HPLC法测定海狗三鞭丸中淫羊藿苷含量

HPLC法测定海狗三鞭丸中淫羊藿苷含量 ? 36? HPLC 医药201041~4月第5卷第12期ChinaPracMed,Aor2010.v01.5.No.12 法测定海狗三鞭丸中淫羊藿苷含量 梁钰华郭雪婷 【摘要】目的建立海狗三鞭丸中淫羊藿苷含量测定方法.方法采用HPLC法进行测定研究, 色谱条件:采用AgilentHypersilC18(250rainx4.6mm,5txm)柱,以乙睛-水液(25:75)为流动相,检测波 长270nm,流速1.0ml/min.结果HPLC法测定结果显示,色谱峰形好,分离度好,杂质无干扰,淫羊藿 苷在0.200—2.00g内呈现良好的线性关系,平均加样回收率为98.16%(RSD:1.12%),回归方程为 Y=2083.1X+12.775,r=0.9998.结论该方法分离度高,专属性强,重现好,可有效用于海狗三鞭丸中 淫羊藿苷的含量测定. 【关键词】海狗三鞭丸;淫羊藿苷;高效液相色谱法;含量 DeterminationofIcariininHaigouSanbianPillbyHPLCLIANGYu—hua,GUOXue—ting.CentralHospital ofPanyuDistrict,Guat~gdong,Guangzhou511400,China 【Abstract】0bjectiveToestablishamethodtodeterminethecontentoficariininhaigousanbianpil1. MethodsTheHPLCwasappliedwiththeconditionasfollows:column:AgilentHypersilC18 (4.6mmx250 mm,5txm);mobilephase:ACN— water(25:75);detectionwavelength:270nm;flowspeed:1.0ml/min.Results TheHPLCanalysisresultsshowedthaticariinhadagoodpeakprofileandseparatingdegreew ithoutimpuri— ties.ThecalibrationCHIVesforicariinwaslinearwithintherangeof0.200— 2.00gwithitsaveragesample addingrateofrecovery98.16%(RSD=1.12%).TheregressionequationwasY=2083.1x+12 .775,r= 0.9998.ConclusionThemethodhasagoodresolution,strongspecificityandgoodreproducib ilityfordetermi— ningandcanbeusedtocontrolthecontentofieariininhaigousanbianpil1. 【Keywords】HaigouSanbianPill;Ieariin;HPLC;Content 海狗三鞭丸由海狗鞭,北鹿鞭,山羊鞭,淫羊藿,巴戟天, 枸杞子等二十多味药材经现代科技精制提炼而成,具有补肾 壮阳,强筋健骨,益精补血等作用,用于肾阳虚引起的腰膝酸 软,神疲乏力,肢体困倦,怕冷,夜尿频多,气短作喘;对肾气虚 弱,阳痿早泄,性欲衰退有改善作用.淫羊藿为其方中君药之 一 ,其所含主要有效成分为淫羊藿苷(Icariin),目前尚未 建立海狗三鞭丸中淫羊藿苷的含量测定方法.为了更好的控 制该产品质量,保证用药的有效稳定可控,本文采用高效液相 色谱技术建立淫羊藿苷的含量测定方法,有利于该产品的质 量评价.结果表明,该方法具有测定快速,准确,重现性好等 特点,可用于该制剂淫羊藿苷的含量测定. 1仪器与试药 Agilentl100高压液相色谱仪系列(美国),Sartorius BP211D电子分析天平(德国),电热恒温水浴锅(北京市医疗 作者单位:511400广东省广州市番禺区中心医院(梁钰华);广 州市番禺区榄核镇医院(郭雪婷) 设备厂),超声清洗器(北京医疗设备二厂),淫羊藿苷对照品 (中国药品生物制品检定所110737.200312),乙腈为色谱纯, 甲醇等其它试剂均为分析纯,水为三蒸水. 2方法与结果 2.1色谱条件固定相:AgilentHypersilCl8(4.6mm250 mm,5m);流动相:乙睛一水(25:75);检测波长为270nm.流 速为1.0ml/min.运行时问2Omin. 2.2试验样品的制备 2.2.1对照品溶液的制备取对照品淫羊藿苷适量,精密称 定,置10ml容量瓶中,加甲醇超声溶解后,再用甲醇稀释至 刻度,摇匀,即得(每lm1中含淫羊藿苷200I&g).测定前用 微孔滤膜滤过,取续滤液备用. 2.2.2供试品溶液制备取本品适量,碾碎,取2.5g,精密 称定,置具塞量瓶中,加甲醇2Oml,称重,加塞,超声提取45 min(时时振摇),取出,放冷,称重,补足损失部分,摇匀,微孔 滤膜滤过,取续滤液,即得. 手术刺激对血流动力学的影响,不但提供了完善的镇痛,肌松 作用,而且诱导期,拔管期呼吸循环稳定,术后烦躁反应发生 率降低,且全麻用药量小,术后并发症少,是老年人腹腔镜胆 囊切除术较适宜的麻醉方法. 参考文献 [1]杨川,张友才,陈茜,等.高龄患者腹腔镜胆囊切除术不同麻醉 方法的比较.四川医学,2009,30(I):55-57. [2]唐方伟.全身麻醉与复合硬膜外麻醉在腹腔镜胆囊切除术中的 临床观察.重庆医学,2008,27(17):1936—1937. [3]李晓红,张国庆,孙成英,等.全麻或全麻联合硬膜外麻醉下腹 腔镜胆囊切除术患者心率变异性及血液动力学的变化.中华麻 醉学杂志,2006,26(1):89-90. 『4]梁立升,王郜,姜秀良两种麻醉方法用于老年人腹腔镜胆囊切 除术维持期间血流动力学的变化.临床麻醉学杂志,2007,3 (23):206-208. 『5]庄心良,曾因明,程伯銮.现代麻醉学.人民卫生出版社,2003: 1361.1363. [6]王振华.腹腔镜胆囊切除术中不同麻醉方法对应激反应的影 响.临床麻醉学杂志,2006,22(12):922-923. 『7]李圣平,邹叶宏,甘孝红.全麻复合硬膜外麻醉在老年人腹腔镜 胆囊手术中的应用.华中医学杂志,2007,31(2):88?89. 2010年4月第5卷第l2期ChinaPracMed,Apr2010,Vol5NQ.1 2.2.3阴性样品制备去除淫羊藿药材,按处方用量和制备 方法制备成缺淫羊藿阴性样品,称取该样品适量,按供试品制 备方法制备成缺淫羊藿阴性对照溶液. 2.3系统适应性试验分别精密吸取2.2.1,2.2.2,2.2.3 项下溶液,按2.1项下色谱条件进样,色谱图(见图1). 由图1可见,在该色谱条件下,淫羊藿苷与其它成分可达基线 ? 37? 分离,阴性对照图谱中在对照品色谱峰位置上未见其它成分 对测定有干扰.其中淫羊藿苷色谱峰的保留时间约为13.2 rain,理论塔板数达到2500以上,与其它成分的分离度均> 1.5,对照品色谱峰与供试品色谱中相对应色谱峰的紫外光谱 吸收均一致,表明在上述色谱条件下对淫羊藿苷具有良好的 分离效果. 一…,一 ' . #. 图1海狗三鞭丸HPLC图谱 A对照品B供试品C阴性样品 2.4方法学验证苷峰面积平均值为1180.55,RSD为0.50%(n=6),表明样 2.4.I曲线的建立本研究采用外标法进行测定.分品在室温下放置28h内稳定. 别精密吸取对照品溶液1,2,5,8,10txl注入高效液相色谱2.4.4重复性试验称取同一批样品,碾碎,精密称定,按照 仪,按上述色谱条件进行测定,以进样量(x,g)对峰面积2.2.2项下方法制备6份供试品溶液,分别精密吸取供试品 (Y,A)进行线性回归,建立标准曲线.结果显示,淫羊藿苷进溶液各l0l按照上述测定条件进行测定,结果显示,淫羊藿 样量在0.200,2.00g范围呈良好的线性,回归方程为Y=苷含量平均值为0.4525mg/g,RSD为1.8%(n=6),表明 2083.1x+12.775,相关系数r=0.9998.该方法的重复性好,方法可行. 2.4.2精密度试验精密吸取同一供试品溶液lOl,按上2.4.5回收率试验取已知含量的样品粉末约1.5g,共6 述色谱条件进行测定,重复6次,测得淫羊藿苷的峰面积平均份,每组2份,按高,中,低3种浓度分别加入适量对照品溶 ,再按供试品溶液制备方值为1176.93,RSD为0.13%(n=6),表明仪器精密度良好.液 法制备样品溶液,在上述色谱条件 2.4.3稳定性试验精密吸取同一供试品溶液10l,分别下测定含量,计算回收率.结果见表1. 间隔0,2,3…4628h,按上述色谱条件进样测定,测定淫羊藿 表1淫羊藿苷加样回收率结果 2.5样品测定和结果按2.2.2项下方法分别制备供试品 溶液,分别精密供试品溶液各1Ol,按上述拟定的色谱条件 测定,每个样品平行测定2次,外标法计算含量.结果见 表2. 表2样品中淫羊藿苷含量测定结果(?,n=2) 3讨论 海狗三鞭丸是由二十多味中药精制而成.淫羊藿为其君 药之一,据《本草纲目》记载,具有"益精气,坚筋骨,补腰膝, 强心力"等功效,现代医学研究表明,其主要化学成分为黄酮 类化合物,其中以淫羊藿苷…为代表成分,淫羊藿苷能拮 抗丙基硫氧嘧啶的甲状腺抑制作用,预防"肾阳虚"证的出 现,又能促进丙基硫氧嘧啶所致甲减"肾阳虚"小鼠体内甲状 腺激素水平的提高,具有补肾壮阳的作用,还能明显增加脑血 流量,降低脑血管阻力,对脑缺氧有保护作用,此外还具有 "健骨",预防和治疗心血管疾病发生,抗肿瘤等作用.因此, 本研究选择淫羊藿苷作为该制剂的主要评价指标,并对其进 行了含量测定,具有一定的代表性. 供试品溶液制备方面,在提取溶剂(甲醇,乙醇,50%甲 醇),提取方式(超声,回流)和提取时间(15,30,45,60rain) 等方面进行了考察,结果表明,以甲醇提取所得溶液相对优于 乙醇和50%甲醇,采用超声提取速率优于回流法,且有利于 溶剂的穿透和样品振散,提取时间在30min后淫羊藿苷提取 率基本稳定,故供试品制备以甲醇为溶剂采用超声法进行提 取,提取时间稍延长至45rain.由于该制剂为大蜜丸,故在供 试品制备前要先将样品细心捣碎,提取过程中要时时振摇,有 利于药粉分散,提高提取率. 本研究还比较了乙腈.水,甲醇一水,甲醇-0.1%磷酸水等 流动相,以乙腈一水的分析效果较优,分离度较高,基线平稳. 本文所建立方法经验证具有良好的精密度,准确度,重复 性和专属性,能够有效用于测定淫羊藿苷含量和海狗三鞭丸 的质量评价. 参考文献 [1]中国药典(2005年版一部),2005:229-453. [2]黄评贵,喻定开,孙树山,等.HPLC测定抗骨增生VI服液中淫羊 藿苷的含量.中成药,2003.25(9):774-775. [3]彭艳,王苑桃.HPLC测定三宝双喜膏中淫羊藿苷的含量.中成 药,2001,23(12):925-9261. [4]欧明,林励,李衍文,等.简明中药成分手册.中国医药科技出版 社,2003:363-366.