膀胱砂状移行细胞癌中高危人乳头瘤病毒的检测

膀胱砂状移行细胞癌中高危人乳头瘤病毒的检测 膀胱砂状移行细胞癌中高危人乳头瘤病毒 的检测 j()7一;7JJ榻 生华外科杂志1999年6,El第37卷第6期Chin 膀胱乳头状移行细胞癌中高危 人乳头瘤病毒的检测 U厶 塑薛兆英 . 时.}午o?争 胛.(7 . 般, 【摘要】目的对高危^乳头瘤病毒(?v)16,18DNA在膀胱癌组织中进行定位研究.方法 运用地高辛标记的原位杂交技术对52例膀胱乳头状移行细胞癌中高危?DNA进行检测.结 果l-It~"DNA的用性信号存在于肿瘤细胞棱内,呈点状或点片状,其中以点状为主,约89.5%.癌旁 不典型增生上皮,癌旁正常的上皮组织及Brurm巢可同时有高危m的感染,但表达呈点片状.52 侧膀胱乳头状移行细胞癌中高危型HPV16,18DNA阳性19侧,阳性率为365%;PTa-T2期l7倒,Pr一 期2例;G1.2级l4倒,级5侧.随着肿瘤分期分级的增加,HPV16及HIW18的感染率有逐渐降低 的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).结论病毒DNA在膀胱癌变组织,癌旁正常及不典型增 生组织中均有不同程度的表达膀胱乳头状移行细胞癌}?,v感染率较高,浸润较浅分化较好的肿瘤 更多见,提示该病毒感染可能是膀胱癌发生的早期诱因之一: 【关犍词】乳头瘤病毒,人膀胱肿瘤癌,移行细胞原位杂交DNA探针.? The出te0fldl?哪np日pi?0m日vi嗍lnp田畹ryl眶}6删c日i岫0furi呻ry- der?母,心Tong//,动删lr~te矿Urdo~y,胁Hospital,&昭MedieolUniters毋, 姆00阱.【 Ab圈哪】喇ec丘veToim.e~atethe呷calevi0eneeofhighriskhum.~nuoI11a珈sinfection inbladdercar?oer.Methods52casesofpapillarytmnsitiomlcellcarein~nsl0ftheuri111113,b ladderwerestucliecl r叫?in?rp?0fhi出riskhumanp印_山omamstype16and.type18DNAby肿rI_i唧cinsitulIybridiza- tien(NISH).m目I?19of52ca瞄(36.5%)werepositiveforl-It~rDNAwilhl~tuateomcl/ordiffuse purple_bl嘴staininginthenueleu~0fcarIcercell~.iudit啪casesp~itivebothform16/18mDNA w啊eorry?ssedin日删c瑚hmlAm?gthe~epositivetL】m0rs,adjgeenlno盯nalepitheliumand. Brurmsne出al肿sl1呻树P0vestaining.M0rphcy.HPVl~tivecellsexistedinthewholelayer0fp叩一 曲IyUIlNIIIrcell~,30fthemntedk0d0cdcha?ge.(蒯l西咂s}?infectionrrIitbea?rnm eventinl1rirmrybladderandaalfaet~hcarcir10{esi80fbladdereell~. 【KeywmdP叩m?vir,humanBladder,唧[in0m,tramitiomlcellInsitu hdiz日tj?nNAPr0bes,}?】v 根据人乳头瘤病毒(hmaanp印m0mv,Hw) 是否具有致癌性分为低危和高危2种,后者与人类 肛门生殖道恶性肿瘤特别是宫颈癌的关系已被公 认l1一些研究发现高危人乳头瘤病毒与膀胱肿瘤 发生密切相关J,为此,我们运用原位杂交技术对 膀胱癌中高危ItPV16,l8的DNA进行定位研究,并 初步探讨其临床病理联系. 资料与方法 1.病例选择:52例膀胱乳头状移行细胞癌组织 作者单位:1N10~4北京医科大学第一医院泌屎外科研究所(余志 贤,现在温州医学院附属一院辨尿外科工作,32N1~) 临床研究 取自我院1991年1月,1997年l2月完整保存的膀 胱癌标本,男性45例,女性7例.年龄36,84岁,平 均年龄62.1岁.复发者23例 2.试剂:地高辛标记的ItPV16/18探针及氯化氮 蓝四唑/5一溴_4一氯一3一吲哚一磷酸二钠盐(NB'r/Bc~P)显 色系统(购自北京中山生物技术有限公司). 3.实验方法:(1)病理检查:5舢石蜡切片,常规 HE染色,确诊为膀胱乳头状移行细胞癌,分期分级 依据UICC分类系统.其中Gl2例,c235例,G3l5 例;a,T】30例,,_r422例.(2)原位杂交:4 肌】石蜡切片,常规脱蜡,脱水;0.2rr~l/L盐酸及蛋 白酶K(3?d)消化,2%甘氨酸,4%多聚甲醛固 定,磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.4)洗涤,乙醇脱水,空 ,,, 厂 中华外科杂志1999年6具第"卷第6船ChinJSu璀..~une1999.vd37,No6 气干燥;组织DNA充分变性(7()%甲酰胺,72oc变性 5,10分钟),其余步骤参照文献[4.阳性对照为 PER和免疫组化确诊的HPV16/18阳性的鼻息肉及 湿疣组织(由北医大病理系刘翠玲老师提供),未加 探针的空白对照为阴性对照. 结果 运用碱性磷酶显色,HPVDNA的原位杂交阳性 信号为细胞核内紫蓝色沉淀(图1),在肿瘤细胞中 表达呈点状,点片状,其中以点状为主,约89.5% (17/19).癌旁不典型增生上皮,正常的上皮组织及 Brunn巢可同时有高危HPV的感染,但表达呈点片 状.阳性细胞占据乳头状癌全层,部分细胞呈凹空 样改变(koilocytoidcel1).52例膀胱乳头状移行细胞 癌总阳性l9例(复发者8例),阳性率36.5%(19/ 52);其中HPVl6阳性6例,HPV18阳性n例,卸16 及l8同时阳性2例.PYa,期l7例,PL, 期2例,G1,G214例,岛5例.随着肿瘤分期分级 的增加,HPV16及HPVl8的感染率有逐渐降低的趋 势,但经统计学检验差异无显着意义(P>0.05),复 发与不复发者之间阳性率差异也无显着意义(P> 0,05). 阳性对照均为阳性(图2),空白对照均为阴性. 讨论 膀胱肿瘤内HPv感染的显色呈点状,点片状, 而且主要以点状为主,约为89.5%.这种表现与宫 颈癌中HPV阳性表现相类似,在宫颈鳞状细胞癌中 HPV以不同方式存在于肿瘤细胞中,点状代表整合 人宿主基因组的病毒基因(integratedDNA),片状表 示游离体的病毒基因(episomalDNA),且两种形式的 DNA可共存于官颈鳞癌中-.病毒基因的整合是细 胞发生癌变的主要步骤之一,因为病毒基因一旦整 合人宿主细胞,病毒E2基因的表达将丧失,伴随而 来的是癌基因E6,E7转录的增加l4J,病毒癌基因表 达的增加将进一步激活原癌基因c.myc,c—ra$和抑制 肿瘤抑制基因p53,Rb的活性,从而引起细胞的恶性 转化.膀胱肿瘤中是否存在类似的现象有待进一 步研究 形态学上,乳头状瘤病毒感染定位于膀胱乳头 状移行细胞癌及不典型增生上皮细胞全层,这与皮 肤良性病变中HPv的感染仅局限在表皮的中上层 不同l^;乳头瘤病毒的感染首先与细胞表面一高度 保守的蛋白质受体相结合,并由一与胞膜附着的细 胞内小囊泡(endoc)~icvesicals)所介导l8J.最近研究 发现,整合素06是乳头瘤病毒感染的受体,它以 %阻/%形式结合乳头瘤病毒,参与乳头瘤病毒的 感染过程_9,然而%,阻在膀胱上皮细胞中表达仅在 基底层细胞r】.因此人乳头瘤病毒特别是高危 HPV经何种途径,以何种方式结合到基底层细胞,目 前尚不清楚.哺乳类动物的膀胱移行上皮细胞能合 成一种高度特异且保守的糖蛋白——尿血小板凝素 (uroplakins,UPs),形成一个不对称的单位膜(asym. mel~cunitmembranee,AUM),构成膀胱腔面的第一道 非渗透性生物膜屏障,其功能相当复杂ll,乳头瘤 病毒的感染是否与UPs的作用有关,需进一步研究 证实 细胞空穴症是人类细胞感染HPV后的病理形 态学特征性改变.本研究中发现只有少数阳性癌 组织中细胞出现凹空样改变(koilocytoido~11)(3/19), 因此,癌细胞的凹空样改变可能是移行细胞感染 }玎W后的病理形态学特征之一. 52例膀胱乳头状移行细胞癌中,高危型乳头状 瘤病毒HPV16,18阳性者l9例,阳性率为36,5%,其 中HPV16阳性6例,}?18阳性11例,HPv16及l8 均阳性2例.说明膀胱乳头状移行细胞癌中确实存 在较高的高危HP~/16,18的感染,有些膀胱癌还可存 在多重的乳头瘤病毒的感染另外.分化较好,浸润 较浅的膀胱肿瘤感染率较高,与Tenfi等报道相 似;复发与不复发者之间阳性率虽有一定差异,但差 异无显着性意义(P>0.05),这可能与选择的病例数 较少有关. 癌旁正常的上皮组织及Brmm巢,癌旁不典型 增生上皮可同时有高危HPY的感染,且浸润较浅分 化较好的肿瘤更多见,提示该病毒感染可能是膀胱 癌发生的早期诱因之一 (本文图1,2见插页图第恐页) 参考文献 1deVilllersEM.PU'm?瑚a口d肿V【ypj呷CainDermato1.19卯, 15:199-206 2-..tgli~oAM,Gradil~A,c衄锄P,dH时human ]rmpJ~lc0navimsde~ction1口minmTbhkierc?Uroihat.1994,53: 12孓129 3P.Z~ppaomRRom~nollS,dp53ovemxptwssionhu一 ?日]x~piUommdmsiintransitionalcellca~inomsofurinary"blad— der:correlation山d(蝴m一日目jpahol,1996,178:65-70 4Park.IS,HwaiagES,parkSN,dalPhysicalBazd }?esincea~ca/?c0ncd.,I997,65:121- 中华外科杂志1999年6月第37卷第6期ChinJ雌..tune1999.Yd.37.N06 129. 5KrielinmenE,Je~akinsA.HolmR.Coe2dMe~tee0fepison~landintegat. edHPv16DNAin田岫唧cdlc日肥m蛐theoeJClinPatho]. 1994.47:253 6nau~i3HzPapilloma.rimsinanngenitalan~del/ounde therole0f"Amsesin?一~cersc叨唧Res.1989.49:4677堋1. 7丁洪基,李爱英,李新功.等尖锐湿疵厦湿疣样病变的临床病理 研究.中华病理杂志,1996.,』:107 8V0IDeC,L'nekellF.se叫hP,HalBindingandintern~ma ]',meanpapilloma~ms. type33vims-hkepar6elesbveuka~w, otic池j Vi,1995.69:3258-3264. 371 9nandM.F—IH.PaineE.eta1.Jdentifiearionnfthe06imegrin acandidaterecept~forpapi[1mavim~.Jvi,1997,71:?一 2456 10lAebe~M,Elem~erG.SteinJA,dalTh吨lm~tilx,dvBO16 Mentifi~the%&int~grininbla&ler…?doma.1993,12:67一 ? 11SunTT,ZhIHP.PIo~'etJ_dalFomratitm(a日?m?unit— ?during~thelialdiffer~tiafion.Mol~.ular0kReporls. I996.23:3-II (收稿:1998-06-17修回:1999.02.12) (本文编辑:秦学军) 胸腔镜下肺大疱缝扎方法的改进 朱成楚叶加洪叶中瑞郭剑波 1995年7月一1997年12月,我们采 用自行设计的胸腔镜下肺大疱缝扎法治 疗自发性气胸90例,缝扎肺大疱300余 个取得满意的效果. 1临床资料:本组9o例.男82例, 女8侧.年龄16,77岁,平均39.8岁. 左恻38侧,右馒{48侧.双侧同期手术4 倒.反复发作气胸2,6次者57倒,第1 次发作20倒,巨型肺大疱无气胸者13 倒.除5倒镜下未发现明显肺大疱外, 余均为多发性肺大疱,其中弥漫性肺大 疱9例. 2手术方法:双腔气管插管全麻后, 取健侧卧位,健侧单肺通气.患侧上肢 固定于麻醉头架上,首先在腋中线第5 或第6肋问作切口置人胸腔镜,观察胸 内情况.在胸腔镜引导下再在腋前线第 3,腋后线第5肋间作操作孔.然后,术 者左手拿抓钳夹住肺大疱并提起,右手 用腔内持针器及普通针线,从另一操作 L进人胸内,在肺大疱基底部两侧正常 将线头拉出胸 肺组织处作…U'形缝扎, 腔外,在体外先打一个方结,用拇指和中 指捏紧两个线头,用食指和小指将两根 线分开.拉紧缝线.然后用自制的"r型 简易打结器将线结推入胸内结扎处并 作者单位:317000浙江.台州医麓胸外科 抽紧,用同法再打两个方结即完成结扎: "Y"型打结器的制作及体外打结方法均 参考王俊等"的经验.检查线结无松 动,剪断缝线,肺大疱一般不作切除,等 全部肺大疱缝扎完毕,冲洗胸腔并请麻 醉师膨肺,观察肺大疱有无再充气或漏 气.对不能完全缝扎所有肺大疱的9例 弥慢性肺大疱患者作胸腔内喷洒滑石 粉.术毕经胸腔镜置入孔放置闭式引流 . 管 3结果:术中探查翻动肺叶时撕断 与锁骨下动脉的粘连带出血1倒,且出 血点在动脉表面,无法电凝及钛夹止血, 而转小切口开胸止血.术后呼吸衰竭1 倒,经再次气管插管,辅助呼吸22小时 后恢复.胸膜广泛粘连及弥漫性肺大疱 术后持续祸气3天以上者8例.最长1 倒达18天.余病例均3天内拔除胸腔 引流管.术后肺复张良好,随访6个月 , 2年,均无复发. 4.讨论:我f订自行设计的胸腔镜下 肺大疱缝扎法,主要优点:首先是所用材 料为普通缝针和丝线及自制的简易打结 器,价格极为低廉,能大大降低手术费 用.有利于胸腔镜手术的推广应用.其 次此种缝扎法能处理多种类型的肺大 疱.另外,此法的结扎线已缝在肺组织 上,结扎相当可靠,肺复张后结扎缱不易 诊治经验 滑脱,术后复发率低. 应用此方法行肺大疱缝扎时应注 意:(1)手术切口应略偏上,因为自发性 气胸患者多数为瘦长体形,且肺大疱绝 大多数集中在肺尖部2.而肺尖部又常 有胸膜粘连,切口稍上有利于操作.(2) 缝针进入胸腔前一定要在线头上缝上1 针,防针与线在胸腔内分离,缝针掉人 3)缝扎 胸腔内寻找困难或发生意外.( 时一定要缝在肺太疱基底部的正常肺组 织处.且应将缝线绕过肺太疱呈…U'形 (4)除巨型肺大疱外,缝扎后的肺大疱不 作切除,使其萎陷机化后与胸膜粘连.有 利于预防术后复发.(5)对慢性支气管 炎病史长,有重度肺功能障碍的患者,应 加强围手术期处理,特别是术中应与麻 醉师密切配合.控制单肺通气的潮气量, 必要时术侧加用高频呼吸机通气.手术 结束后适当延长呼吸机辅助通气时间, 以防发生呼吸衰竭. 参考文献 I王傻.刘桐林,陈鸿义.等自制简易打结 器在VATS中的应用中华外科杂志, 1994.32:636 2朱成楚.叶加洪.毛卫毕外科治疗自发性 气胸26例.中华啕血管卅科杂志1996. 12:145 (收稿:1998~4)0修回:I埘—o8) (本文编辑:张钰)