空调冷却水嗜肺军团菌的分离及鉴定报告
蕊防医学情报杂志1999年菇l5卷菇2期67
67一
空调冷却水嗜肺军团菌的分离及鉴定报
.
尸,
兰隆星:谢仁栋,兰纪康'吕强'孙莉
祝小平任红宇,/邱琼.卢锡华万超群
一
摘要四川I省在外环境中分离到嗜肺军团苗,尚未见于以往文献.1997年11月自空
调冷却水中分离到两株细菌
培养特性,生化反应及PCR分析均符台嗜肺军(编号为97004,97008),其菌体形志,
团菌鉴定要求,经试管凝
集,间接免疫荧光鉴定证实为嗜肺军团菌血清1型
关键词哩堕呈里堕2兰曼宅嚷干
AreportoftheIsolationandidentificationofLegionellaPneumophilafromthecoolingwaterofair—conditioner
LuoLongze,胁
Rendong,LanJikang.eta1.HealthandAnti--epidemicCenterofSichuanprovince.Ch~ngdu 610031
AbstractTwostrainsofLPwereisolatedfromthecoolingwaterofair--conditioner(number97004.97008
),whoseb~cterialshape.culturecharacter,biochemicalreactionandPCRmetthedemandsofidentificationof
Legione1]aPneumophila.andwereconfirmedasserotype1ofLegionellaPneumophilabyTATandIFA.Theiso
]ationofLegione1]aPneumophila{r.menvironmentinSichoanprovincehasnotbeenreport
edpreviously.
KeyWw~rdslegionellapneumophilaiso]ationidentification
自1978年首次命名军团菌以来,目前得到美国疾病控 制中心(CDC)确认的军团菌已谜39种61个血清型本属 第一个种嗜肺军圊菌(Legione1.|ap~umoph丑aLP)是弓I起 ^群军团病的主要致病菌,有l5个血清型国内巳分离到 四十多株军团菌.主要为LP1型..1997年1】月,我们于 成都市两宾馆中央空调砖却循环水中分离到2抹可疑军团 菌(编号为97004,97008),经中国预防医学科学院流行病 学微生物学研究所鉴定.确认为嗜肺军团菌血清1型.现报 告如下
1
与方法
1.1培养基BCYE平板按常规配制..双抗BCYE平板 每ml培养基含万古霉素1.u8,多粘菌素B20IU. 1.2样品采集与分离以无菌玻璃瓶冉中央空调冷却循 环水塔部采集水样250mi.经3000rpm30分钟离心.收集沉 渣于50?水搭保温30分钟.再取沉渣0.1ml接种于双抗 BCYE平板.放35.c烛缸内培养,每日观察,连续10日. I.3生化反应按文献0进行.
I.4PCR试验扩增军团菌属特异386bp16srRNA基 因片断的弓『物及反应方法见文献".扩增嗜肺军团菌种特 异206bpmip基因片断的方法由顼科院流研所建立(引物 待发表).反应方法同上.
1.5各型嗜肺军团菌标准血滑由预科院流研所提供 FIFC标记的羊抗兔IgO购自上海生物制品研究所 2结果
2.I培养特性观察至第5天时,97004,97008两份标本 长出疑似军团菌菌落该菌在不吉半胱舞【酸的BCYE平板 i四川省卫生防疫站(成都610031)
2中国预防医学科学院流行病学擞生转学研究所 及营养琼脂干板上经l0天培养均不生长,BCYE干板2趺 传代后生长期缩短至2,3天.苗落大小2,3ram,圆形隆 起,表面光精,湿润,有光择,灰白色.革兰氏染色阴性中 等大小无芽胞杆菌.稀释复红复染常着色浅淡, 2.2生化反应两株菌生化反应相同,具动力,触酶阳性. 明胶酶阳性.淀橱水解阳性,不发酵葡萄糖,乳糖,麦芽糖 与蔗糖,尿素酶阴性
2-3PcR实验,采用军团菌属特异和嗜肺军团苗种特异 性弓『物扩增两株待检菌的染色体DNA,均获得386bp 16srRNA和206bpmip基因片断.同LP参考菌株一致(圈 1),从而判定这两株菌均属于军团苗属嗜肺军团菌种. 1.P删忡/Hae1分子量2.97004号3.97008号
4.5LP对照6.明性对照7.空白
固197004,97008军团菌386bpl6srRNA和
206bpmlp基因PCR扩增结果
2.4血清学检查待检菌与嗜肺军团菌1型血清玻片凝 集呈强阳性.与生理盐水夏其它型军团菌抗血清均不凝.试
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管凝集(TAT)和间接免疫荧光(IFA)试驻,待检菌均与 LP[血清呈阳性反应,其中,TAT试验待检菌抗原与LP9 血清有部分交叉.但凝集强度较低,实验结果见表l 表1标准株抗血清与97004,97008菌株抗原反应 菌种血清群缩写丽970而04丽970而08
JPreMedInf,May.1999,Vo].15tNo.2
,
LP14型标准株DNA模板扩增为386bp16srRNA和 206bpmip基因片断的电泳区带,LP以外军团菌以及多种
非军团菌不出现这一区带?.待检菌区带与对照LP标准 株相同,因此,可以从属和种的承平鉴定两株菌均为LP血 清学检查进一步证实与LP1型血清有抗原抗体反应,从而 确定两株菌均为LPI型,LP1型也是国际上报告的主要流 行型….
军团菌常见于天然水体和人工管道承体中,尤其中央 空调的冷,热水系统,是其理想的繁殖定居场所,并可能 气溶胶的方式传播感染于人群..由于该菌营养要求较高 及杂菌污染等因素,以致分离培养较为困难.省内首次于 成都市空调系统中检出该菌,提示空调系统可能对城市人 群健康构成新的威胁,应引起我们足够重视
4参考文献
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余传信,万超群,邓长英.中华流行病学杂志,1994.15 (2)儿7,l20
官仕梅,万超群,任红宇,等.5株嗜肺军团菌的初步鉴 定中国人兽共患病杂志,1996,12(4):45. 万超群.中华流行腐学杂志,1986,7(1):58. (收稿:l098—07—26俸回Il908一l2—15)
(上接73页)
房屋类型对室内空气污染产生重要影响从所测定的 平房户多为砖术穿透房,结构较为简陋,未设专门厨房,通 风换气尚差,厨房与卧室污染物浓度无明显差异.楼房户多 为锕筋混凝套式房,设计台理,有专用厨房,有的装有排烟 设施,厨房与卧室污染物浓度有明显差异,以燃煤户二氧化 硫污染为倒,厨房与卧室浓度比值平房为1.o9,楼房为
3.83F苯并(a)芘悖染平房为1.32,楼房为3.71.王贤珍 等人?曾对厨房换气设施效果进行研究证实,在增设排烟 设备后,SO:.N厦CO排瞢籍率均在73.0以上.因此. 在改善居住条件的同时,增加换气措施消除室内污染尤为 重要.
近年来,一些发达国家开始注重电或燃气供作生活能 源室内污染研究,多侧重于氨氧化物测定Remi~n等人m 对I63名居室中氮氧化物调查结果,厨房浓度为791ag/m, 卧室浓度为23vg/m.武慢市也曾进行调查,厨房浓度在 l15~g/m,42g/m卧室在77~g/m.,3Ig/m之间.而 本市测定结果厨房为22pg/m,卧室为18~g/m.,与此相 比,均处于低污染水平.
4小结
4.1自贡市燃煤户室内污染重于燃气户燃煤户室内可嗳 入颗粒物,苯并(a)芘,二氧化硫,硫化氢及一氧化碳浓 度高于室外.燃气户室内可吸入颗粒物,苯并(a)芘及一 氧化碳亦高于室外.各污染物浓度冬季高于夏季. 4.2燃煤户室内可吸入尘及二氧化硫两项指标污染承平 高于上海,武汉,沈阳及承德市,燃气户室内氨氧化物污染 与国内外相比,尚处于低污染承平.
43无论燃韬l或燃气,平房室内污染重于楼房,其原因与 房屋类型,有无专用厨房及排烟设蘸有关.改善室内空气质 量,棘改善居住条件,提倡使用电或气体作燃料外,增加排 烟设施是一项有效措施.
5参考文献
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3王贤珍,陶可圣,史力田,等.厨房排烟设备卫生学评
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4RemijinB.IntEpidemio1.1985{14(2)215 (收稿l998—02—13饪回;l998一O8—05)