendencyweresimilar.whichbegantosharplyriseatthe3th,8thweekafterinfection. reachedthepeakaboutthe12thweekandatleastmaintainedhighpeakuptothe14thweekwhe n theobservationWasstopped.ConclusionThespecificlgG2aandIgG2cmayplayanimportan trole inimmunityofinfection. [Keywords]Schistosomajaponicum,Rat,Antibodiesisotype,IgG,IgG2a,IgG2c 在多种综合防治措施仍难以彻底控制血吸虫病 传播及流行的情况下,用基因工程技术研制血吸虫 疫苗正得到优先考虑和发展.疫苗研制的基础除 寻找有效的保护性抗原分子以外,宿主获得性免疫 机制的研究也是一个重要的方面.大鼠虽然是血吸 虫的非适宜宿主,但曼氏血吸虫(Sin)感染大鼠模型 的研究却给我们很多有益的提示,在Sm感染大鼠 中现出与人体感染血吸虫相同的三大免疫学特 征:高水平的特异性IgE,血液和组织中嗜酸性粒细 胞的明显增多及对血吸虫童虫具有ADCC作用J. 因此用大鼠作为血吸虫感染后获得性免疫机制的研 究模型正越来越受到人们关注.然而,大鼠感染日本 血吸虫(sj)的免疫学特征尚少见报道.本研究旨在 观察大鼠感染日本血吸虫后其血清中特异性IgG及 IgG2a,IgG2c抗体同型的动态变化,研究其免疫学 * 奉研究获总理专项基金资助(94一Y-09) 作者单位:1中国科学院遗传研究所(北京100101),注t奉研究在南 京医科大学寄生虫学教研室完成2南京医科大学寄生虫学教研室 特征. 材料和方法 2000年第12卷第3 1材料及主要试剂 感染阳性钉螺购自江苏省血吸虫病防治研 究所钉螺室,SD大鼠及家兔购自南京医科大学动物 中心,SD大鼠选雌性,15o,200g.辣根过氧化物酶 (HRP)标记抗大鼠IgG的多克隆抗体购自美国Ca1. Biochem公司,HRP标记抗大鼠IgG2a,IgG2c单克 隆抗体购自英国Serotec公司.虫卵可溶性抗原 (SEA)及成虫粗抗原(SWA)由江苏省血吸虫病防 治研究所检测中心惠赠. 2大鼠感染及血清样品采集 按常规法自阳性钉螺逸出尾蚴,大鼠经乙醚麻 醉后用钻肤法感染尾蚴,(bOO士10)条/鼠,共感染 35只大鼠,同时设立未感染对照组,共2O只大鼠. 从感染第1周开始,每周定时用毛细玻璃管自大鼠 眼内眦窦采血1.0ml,分离血清,冻存于一70c备 用,共采血l4周.此外,于感染后第3天,第14天, 中国血吸虫病防治杂志2000年第12卷第3期 第98天分别用肺灌注法,门静脉灌注法及组织压片 镜检法检查大鼠肺组织,肠系膜静脉及肝组织的感 染情况. 3ELISA 采用问接法,用棋雄滴定法确定擐佳抗原包被 浓度,4'C包被过夜;用脱脂奶粉封闭,37c2hi加经 稀释后的大鼠血清,37c1h;再加HRP标记的二 抗,37C1h;最后用二甲亚枫配制01mg/ml的 TMB(3,3',5,5'一四甲基联苯胺)进行显色反应, 37C30min;2MH2SO终止反应,酶标仪上读取 OD值每步反应后均用PBS—tween(pH7.4)清洗3 次,每次3min.lgG的检测条件,SEA,SWA包被浓 度分别为40g/孔和30txg/孔,血清稀释度为1 100酶标二抗分别为1:2060和1:3000稀释; IgGga的检测条件,2种抗原包被浓度均为40ug/ 孔,血清稀释度分别为1:40和180,酶标二抗为 1,800稀释;IgG2c的检测条件,抗原包被均为2o gg/'孔,血清1:100稀释,酶标二抗1500稀释每 个血清样品均检测2次,取均数,未感染对照组血清 样品同等条件检测. 4数据处理 计算感染组与未感染组每周血清抗体OD值的 均数(x)和差(s)t用Slide软件作动态变化曲线 图. 结果 1大鼠感染状况 于感染后第3天的肺组织中查见童虫,短柱状 或椭圆形泡状,无色,半透明;感染后14d在肝组织 中查见童虫,口,腹吸盘明显,腹吸盘后部虫体伸长, 肠管分支已出现融合;采血完成后解剖大鼠,做肝组 织压片?所有感染大鼠肝组织中均查见虫卵,以 未成熟卵和坏死的黑卵为主,每克肝组织的虫卵数 平均为1393.46个. 2SEA,SWA特异性抗体同型IgG[gG2a,IgGge 的检测(见图1.2.3.) 与未感染对照组相比较,3种特异性抗体同型 对SEA,SWA均有很高的敏感性,它们的动态变化 基本一致,于感染后第3周至第8周明显升高,约在 12周达高峰,然后维持到观察结束时的第14周 ; 苫 0 g 8 周WOek-i"-- SE c A--~--SEA,SWA 图1日本血吸虫感染大鼠血清中特异性lgG水平的 动态变化 Fig-1DynamicchangeofthespecificlgGlevelinthesera ofratsinfectedwilhSc^f0口ponicum …A+SEAmSVCA—S,v^ IiNINFECINFECTUINFECINFECT 图2日本血吸虫感染大鼠血清中特异性lgG2a水平 的动态变化 Fig2DynamicchangeofthespecificlgG?alevelin theseraofratsinfectedwithSchislo~omal,aponlcum 呈 g 雪 国3日本血吸虫感染大鼠血清中特异性IgG2c水平 的动态变化 Fig-3DynamicchangeofthespecificlgG2clevelin theseraofratsinfectedwithSchistosoma,iaponicum 讨论 本研究用感染SD大鼠获得成功,于感染第 3天,14天分别在肺和肝组织中查见童虫,虫体形态 与何毅勋对同期虫体的描述一致.采血结束后在大 鼠肝组织中查见虫卵,但肝组织表面罕见虫卵结节, 平均每克肝组织虫卵数(1393.46)明显低于适宜宿 主小鼠中的虫卵数,提示在大鼠体内发育成熟的 比例很低,这与何毅勋的研究结果相符J,再次表明 大鼠是感染的非适宜宿主. 研究表明,大鼠感染Sm后介导ADCC效应抗 体是IgG2a与IgE,并且存在一个时相过程,在感染 后4,6周,IgG2a是最有效的抗体同型,感染第8 周后,IgE成为更有效的抗体,在缺乏免疫力的间歇 期(第6,8周),存在有高水平的IgG2c.特异性 IgG2a能够活化嗜酸性粒细胞对童虫的杀伤作用 大鼠特异性IgG2a单克隆抗体可触发未感染大鼠的 嗜酸性粒细胞在体外杀死童虫,并且可在体内被动 转移保护力等研究结果均可对IgG2a的功效加以佐 证而另一种大鼠的特异性单克隆抗体IgG2c对Sm 童虫表面抗原的特异性与IgG2a相同,但它既可抑 制IgG2a在体外介导嗜酸性粒细胞介导的杀虫作 用,又可抑制IgG2a在体内被动i户力的转移,提示 特异性IgG2c在Sm感染免疫中起着一种阻断抗体 的作用..由此可见在Sm感染的免疫反应中, IgG2a,IgG2c的存在直接关系到宿主的免疫状态 已有流行病学研究显示感染后的获得性免疫与 Sm存在明显不同,因此大鼠模型中的免疫学特 征与Sm大鼠模型是否一致尚有待研究感染的 中国血吸虫病防治杂志2000年第12卷第3期 动物模型主要是小鼠和家兔,已有资料显示,在 感染后抗体IgG和IgM的水平明显升高,IgM似乎 可明显地干扰IgG在体内外对童虫的ADCC效 应,但未见有关IgG2a和IgG2c的报道本研究结 果显示,在sj感染大鼠中虫卵及成虫特异性IgG2a 和IgG2c均有明显升高,其动态变化与总IgG完全 一 致,提示在sj感染的免疫中,IgG2a和IgG2c可能 具有一定的作用.但它们的作用性质则有待通过体 外的ADCC试验或体内的被动转移试验加以确定. 注:本研究得到江苏省血吸虫病防治研究所检梗I中心全体同志的帮 助,谨此致谢j 参考文献 1毛守白血吸虫疫苗的前景中国血吸虫病防治杂志1991,3(3); 129 2CapronA,DessaintJP,CapronM,etal,Schistosomiasis:from effectmandregu[atloamechanismsinrodentst0vaccinestrategies Lnh….Immuno[Invest.I?2,2l(5)419 3毛守白主编.血吸虫生物学与血吸虫病的防治北京:人民卫生出 版杜,137,l95 4ButterworthAE,D…DW,FuffordAJC,eta1.H…nLmmun[. ytOSchismsomama~oni:observa~ions0nmechanismsandimpti— CationSforcontrolImmuao[Invest1992,12(5):391 5CapronA,Dessain~JP,CapronM,eta1.ImmunitytOschisto somes:Pmgresstoward…cine.Sciences,1987:?8(Z0):1065 6吴志良一阵茂粱,叶爱民日本血吸虫感染后1日G和IgM抗体反应 动态观察,中国血吸虫病防治杂志,19946(1):2O l9鲫一()5一l8收稿1999—10-10修回 (蝙辑:昔一】 环卵沉淀试验(COPT)溶血标本检测方法探讨 郭向东 在环卵沉淀试验(COPT)中,溶血 标本对结果的判断有较大影响,为探讨 改进的方法,我们作了下述实验. 1994年至今对56份溶血标本按 作者单位安救省无为县血防医院(无为 23g300) 1t2用生理盐水稀释,其它操作方法同 常规玻片法.72h后显微镜下观察,可 见清晰的结果,即虫卵周围有沉淀物为 阳性,反之为阴性56份溶血标本中15 份为阳性我们对这1份阳性结果的患 者重新采血(标本不溶血),同样做玻片 法COPT,结果完全相符. 稀释法检测溶血标本COPT的优 点是准确率高,且不需对溶血标本的患 者重新采血. 1蛐90O1收辅 (蝽辑:昔一心)