【doc】 模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响

【doc】 模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响 模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影 响 第3l卷第5期 2005年l0月 湖南农业大学(自然科学版) JournalofHunanAgriculturalUniversity(NaturalSciences) Vo1.3lNo.5 Oct.20o5 文章编号:1007.1032(2005)05.0527.03 模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响 何小解.,,卢向阳.,易着文,方 (1.湖南农业大学生化与发酵实验室,湖南长沙 湖南长沙410011) 俊’,田云’党西强,莫双红 410128;2.中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室, 摘要:为研究模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响,利用高压液相色谱技术测定了不同时点儿茶素在不 同pH溶液及人工模拟体胃液与肠液中的含量.结果明,儿茶素在pH5.8时最稳定,人工模拟胃液对儿茶素具 有较强的破坏力,而人工模拟肠液对儿茶素的稳定性影响相对较小; 胃蛋白酶,胰蛋白酶以及缓冲溶液中盐类物 质并不影响儿茶素的稳定性. 关键词:儿茶素;人工模拟胃液;人工模拟肠液 中图分类号:R965.1文献标识码:A stabilityofTeaCatechinintheArtificialSimulationGastricJuicesandArtificial SimulationIntestinalJuice HEXiao.jie’ 一,LUXiang.yang’,YIZhu.wen,FANGJun’,TIANYun’,DANGXi-qian~,M OShuang-hong2, (1.TheLabofBiochemistryandFermentationEngineering,HNAU,Changsha410128,China:2.TheSecondHospital ofXiangyaMedicalCollege,CentralSouthUniversity,Changsha410011,China) Abstract:Tostudythestabilityofteacatechinintheartificialsimulationgastricjuicesandartificialsimulationintestinal juice,theauthorsappliedliquidchromatographytoexaminethestabilityintheenvironmentofvarypHandsimulation stomachandintestinesway.ResultsshowedstabilityofteacatechinwerebestinpH5.8,withteacatechincomparative largelydestructedintheartificialsimulationgastricjuices.However,itwascomparativelystableintheartificial simulationintestinaljuice,andteacatechinwasn’taffectedbythesalinemater ialofpepsin,trypsinandbuffersolution. Keywords:teacatechin:artificialsimulationgastricjuices;artificialsimulati onintestinaljuice 儿茶素是一种多酚基非酶促次生代谢产物,具 有很强的抗氧化活性,但同时也决定其稳定性较差, 易于氧化失活.既往的研究表明,光,热,潮湿环 境,空气以及pH值均对儿茶素的稳定性有影响 u . 在前面的研究中,笔者发现儿茶素在肾病大 鼠体内的有效抗氧化浓度(质量浓度)为100mg/kg, 明显高于其体外抗氧化浓度(6.16pg/mL)及对体外 培养细胞的抗氧化浓度(15.0mg/L),究其原因,一 方面可能是由于儿茶素脂溶性差而难以被胃肠道 收稿日期:2005.06.06 基金项目:湖南省自然科学基金资助项N(OZUXY3020); 湖南省教育厅重点资助项目(02A015) 作者简介:何小解(1973.),男,汉族,湖南邵阳人,博 士研究生,助理研究员. 粘膜细胞吸收而进入血液循环中发挥其抗氧化作 用,另一方面可能是由于胃肠道的pH环境不利于 儿茶素的稳定而导致部分儿茶素失活,这是因为儿 茶素的最适pH值为4.0~6.2,与胃肠道pH值相差 甚远】,但胃肠道体液环境对其稳定性影响如何, 目前尚未见文献报道.为证实以上推测,本研究将 利用人工模拟胃液和人工模拟肠液探讨儿茶素在 模拟体内胃肠道环境中的稳定性,旨在为儿茶素的 临床开发应用提供进一步的理论依据. 1材料与 1.1材料 儿茶素(湖南金农生物资源股份有限公司提 供),高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司),胃蛋 白酶和胰蛋自酶均为上海东风生化试剂厂产品. 湖南农业大学(自然科学版)2005年10月 1.2方法 1.2.1儿茶素在不同pH条件下的稳定性试验 利用柠檬酸和磷酸氢二钠分别配制pHI.8,2.8, 3.8,4.8,5.8,6.8与7.8的柠檬酸缓冲液. 分别用上述溶液配制l%的儿茶素溶液各50 mL,每个pH溶液重复5管,37?下分别避光孵育 1,2,3,4,5h后,用50mL乙酸乙酯萃取,利 用液相色谱法测定不同时点,不同pH溶液中儿茶 素的回收率. 1.2.2儿茶素在人工模拟胃液中的稳定性试验【o 取9mL浓HC1,加水约800mL及胃蛋白酶 lOg,充分溶解后,调节pH值至1.3,定容1000mL, 即为人工模拟胃液.除不含胃蛋白酶外,其他与人 工模拟胃液相同配制的即为人工模拟NE胃液. 直接将儿茶素溶于胃蛋白酶双蒸水溶液中,配 制等浓度的儿茶素溶液,即为人工模拟CK胃液. 一 定量的儿茶素(约0.1g)分别溶于人工胃 液,人工模拟NE胃液,人工模拟CK胃液(约100 mE),重复5管---~(37+_1)?分别避光孵育1,2,3, 4,5h液相色谱法测定人工模拟胃液中儿茶素的 平均含量(以等浓度儿茶素水溶液为内对照). 1.2.3儿茶素在人工模拟肠液中的稳定性试验【j 称取6.8gKH2PO4溶于约500mL水中,另称 取l0g胰蛋白酶加水溶解,定容至1000mL, NaOH调节pH至7.6,即为人工模拟肠液.除不含 胰蛋白酶外,其他与人工模拟肠液相同配制的即为 人工模拟NE肠液. 直接将儿茶素溶于胰蛋白酶双蒸水溶液中,配 制等浓度的儿茶素溶液,即为人工模拟CK肠液. 取一定量的儿茶素(约0.1g)分别溶于人工肠 液,人工模拟NE肠液,人工模拟CK肠液(约100 mL),重复5管(37?1)?分别避光孵育1,2,3, 4,5h液相色谱法测定人工模拟肠液中儿茶素的 平均含量(以等浓度儿茶素水溶液为内对照). 1.2.4儿茶素含量的测定 利用高效液相色谱法测定儿茶素的组分及含 量.色谱条件:色谱柱:Nova—PakC18(3.9minx150 1/1111);流动相:A相为超纯水;B相为N,N一二甲基 甲酰胺:甲醇:冰醋酸:80:4:3(体积比);梯度洗 脱,B相比例由初12%经20min变为30%;紫外检 测波长:278am;柱温:35?;流速:1.0mL/min; 进样量:10. 2结果与 2.1儿茶素在不同时点和不同pH条件下的回收率 从表1可以看出,在相同pH条件下,放置时 间愈长,儿茶素含量减少愈明显;同一时点条件下, 不同pH条件对儿茶素含量变化影响存在差异,尤 其是pHI.8与pH2.8时儿茶素含量减少更为显着, pH4.8---,pH6.8条件下儿茶素稳定性较好,pH5.8时 儿茶素稳定性最好. 表1儿荼素在不同时点和不同pH条件下的回收率 Table1TherecoveryofteacatechinindifferenttimeandpH 2.2儿茶素在人工模拟胃液与人工模拟肠液中的 回收率 儿茶素在人工模拟胃液与人工模拟肠液中的 含量均有所减少(表2).但在人工模拟胃液中儿茶素 含量减少较在人工模拟肠液中更为显着,在1h时, 儿茶素在人工模拟胃液中的含量即减少了50.3%,4 h时趋于稳定,减少了59.4%;在人工模拟肠液中, 儿茶素在1h时减少了15.3%,5h时减少了 30.9%.儿茶素在人工模拟胃液与人工模拟NE胃液 中不同时点含量变化基本一致,在人工模拟肠液与 人工模拟NE肠液中不同时点含量变化也趋于一 致.进一步研究发现,儿茶素无论是在人工模拟N E肠液中,还是在人工模拟NE肠液中,与儿茶素 在水溶液中的稳定性基本保持一致. 表2儿茶素在人工模拟胃液与人工模拟肠液中的回收率 Table2Therecoveryofteacatechininartificialsimulationgastric juicesandintestinaljuice 第31卷第5期何小解等模拟人体胃肠环境对儿茶素稳定性的影响529 3讨论 儿茶素是以c【一苯基苯并吡喃为结构基础的类 黄酮化合物,是茶叶中主要生物活性成分之一,具 有强抗氧化作用”.胃肠道是口服儿茶素的主要 代谢场所,但其内环境特别是pH环境与儿茶素的 最适pH环境相差甚远,是否是导致儿茶素在体内 活性降低的重要原因,目前尚无定论.本研究发现, 儿茶素在不同pH条件下稳定性存在差异,其最适 pH环境为5.8左右,与文献[1】报道一致,说明pH 是影响儿茶素稳定性的重要原因之一.在人工模拟 胃液中,儿茶素含量显着降低,提示胃液内环境不 利于儿茶素稳定;进一步研究发现,儿茶素在人工 模拟NE胃液中与水溶液中的含量一致,且在不同 时点均明显高于人工模拟胃液中儿茶素的含量,提 示胃蛋白酶及缓冲溶液中盐类物质并不是导致儿 茶素稳定性降低的主要原因,pH环境才是引起儿 茶素稳定性下降的主要因素. 在人工模拟肠液中的研究发现,儿茶素的稳定 性均低于在人工模拟NE肠液中与水溶液中的稳定 性,而在人工模拟NE胃液中与水溶液中的稳定性 基本一致,说明胰蛋白酶及缓冲溶液中盐类物质也 不是影响儿茶素稳定性的因素,pH的变化才是引 起儿茶素稳定性下降的主要原因.从上述试验结果 可以看出,儿茶素在模拟人工肠液中的稳定性明显 高于模拟人工胃液.. 综合以上一系列试验的结果,可以清楚地看 到:入工模拟胃液对儿茶素具有较强的破坏力,而 人工模拟肠液对儿茶素的稳定性影响相对较小;胃 蛋白酶,胰蛋白酶以及缓冲溶液中盐类物质并不影 响儿茶素的稳定性.由此可以推测:如按一般常规 饮食方法口服儿茶素,最后在小肠处,只会有较少 一 部分儿茶素具有活性.但如在口服时避开胃液的 作用,则将会有很大一部分儿茶素在小肠处保持活 性.因此,口服儿茶素最好是以肠溶的方式(如肠溶 胶囊或肠溶片等)进行有利于提高儿茶素的稳定性 及生物利用度. 参考文献: …1沈生荣.茶多酚的稳定性[J].茶叶,1993,(2):27—31. 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