空调冷却水嗜肺军团菌的分离及鉴定报告

空调冷却水嗜肺军团菌的分离及鉴定报告 蕊防医学情报杂志1999年菇l5卷菇2期67 67一 空调冷却水嗜肺军团菌的分离及鉴定报 . 尸, 兰隆星:谢仁栋,兰纪康'吕强'孙莉 祝小平任红宇,/邱琼.卢锡华万超群 一 摘要四川I省在外环境中分离到嗜肺军团苗,尚未见于以往文献.1997年11月自空 调冷却水中分离到两株细菌 培养特性,生化反应及PCR均符台嗜肺军(编号为97004,97008),其菌体形志, 团菌鉴定要求,经试管凝 集,间接免疫荧光鉴定证实为嗜肺军团菌血清1型 关键词哩堕呈里堕2兰曼宅嚷干 AreportoftheIsolationandidentificationofLegionellaPneumophilafromthecoolingwaterofair—conditioner LuoLongze,胁 Rendong,LanJikang.eta1.HealthandAnti--epidemicCenterofSichuanprovince.Ch~ngdu 610031 AbstractTwostrainsofLPwereisolatedfromthecoolingwaterofair--conditioner(number97004.97008 ),whoseb~cterialshape.culturecharacter,biochemicalreactionandPCRmetthedemandsofidentificationof Legione1]aPneumophila.andwereconfirmedasserotype1ofLegionellaPneumophilabyTATandIFA.Theiso ]ationofLegione1]aPneumophila{r.menvironmentinSichoanprovincehasnotbeenreport edpreviously. KeyWw~rdslegionellapneumophilaiso]ationidentification 自1978年首次命名军团菌以来,目前得到美国疾病控 制中心(CDC)确认的军团菌已谜39种61个血清型本属 第一个种嗜肺军圊菌(Legione1.|ap~umoph丑aLP)是弓I起 ^群军团病的主要致病菌,有l5个血清型国内巳分离到 四十多株军团菌.主要为LP1型..1997年1】月,我们于 成都市两宾馆中央空调砖却循环水中分离到2抹可疑军团 菌(编号为97004,97008),经中国预防医学科学院流行病 学微生物学研究所鉴定.确认为嗜肺军团菌血清1型.现报 告如下 1与 1.1培养基BCYE平板按常规配制..双抗BCYE平板 每ml培养基含万古霉素1.u8,多粘菌素B20IU. 1.2样品采集与分离以无菌玻璃瓶冉中央空调冷却循 环水塔部采集水样250mi.经3000rpm30分钟离心.收集沉 渣于50?水搭保温30分钟.再取沉渣0.1ml接种于双抗 BCYE平板.放35.c烛缸内培养,每日观察,连续10日. I.3生化反应按文献0进行. I.4PCR试验扩增军团菌属特异386bp16srRNA基 因片断的弓『物及反应方法见文献".扩增嗜肺军团菌种特 异206bpmip基因片断的方法由顼科院流研所建立(引物 待发表).反应方法同上. 1.5各型嗜肺军团菌血滑由预科院流研所提供 FIFC标记的羊抗兔IgO购自上海生物制品研究所 2结果 2.I培养特性观察至第5天时,97004,97008两份标本 长出疑似军团菌菌落该菌在不吉半胱舞【酸的BCYE平板 i四川省卫生防疫站(成都610031) 2中国预防医学科学院流行病学擞生转学研究所 及营养琼脂干板上经l0天培养均不生长,BCYE干板2趺 传代后生长期缩短至2,3天.苗落大小2,3ram,圆形隆 起,表面光精,湿润,有光择,灰白色.革兰氏染色阴性中 等大小无芽胞杆菌.稀释复红复染常着色浅淡, 2.2生化反应两株菌生化反应相同,具动力,触酶阳性. 明胶酶阳性.淀橱水解阳性,不发酵葡萄糖,乳糖,麦芽糖 与蔗糖,尿素酶阴性 2-3PcR实验,采用军团菌属特异和嗜肺军团苗种特异 性弓『物扩增两株待检菌的染色体DNA,均获得386bp 16srRNA和206bpmip基因片断.同LP参考菌株一致(圈 1),从而判定这两株菌均属于军团苗属嗜肺军团菌种. 1.P删忡/Hae1分子量2.97004号3.97008号 4.5LP对照6.明性对照7.空白 固197004,97008军团菌386bpl6srRNA和 206bpmlp基因PCR扩增结果 2.4血清学检查待检菌与嗜肺军团菌1型血清玻片凝 集呈强阳性.与生理盐水夏其它型军团菌抗血清均不凝.试 68 管凝集(TAT)和间接免疫荧光(IFA)试驻,待检菌均与 LP[血清呈阳性反应,其中,TAT试验待检菌抗原与LP9 血清有部分交叉.但凝集强度较低,实验结果见表l 表1标准株抗血清与97004,97008菌株抗原反应 菌种血清群缩写丽970而04丽970而08 JPreMedInf,May.1999,Vo].15tNo.2 , LP14型标准株DNA模板扩增为386bp16srRNA和 206bpmip基因片断的电泳区带,LP以外军团菌以及多种 非军团菌不出现这一区带?.待检菌区带与对照LP标准 株相同,因此,可以从属和种的承平鉴定两株菌均为LP血 清学检查进一步证实与LP1型血清有抗原抗体反应,从而 确定两株菌均为LPI型,LP1型也是国际上报告的主要流 行型…. 军团菌常见于天然水体和人工管道承体中,尤其中央 空调的冷,热水系统,是其理想的繁殖定居场所,并可能 气溶胶的方式传播感染于人群..由于该菌营养要求较高 及杂菌污染等因素,以致分离培养较为困难.省内首次于 成都市空调系统中检出该菌,提示空调系统可能对城市人 群健康构成新的威胁,应引起我们足够重视 4参考文献 I于恩庶主编新发现的传染病.福州:福建科技出版 社,1997. 2武建国主编.军团菌病.南京:东南大学出版社,1990, PlO2,l06,Pl31,I33. 余传信,万超群,邓长英.中华流行病学杂志,1994.15 (2)儿7,l20 官仕梅,万超群,任红宇,等.5株嗜肺军团菌的初步鉴 定中国人兽共患病杂志,1996,12(4):45. 万超群.中华流行腐学杂志,1986,7(1):58. (收稿:l098—07—26俸回Il908一l2—15) (上接73页) 房屋类型对室内空气污染产生重要影响从所测定的 平房户多为砖术穿透房,结构较为简陋,未设专门厨房,通 风换气尚差,厨房与卧室污染物浓度无明显差异.楼房户多 为锕筋混凝套式房,台理,有专用厨房,有的装有排烟 设施,厨房与卧室污染物浓度有明显差异,以燃煤户二氧化 硫污染为倒,厨房与卧室浓度比值平房为1.o9,楼房为 3.83F苯并(a)芘悖染平房为1.32,楼房为3.71.王贤珍 等人?曾对厨房换气设施效果进行研究证实,在增设排烟 设备后,SO:.N厦CO排瞢籍率均在73.0以上.因此. 在改善居住条件的同时,增加换气措施消除室内污染尤为 重要. 近年来,一些发达国家开始注重电或燃气供作生活能 源室内污染研究,多侧重于氨氧化物测定Remi~n等人m 对I63名居室中氮氧化物调查结果,厨房浓度为791ag/m, 卧室浓度为23vg/m.武慢市也曾进行调查,厨房浓度在 l15~g/m,42g/m卧室在77~g/m.,3Ig/m之间.而 本市测定结果厨房为22pg/m,卧室为18~g/m.,与此相 比,均处于低污染水平. 4小结 4.1自贡市燃煤户室内污染重于燃气户燃煤户室内可嗳 入颗粒物,苯并(a)芘,二氧化硫,硫化氢及一氧化碳浓 度高于室外.燃气户室内可吸入颗粒物,苯并(a)芘及一 氧化碳亦高于室外.各污染物浓度冬季高于夏季. 4.2燃煤户室内可吸入尘及二氧化硫两项指标污染承平 高于上海,武汉,沈阳及承德市,燃气户室内氨氧化物污染 与国内外相比,尚处于低污染承平. 43无论燃韬l或燃气,平房室内污染重于楼房,其原因与 房屋类型,有无专用厨房及排烟设蘸有关.改善室内空气质 量,棘改善居住条件,提倡使用电或气体作燃料外,增加排 烟设施是一项有效措施. 5参考文献 l秦钰慧,张晓明,金慧芝,等.室内空气污染研究.环 境与健康杂志,199148(3)Ii00. 2吴沈春编.环境与健康.北京:人民卫生出版社,l986: 23l 3王贤珍,陶可圣,史力田,等.厨房排烟设备卫生学评 价.环境与健康杂志,l992F9(1):20. 4RemijinB.IntEpidemio1.1985{14(2)215 (收稿l998—02—13饪回;l998一O8—05)