【doc】 模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响
模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影
响
第3l卷第5期
2005年l0月
湖南农业大学(自然科学版)
JournalofHunanAgriculturalUniversity(NaturalSciences)
Vo1.3lNo.5
Oct.20o5
文章编号:1007.1032(2005)05.0527.03
模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响
何小解.,,卢向阳.,易着文,方
(1.湖南农业大学生化与发酵工程实验室,湖南长沙
湖南长沙410011)
俊’,田云’党西强,莫双红
410128;2.中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室,
摘要:为研究模拟人体胃肠道环境对儿茶素稳定性的影响,利用高压液相色谱技术测定了不同时点儿茶素在不
同pH溶液及人工模拟体胃液与肠液中的含量.结果表明,儿茶素在pH5.8时最稳定,人工模拟胃液对儿茶素具
有较强的破坏力,而人工模拟肠液对儿茶素的稳定性影响相对较小;
胃蛋白酶,胰蛋白酶以及缓冲溶液中盐类物
质并不影响儿茶素的稳定性.
关键词:儿茶素;人工模拟胃液;人工模拟肠液
中图分类号:R965.1文献标识码:A
stabilityofTeaCatechinintheArtificialSimulationGastricJuicesandArtificial
SimulationIntestinalJuice
HEXiao.jie’
一,LUXiang.yang’,YIZhu.wen,FANGJun’,TIANYun’,DANGXi-qian~,M
OShuang-hong2,
(1.TheLabofBiochemistryandFermentationEngineering,HNAU,Changsha410128,China:2.TheSecondHospital
ofXiangyaMedicalCollege,CentralSouthUniversity,Changsha410011,China)
Abstract:Tostudythestabilityofteacatechinintheartificialsimulationgastricjuicesandartificialsimulationintestinal
juice,theauthorsappliedliquidchromatographytoexaminethestabilityintheenvironmentofvarypHandsimulation
stomachandintestinesway.ResultsshowedstabilityofteacatechinwerebestinpH5.8,withteacatechincomparative
largelydestructedintheartificialsimulationgastricjuices.However,itwascomparativelystableintheartificial
simulationintestinaljuice,andteacatechinwasn’taffectedbythesalinemater
ialofpepsin,trypsinandbuffersolution.
Keywords:teacatechin:artificialsimulationgastricjuices;artificialsimulati
onintestinaljuice
儿茶素是一种多酚基非酶促次生代谢产物,具
有很强的抗氧化活性,但同时也决定其稳定性较差,
易于氧化失活.既往的研究表明,光,热,潮湿环
境,空气以及pH值均对儿茶素的稳定性有影响
u
.
在前面的研究中,笔者发现儿茶素在肾病大
鼠体内的有效抗氧化浓度(质量浓度)为100mg/kg,
明显高于其体外抗氧化浓度(6.16pg/mL)及对体外
培养细胞的抗氧化浓度(15.0mg/L),究其原因,一
方面可能是由于儿茶素脂溶性差而难以被胃肠道
收稿日期:2005.06.06
基金项目:湖南省自然科学基金资助项N(OZUXY3020);
湖南省教育厅重点资助项目(02A015)
作者简介:何小解(1973.),男,汉族,湖南邵阳人,博
士研究生,助理研究员.
粘膜细胞吸收而进入血液循环中发挥其抗氧化作
用,另一方面可能是由于胃肠道的pH环境不利于
儿茶素的稳定而导致部分儿茶素失活,这是因为儿
茶素的最适pH值为4.0~6.2,与胃肠道pH值相差
甚远】,但胃肠道体液环境对其稳定性影响如何,
目前尚未见文献报道.为证实以上推测,本研究将
利用人工模拟胃液和人工模拟肠液探讨儿茶素在
模拟体内胃肠道环境中的稳定性,旨在为儿茶素的
临床开发应用提供进一步的理论依据.
1材料与
1.1材料
儿茶素(湖南金农生物资源股份有限公司提
供),高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司),胃蛋
白酶和胰蛋自酶均为上海东风生化试剂厂产品.
湖南农业大学(自然科学版)2005年10月
1.2方法
1.2.1儿茶素在不同pH条件下的稳定性试验
利用柠檬酸和磷酸氢二钠分别配制pHI.8,2.8,
3.8,4.8,5.8,6.8与7.8的柠檬酸缓冲液.
分别用上述溶液配制l%的儿茶素溶液各50
mL,每个pH溶液重复5管,37?下分别避光孵育
1,2,3,4,5h后,用50mL乙酸乙酯萃取,利
用液相色谱法测定不同时点,不同pH溶液中儿茶
素的回收率.
1.2.2儿茶素在人工模拟胃液中的稳定性试验【o
取9mL浓HC1,加水约800mL及胃蛋白酶
lOg,充分溶解后,调节pH值至1.3,定容1000mL,
即为人工模拟胃液.除不含胃蛋白酶外,其他与人
工模拟胃液相同配制的即为人工模拟NE胃液.
直接将儿茶素溶于胃蛋白酶双蒸水溶液中,配
制等浓度的儿茶素溶液,即为人工模拟CK胃液.
一
定量的儿茶素(约0.1g)分别溶于人工胃
液,人工模拟NE胃液,人工模拟CK胃液(约100
mE),重复5管---~(37+_1)?分别避光孵育1,2,3,
4,5h液相色谱法测定人工模拟胃液中儿茶素的
平均含量(以等浓度儿茶素水溶液为内对照).
1.2.3儿茶素在人工模拟肠液中的稳定性试验【j
称取6.8gKH2PO4溶于约500mL水中,另称
取l0g胰蛋白酶加水溶解,定容至1000mL,
NaOH调节pH至7.6,即为人工模拟肠液.除不含
胰蛋白酶外,其他与人工模拟肠液相同配制的即为
人工模拟NE肠液.
直接将儿茶素溶于胰蛋白酶双蒸水溶液中,配
制等浓度的儿茶素溶液,即为人工模拟CK肠液.
取一定量的儿茶素(约0.1g)分别溶于人工肠
液,人工模拟NE肠液,人工模拟CK肠液(约100
mL),重复5管(37?1)?分别避光孵育1,2,3,
4,5h液相色谱法测定人工模拟肠液中儿茶素的
平均含量(以等浓度儿茶素水溶液为内对照).
1.2.4儿茶素含量的测定
利用高效液相色谱法测定儿茶素的组分及含
量.色谱条件:色谱柱:Nova—PakC18(3.9minx150
1/1111);流动相:A相为超纯水;B相为N,N一二甲基
甲酰胺:甲醇:冰醋酸:80:4:3(体积比);梯度洗
脱,B相比例由初12%经20min变为30%;紫外检
测波长:278am;柱温:35?;流速:1.0mL/min;
进样量:10.
2结果与
2.1儿茶素在不同时点和不同pH条件下的回收率
从表1可以看出,在相同pH条件下,放置时
间愈长,儿茶素含量减少愈明显;同一时点条件下,
不同pH条件对儿茶素含量变化影响存在差异,尤
其是pHI.8与pH2.8时儿茶素含量减少更为显着,
pH4.8---,pH6.8条件下儿茶素稳定性较好,pH5.8时
儿茶素稳定性最好.
表1儿荼素在不同时点和不同pH条件下的回收率
Table1TherecoveryofteacatechinindifferenttimeandpH
2.2儿茶素在人工模拟胃液与人工模拟肠液中的
回收率
儿茶素在人工模拟胃液与人工模拟肠液中的
含量均有所减少(表2).但在人工模拟胃液中儿茶素
含量减少较在人工模拟肠液中更为显着,在1h时,
儿茶素在人工模拟胃液中的含量即减少了50.3%,4
h时趋于稳定,减少了59.4%;在人工模拟肠液中,
儿茶素在1h时减少了15.3%,5h时减少了
30.9%.儿茶素在人工模拟胃液与人工模拟NE胃液
中不同时点含量变化基本一致,在人工模拟肠液与
人工模拟NE肠液中不同时点含量变化也趋于一
致.进一步研究发现,儿茶素无论是在人工模拟N
E肠液中,还是在人工模拟NE肠液中,与儿茶素
在水溶液中的稳定性基本保持一致.
表2儿茶素在人工模拟胃液与人工模拟肠液中的回收率
Table2Therecoveryofteacatechininartificialsimulationgastric
juicesandintestinaljuice
第31卷第5期何小解等模拟人体胃肠环境对儿茶素稳定性的影响529
3讨论
儿茶素是以c【一苯基苯并吡喃为结构基础的类
黄酮化合物,是茶叶中主要生物活性成分之一,具
有强抗氧化作用”.胃肠道是口服儿茶素的主要
代谢场所,但其内环境特别是pH环境与儿茶素的
最适pH环境相差甚远,是否是导致儿茶素在体内
活性降低的重要原因,目前尚无定论.本研究发现,
儿茶素在不同pH条件下稳定性存在差异,其最适
pH环境为5.8左右,与文献[1】报道一致,说明pH
是影响儿茶素稳定性的重要原因之一.在人工模拟
胃液中,儿茶素含量显着降低,提示胃液内环境不
利于儿茶素稳定;进一步研究发现,儿茶素在人工
模拟NE胃液中与水溶液中的含量一致,且在不同
时点均明显高于人工模拟胃液中儿茶素的含量,提
示胃蛋白酶及缓冲溶液中盐类物质并不是导致儿
茶素稳定性降低的主要原因,pH环境才是引起儿
茶素稳定性下降的主要因素.
在人工模拟肠液中的研究发现,儿茶素的稳定
性均低于在人工模拟NE肠液中与水溶液中的稳定
性,而在人工模拟NE胃液中与水溶液中的稳定性
基本一致,说明胰蛋白酶及缓冲溶液中盐类物质也
不是影响儿茶素稳定性的因素,pH的变化才是引
起儿茶素稳定性下降的主要原因.从上述试验结果
可以看出,儿茶素在模拟人工肠液中的稳定性明显
高于模拟人工胃液..
综合以上一系列试验的结果,可以清楚地看
到:入工模拟胃液对儿茶素具有较强的破坏力,而
人工模拟肠液对儿茶素的稳定性影响相对较小;胃
蛋白酶,胰蛋白酶以及缓冲溶液中盐类物质并不影
响儿茶素的稳定性.由此可以推测:如按一般常规
饮食方法口服儿茶素,最后在小肠处,只会有较少
一
部分儿茶素具有活性.但如在口服时避开胃液的
作用,则将会有很大一部分儿茶素在小肠处保持活
性.因此,口服儿茶素最好是以肠溶的方式(如肠溶
胶囊或肠溶片等)进行有利于提高儿茶素的稳定性
及生物利用度.
参考文献:
…1沈生荣.茶多酚的稳定性[J].茶叶,1993,(2):27—31.
[2】陈红梅,周长忍,邹翰,等.茶多酚微胶囊的制备
及其性质研究【J】.广东化工,2000,22(2):55—56.
[3】邓泽元,余理利,黄建龙.微胶囊油溶性茶多酚及其
抗氧化能力的研究[J].食品科学,2001,22(11):37—39.
[4】方芳,崔志清,韩永晶,等.茶儿茶素的药效研究概
况【J].中草药,2000,31(5):396--398.
[5】5屠幼英.茶提取物理化特性的研究[J】.食品科学,1994,
(3):11-14.
[6】中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国
药典.第二部[M】.北京:化学工业出版社,2000.
[7】杨贤强.天然抗氧化剂——茶多酚的开发与应用[J].福
建茶叶,1991,(3):9—13.
[8】何小解,易着文,卢向阳,等.儿茶素对肾病综合征
大鼠氧自由基与抗氧化酶的影响研究[J】.肾脏病与透
析肾移植杂志,2002,l1(4):342—346.
[9】杨贤强,徐徘.茶多酚保健功效研究新进展.茶叶,
1992,(1):42—46.
[1o]贾之慎,杨贤强.茶多酚(TP)清除活性氧自由基的分
光光度法研究[J】.茶叶,1993,(1):25—28.
[?】陈裕盛,郑颜萍.茶多酚抗氧自由基作用[J】.中华肾
脏病杂志,1998,14(1):65—67.
责任编辑:罗慧敏
英文编辑:胡东平