【doc】人参二醇组皂甙对培养心肌细胞动作电位的双向性效应

【doc】人参二醇组皂甙对培养心肌细胞动作电位的双向性效应 人参二醇组皂甙对培养心肌细胞动作电位 的双向性效应 第16卷第5嘲白求恩医科大学V0I.16No.5 1990阜JOFNORMANBETHUNEUNIVOFMEDSCI199O \人参二醇组皂甙对培养心肌细胞 动作电位的双向性效应 白求恩医科大学毙季羹磊主 河北医科睫疠生研究室 钟固赣岳刚 邵春杰马兴元徐景达 江砉王雪 提要人参二醇组皂甙(PDS)j培养的W'istar大鼠心肌细胞动作电位呈双向性效 应:低浓度使动作电位的波幅,波觅,起射,闽电位,最大舒张电位最大徐极速度等电参数 一 致增太'高浓度使这些电参数一致域小,无论茳低浓度范回,或者在高浓度范围,电参数 的改变均随PDS剂量的增大而更加显着在电位记录前,临时向培养基中加八PDS,只表 现对跨腱电活动的抑制效应.而且此效应可被肾上穗素所柢销.以上结幕提示人参二醇组皂 甙既有腱保获作用也有钙通道阻滞作用. 关键饵--'2肌细胞细胞培眷动作电位萄通道人参二醇蛆皂甙背上瞧素 人参总皂甙爱二醇组皂甙对心血管系统 有多种阼厨[I,3],但人参二醇组皂甙对心肌 细胞电活动的影响尚来见报道J心肌细聪电 活动是心脏兴奋,传导和收缩活动的基础. 本实验拟观察人参二醇组皂甙对培养心肌细 胞电活动的影响,以探讨^参对心脏作用的 机理o 1方法 11心肌鲴臆培彝 在无菌条件下,取生后24~,lskWistar大鼠垒 心宣.用0.1腺蛋白酶加机械搅拌的方祛分离心 肌细胞.将获得的心肌细胞置人体积50ml,底 面积25cm的聚苯乙烯培养瓶(德国G;net" L.bortech?ikInc),在36.S?,5C0十95 空气的二氧化碳孵箱(月本,RKI?1002)内进行 .培养,每8天更换1次培养基.培养基由8o OMEM(美国,LifeTechMologle~I口c)与2O 小牛血清(NBS浙江省金华市犊牛利用研究站,与 率实验室自制)组成. 1.2电位记录 打开培养J之上壁,在培养基上置一层澈体石 蜡以保持.OHm'.2,36.s?之细胞外环境用常规微 电极电生理技术胞内引导心肌细胞动作电位,经镦 吼PPLEIFLUS,博士851程序)遵机劳 析以下电参数,动,乍电证_狡幅(APA),超射 (0s),最大舒张电位(MDP).『鲷电位(TP), 最大除板速度(Vmax),复桃0水平的动作电 位波宽(APP50). 1.5人?=尊组皂甙溶液鼍量 PDS(P4nax8di.1Ssponln)自承恩匿大化 学教研室提取)配成0.8%与lO两种浓度的水溶 液,做为贮液临用时,用培养基稀释至所需浓 度 14簟据统计用t裣磕 2结果 根据PDS的用法不同,实验分急性与慢性两部 分.在急性实验中,PDS於电位记录前,临对加人 培养基,脚观察其即时教应.在漫拄实验中,PDS 自培养之始即加入培养基,并在实验全过程中保持 嗣一浓度.必观察其长期效应. 2.1Il性实验 ?4lZ? ,f?l,, 稿 ,收 一 一手一l, 按培葬基中PDS的含量,窘验分8蛆-对用组 培弊基中不含PDSj其雹各组分别向培养基中加入 PDS1.25/mtI2.5p/m1,5~glmll10aglta1; 20~g/mli4o.~/m【J80.g/~i. 培养后第4天,在呈现自发性搏动的心肌细胞 内进行电位记录8组共计334十心肌细胞的动作 电位表明tPDs对培养心肌细胞的跨膜电活动,呈 双相性影响?在低浓度时,使动作电位增大}在离 浓度时,使动怍电位减小如图1所示..童j Fig.1Effect.ofPDS.nthetraasmembrare patentlaIsofeultured:ratcardlaccoils Yortleal?ordi?famp!i?"ofactloa ' potenlial HorlzoatMcoordlnatole~ntentofPDS 动作电位盏参数的均值{亡於表1.从表可 看出,在PDS1.25g,m城脓度下,动作电盘各参 散已有上升趋势.当浓度为2.5g/m1对,动作电 位的谈幅,超射,最大舒张电位,阈电位,最大除 槎遗度厦靛宽一致显着高于对照组.当浓度为5至 li$11llml时,电参数不再继续增大.甚至嵌复至对 l照承平.当浓度在20~80.g/mI的范宙内继续增高 时,备参数均越来越显着地低於对照坦. '4tE- 臣2为各1动作电位的典型示波器摄影 Fig.Typlc~lrecordigofactionpoteatlal of~eltured[ratcardiaccellsin d[ffercntco?ntratloaofPDS ', I[orlzo~talbarl20m5Rndzerollne . Verticalbart20mVandlOV/s _ 2.2息催蜜验. 於蕊察FDS即时效应的心肌组胞,均在常攮 培养美中进行培养於培葬韵第5,8天自每千 培养托中随机抽样5十搏动心肌细胞群落,进行以 下两现察..@加PDs前,后动作电位的比较在 记录PDs前的心肌细胞动作电位后,分狲向不同 培养搏中出nAPDs250g/m1,lO00~glmI,2000 g/咀】.再自相阃群落引导动作电位.结果如表2 所示,动作电位各参数,在PDS的作用下,一致显 着娥小.而且与PDs的用量有明显的茸效关系. ?肾上腙素对PDS效应的影响先记录加PDs前的 心肌钰胞动作电位,再记录加pDs后的动作电位. 之后,向培养基中再加八肾上腺素(E)10g/mt, 再次证录心肌缸勉动作电位.三种条件下的电位记 录垮在相同的群落上进行. 果如表3所示.肾上腺素拮抗PDS的效应. 在PD~导致培养心肌细胞动佧电位非常显若的抑制 之后,向培养基中舔加肾上腺素使动作电位各参数 立即嵌复至对照水平. L ^.^, j Inf1uenceofPDSiniffeTeBtcoi3~enLrationonetectric1 parameters0feultaredraLcardiacce[1s(Mean+SE) Tbte2Effect.fdratddit.?.fPDS('e1ectric8JpBr?meter-;afrat card{atcel1(Mez~?SE) (N)le~mbefofactionp.tcia1. 'P<0.05,'P<0.01J?'P<0.001Tthec~ntrol Table3Ant~goaismofepinophrineganstPDS(Mean?SE) PDS PDS.E APA (mV) 73.1?1 (32) 4目.7?1 (14) 70.3?1 (18) os (『nV) MDP (nV) 22.4:t1.17.9?1.3 (18)(18) TP (mY) 38.9?1.G (32) 18.9?o.8 (14) . o?o.8 (18) V皿Bx (V) APDB0 (坷s) 2d.7?4.0 (S2) 8.3?0.6 (14) l9.7?1.1 (18) 138.7?3.9 (32) G6.7?.3 (1) 184.4土10.6 (18> numbenflfactiop~=enl'P:O.0…P0.0札stEc而 ?4l9? ?,?.- ? ? ? d1 -墨, E蛆 < m? n . (P 42 })??? }( : 53 Ll ??" !( ?? 85 5讨论 本实验中,PDS的即时效应是对心肌细 胞跨膜电活动的抑制,使标志动作电位特征 的各项参数一致减小}而且这一抑制作用有 明显的剂量依赖性.由于在培养过程中呈 现自发性搏动的心肌细胞是慢反应自律细 胞[4],其动作电位的0期除极化,2期平台形 成以及4期身动除极化都决定于钙离子的内 流.所以PDS对培养心肌细胞动作电位的抑 制,很可能是其对钙通道具有阻滞作用的一 种表现.钙通道激动剂——肾上腺素能有数 地拮抗PDS对动作电位的抑制作用.这一事 实为PDS具有钙通道阻滞作用提供了进一步 的实验依据. 我们自前期工作中,对人参三醇组皂甙 (PTS)的实验所见,与上述结果一致J而 且PTS比PDS的钙通道阻滞作用表现得更 强.在慢性应用PDS时,它对培养心肌细胞 动作电位的影响是t低浓度使电参数一致增 犬,高浓度使电参数一致减小.有人从ca— ATP酶角度,也看到了PDS的双相性效应: 低浓度使此酶活力增强,高浓度使此酶活力 减弱[51. 培养心肌细胞跨膜电活动的强增是膜保 获作用的典型表现[6].本实验在低浓度 PDS作用下,动作电位各参数的一致增大, 提示PDS对心肌细胞膜有保获作用.这与 PDS能提高超氧化物歧化酶活力,清除自由 基,保获细胞及亚细胞结掏的:报道正相吻 合(i). 因此,培养心肌细胞跨膜电活动对PDS 的双相性反应,很可能是PDS的膜保获作用 与钙通道阻滞作用的净结果.在低浓度时这 两种影响中以膜保获作用占优势,在高浓度 时这两种影响中以钙通道阻滞作用占优势. 有关PDs双相作用的机制,尚有待进一步的 研究. '考立颤 林桦.^参=醇组皂硅对失血性休克保获作用及 其机朝的实验研究.聊士研究生论文,1089 邓援武,尊.胡亩鞋学院,i9871i2(8)t013 李元建,等.葑学?l28711t1 江岩戽用生理学杂击?17,3(1)t76 胡阿I,等.中茸药理学锺报.1e89J5(4)t23B ]tangYa?.Inf[ue~coOfbariumand sienhtm0nexpla~tedheartce11sPro- ceedillgsoftheSrdIaternatlo~aiSymposium 0?Se!eniuminBiologyndMedicine,1287J 3蜘一20B DUAL--DIMENSIONALEFFECTOFPANAXADIOLSAPONIN (PDS)ONACTIONPOTENTIALOFCULTURED CARDIACCELLS ZhongGuogan,YueGang,ShaoChunjie,MaXingyuan*, XuJingda,JiangYah,WangXueqing** (Dept.ofP.~yslo1.,'Be,,..fCl~em.,N.Bel~uneUnlv.ofMed. 8ei.}"Dept.of_P肌o,^.f.,ItebelAcademy.,Med.8e1.) PDSmayexert8dual—dimensionaleffeetontheaction.potentia!ofcultured Wistorrateordi"cells. LoweoncentratlonofPDSincreasedtheamp]itude8nd durationoftheactionpotential , overshooting,throsholdpotential,them8ximum ?42O? ' I- t_lI-,' ' diastolicpotentialandthemagimumrateofdp0lBrizBtio"}whi]ehigh concentrationofPDSdecreasedtheseparameters.Itise~identthatthesecha:ages ofelectricalparametersaredependent]yre]atedtothedosageofPDS. Drastic additionofPDStotheculturemediumonlyproducedaninhibitoryeffectOn theelectricalactivityacrossthemcmbrane,andthiseffectcouldbeantagonized byepinephrine.TheresultsindicatethatPDShasbothamembraneprotective effectandacalciumchannelblockingeffect. KeywordsCardiaccells,culturedActionpotential CaJciumchannelPDSEpinephrine 单层培养细胞透射电镜标本刮片包埋法 组胚教研室举玉兰抹宝华 常用的单层培养细胞电镜包埋法具有操作麻额,费时向厦费药品,成功率低葶缺点. 为此,我们又采 用了刮片包理法,取得了良好的效果.现将操作过程介绍于下.?将细胞接种表装 有小盖片的培养瓶内, 进行培养.@将长有细晦的盖片从培养瓶内取出,用Hnk氏浓洗再用0.imoi/L磷酸 缓冲液洗8次 (共1扭in).@固定{2.s成二醛固定30mln.?O.Imol/L磷酸缓冲'蝮诜8,共30mln.@1 锇酸固 定30mln(中间挽1敬新演).@三蒸馏水冼2min(中间换1敬新液)?醋陵铀内浸2h.?脱水. 经7O,80,90,96,100滔精内各5min脱承.?氧化丙烯内处理lOmln(中换1次新 液).@浸透?将长有细胞灼盖片浸于奉甘脂与氧化丽烯蔼舍蔽内(1:1)30n.@浓浸.浓浸树脂 内60mino@刮片包理.将长有细胞的盖片放于载玻片上,面朝上,右手拿超刀j}(新沟刮脸刀片),将 刀片刃放千盖片的一端,使刀片与盏片间成3口度角.从盖片的一端将细匏推起,肉艮可见被割起的细胞堆 在刀刃上,此时将有细胞的一面刀刃朝下,往包埋槽尖端的沿上一压,然后将刀拉出,细胞在包理槽沿内 堆成一准,然后向槽内港满树脂,于是细胞捷包入其中.@硬化将包埋板置35?温箱中12b,45?温箱 中12h,60?温箱中24h.@修块,切片. 体会.?此法易收集细胞,有少量细胞即可制赢电谠标本,节省药品与时间@撵作方便,鼠一切过 程都在盖片上进行,细弛不丢矢?保持细胞的形态结构.?成功率较其它包埋法均高.@此法也适用于 悬浮生长细胞的包理,将少量的细晦悬液漓于小盖片上,稍千后立即固定,然后用上述方法处理,最后用 刮片包理法制戚电镜标本(19e0一O2—3l收稿) ?421? ?j?