筋骨草抗炎有效部位及其量效关系研究

筋骨草抗炎有效部位及其量效关系研究 筋骨草抗炎有效部位及其量效关系研究 福建中医学院2009年12月第l9卷第6期 JournalofFujianUniversityof"TCMDecember2009,19(6)27 筋骨草抗炎有效部位及其量效关系研究 陈芳,李孝栋,吴符火 (福建中医学院药学系,福建福州350108) 摘要:目的研究筋骨草抗炎有效部位及其量效关系.选用水煎法将获得的筋骨草 水煎液经大孔树脂吸附后依次用蒸馏水和乙醇分别洗脱,观察水煎液和醇洗液浓缩后的筋骨草提取 物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀和琼脂皮下注射形成肉芽肿2种致炎模型的影响,初步明确筋骨草抗炎 有效部位,并对该有效部分进行量效关系的评定.结果筋骨草水煎液和筋骨草醇洗液均有抗炎 作用,其中醇洗液更佳,有明显量效关系.结论筋骨草醇洗液为筋骨草抗炎的主要活性部位.剂 量在3,12g?kg之间有明显的量效关系 关键词:筋骨草;抗炎;有效部分;量效关系 中图分类号:R285.5文献标识码:B文章编号:1004—5627(2009)06—0027—03 筋骨草为唇形科植物金疮小草(Ajugadecum. hensThunb)全草,具有止咳化痰,清热凉血,解毒 消肿的功效,民间用于治疗上呼吸道感染引起的 急慢性咽炎,支气管炎,扁桃体炎,肺炎,疔疮,跌 打损伤等?F].其化学成分有二萜,环烯醚萜,植物 甾酮,黄酮等.药理研究筋骨草具有抗菌,抗病毒, 保肝,抗肿瘤等作用[2-3].本实验观察筋骨草水煎 液及水煎液经大孑L树脂吸附后依次用蒸馏水和乙 醇分别洗脱后的水洗液和醇洗液对小鼠致炎模型 的影响,筛选其抗炎的有效部位并初步确定其量 效关系. 1材料 1.1药品与试剂筋骨草:购买于福州药材站; 醋酸泼尼松:天津药业新郑股份有限公司,批号 050907.大孔树脂AB一8型购于南京大学化工厂 (弱极性,比面积480—520m/g,平均孔径 130,140nm,孑L容0.73—0.77mL/g);二甲苯,上 海试剂三厂,批号:001013;琼脂,乙醇均为市售分 析纯. 1.2筋骨草有效部位提取筋骨草剪碎加水浸 泡30rain后用l0倍,10倍,8倍量水分别煎煮1 h后过滤,3次滤液合并浓缩得到筋骨草水煎液; 将水煎液用大孑L树脂吸附16h后,先用蒸馏水洗 脱至无色.得到筋骨草水洗液;再用50%,70%, 90%乙醇洗脱至无色.回收乙醇得到筋骨草醇洗 液 1.3动物健康雄性昆明种小鼠,体重25?2g, 福建中医学院实验动物中心提供,合格证:医动 字第23一oo8号. 1.4仪器BS210S电子天平,北京赛多利斯天平 有限公司;真空旋转蒸发器,上海亚荣生化仪器 厂.直径6mm打孑L器. 2方法 2.1筋骨草抗炎有效部分的筛选 2.1.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响小鼠 30只,雄性,随机分5组,每组6只.?饮用水组 20mL?kg,;?泼尼松组30mg?kg,;?筋骨草水 煎液组6g?kg,;?筋骨草水洗液组6g?kg,;? 筋骨草醇洗液组6g?kg,,分别灌胃给药,连续3 d.末次给药1h后,小鼠右耳前后两面涂二甲苯, 每鼠0.1mL,左耳作对照.15min后处死动物.用 6mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片,用 电子天平称重.右耳减去左耳重量之差为肿胀度, 并按下式计算各组肿胀抑制率. 肿胀抑制率(%)= 堕×100% 对照组肿胀度'' 2.1.2对小鼠肉芽肿形成的影响(琼脂皮下注射 法)[33小鼠30只,雄性.分组及给药剂量同2.1.1. 在小鼠腹股沟处无菌快速注射2%琼脂0.2mL造 收稿日期:2009—05—23 基金项目:陈可冀中西医结合基金项目(CKJ2007026) 作者简介:陈芳(1972一),女,硕士研究生,主要从事中药药理研究. 通讯作者:吴符火(1952一),男,教授,硕士生导师.E—mail:wufuhuo@163.eom 28福建中医学院第19卷 模,从造模当日开始,分别灌胃给药,连续15d,第 16d处死动物.仔细剥离并取出各组动物的琼脂 肉芽组织,电子天平称重,按下式计算肉芽肿抑制 率: 抑制率(%)= (对照组肉芽肿质量一给药组肉芽肿质量) 对照组肉芽肿质罩 ×100% 2.2筋骨草抗炎有效部位的量效关系在初步 明确筋骨草抗炎有效部分为水煎溶液和醇洗液, 而醇洗液比水煎溶液强,我们对醇洗液进行了量 效关系实验. 2_2.1筋骨草醇洗液对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的 量效关系小鼠70只,雄性,随机分7组.?饮 用水组,20mL?kg,;?泼尼松组,30mg?kg,;? 筋骨草醇洗液设:12g?kg一,6g?kg,,3g?kg一,1.5 g?kg,,0.75g?kg共5组,造模及测定方法同 2.1.1. 2_2.2筋骨草醇洗液对小鼠肉芽肿形成的量效关 ,雄性,随机分 系(琼脂皮下注射法)小鼠70只 7组.分组及给药剂量同2.2.1,造模及测定方法同 2.1.2. 2.3统计学处理用SPSS12.0统计软件进行处 理.所有结果用数据用孟表示.各组间数据比较 采用t检验分析. 3结果 结果见表1,表4. 表1筋骨草提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的作用(n=6) 注:与饮用水组比较,1)P<0.05,2)P<0.001 表2筋骨草提取物对小鼠肉芽肿形成的影响cn=6) 组别剂量/g?kg一.肉芽肿质量/g抑制率/% 注:与饮用水组比较,1)P<0.叭,2)P<0.001 4讨论 筋骨草性苦,寒,苦能燥湿解毒,寒能清热泻 表3筋骨草醇洗液对二甲苯致小鼠耳廓 肿胀的量效关系(I1=10) 注:与饮用水组比较,1)P<0.01,2)尸<0.001 表4筋骨草醇洗液对对小鼠肉芽肿形成 的量效关系(n=10) 组别剂量/g?kg肉芽肿质量/mg抑制率/% 注:与饮用水组比较,1)P<0.01,2)P<0.001 火.民问用于治疗上呼吸道感染引起的急慢性咽 炎,支气管炎,扁桃体炎,肺炎,疔疮,跌打损伤等 有良好疗效,筋骨草对急,慢性炎症有明显抗 炎作用.为证实筋骨草的抗炎作用和有效部位,本 实验对筋骨草的水煎液及水煎液经大孔树脂吸附 洗脱的水洗液和醇洗液进行小鼠急,慢性炎症模 型的抗炎试验.结果显示.筋骨草醇洗液对二甲苯 致小鼠耳壳肿胀及对琼脂肉芽肿均有明显的抑制 作用,剂量在3,12g/kg之间呈明显量效关系. 上述抗炎实验证实筋骨草醇洗液对急性,慢 性炎症具有很好的抗炎作用.为筋骨草开发应用 的定位和进一步研究其抗炎作用的有效成分及其 作用机制打下基础. 参考文献: [1]刘斌,石任兵,葛小侠,等.筋骨草属植物化学成分与药理活 性[J].国外医药?植物药分册,2OOl,16(3):96—98. [2]马志平,黄榕.筋骨草有效部位黄酮类粗品的保肝试验[J]. 海峡药学,2002,14(5):40—41. [3]曾茂贵,贾铷,吴符火.筋骨草对小鼠S180肉瘤的抑癌试验 [J].福建中医学院,2003,13(2):30—31. [4]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].2版.北京:人 民卫生出版社,1994:719. [5j陈奇.中药药理实验方法学[M].北京:人民卫生m版社, 1994:377. 第6期陈芳等:筋骨草抗炎有效部位及其量效关系研究29 AjugaDecumbensThunbanditsdose--effectrelation CHENFang,LIXiao-dong,WUFu-huo (DepartmentofPharmacy,FUTCM,Fuzhou,Fujian350108,China) ABSTRACT:ObjectivesTostudyontheanti-inflammatoryactivepartofAjugadecumbens Thunb anditsdose—effectrelation.MethodsUsitlgwater— decoctedmethod.thedecoctionofAjugadecumbens Thanbwasobtained.ThecompositionofAjugadecumbensThunbabsorbedbymacroporousresininacolumn wereelutedwithdistilledwaterandethanolrespectively.Aftertheeffectsofcondensedextractionsfromthe decoctionandmacroporousethanolelutionontwoinflammatorymodels,suchastheswellingoftheearflapsof miceinducedbyxyleneandthegranulomainducedbyagarwheninjectingitintoabdominalcavityofmice wereobserved,activepartofAjugadecumbensThunbwasprimarilydeterminedanditsdose—effectrelation wasevaluated.ResultsBoththedecoctionofAjugadecumbensThunbanditsmacroporousethanolelution hadaanti—inflammationeffect,butthelatterwasstrongerandshowedaobviousdose— effectrelation.Con- clusionThemacroporousethanolelutionofAjugadecumbensThunbisthemainanti—— inflammatoryactive part.Thedosebetween3g/kgand12g/kghadaexcellentdose—effectrelation. KEYWORDS:AjugadecumbensThunb;anti-inflammationactivepart;dose—— effectrelation (上接第26页) …】…】…】…】…】… 表3破壁率的方差分析 蜂花粉破壁率为97.4%(RSD=1.04%). 3讨论 在小试实验中.我们筛选出了影响蜂花粉破 壁率的因素.包括花粉酶解破壁最佳的酶的组成 及用量,酶解温度,酶解pH等;在中试生产中我 们改用搅拌转速可调的酶介罐进行酶解,在小试 基础上再次考察了破壁所需的时间,加水量以及 酶介罐的搅拌转速.正交实验的结果说明,中试中 在酶解时间达到5h后,时间的延长已对酶解无 显着性的意义;而加水量对破壁率也无显着性影 响:但酶介罐的搅拌转速则对破壁有积极的影响, 随着搅拌转速的提高破壁率显着提高,表明在酶 解破壁中搅拌可加速酶解进程,提高酶解效率. 参考文献: [1]唐维,张星海.花粉破壁方法的研究进展[J].食品与发酵工 业,2003,29(2):86—92. [2]杨义雄,王宫.多酶体破壁提取蜂花粉中活性蛋白的T艺研 究『J].福建中医学院,2009,19(3):24—26.