HPLC法测定浓缩当归丸中阿魏酸的含量

HPLC法测定浓缩当归丸中阿魏酸的含量 HPLC法测定浓缩当归丸中阿魏酸的含量 第13卷第3期 2007年9月 测试技术与仪器Volume13Number3 ANALYSISANDTESTINGTECHNOLOGYANDINSTRUMENTSSep.2007 分析测试新成果(211~214) HPLC法测定浓缩当归丸中阿魏酸的含量 邵玉玲,强百杰,刘专专,杨玉华,马德平 (兰州佛慈制药股份有限公司,甘肃兰州730046) 摘要:建立了浓缩当归丸中阿魏酸的HPLC测定.采用Cs色谱柱(TSK—GEL,4.6×150mm,5tLm),以甲 醇-水一磷酸(30.70:0.3,v/v/y)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长320nm.结果阿魏酸在0.006~0.15g 范围内线性关系良好,r为0.9999,平均加样回收率为96.91%.本方法可用于浓缩当归丸中阿魏酸的含量监控. 关键词:高效液相色谱;阿魏酸;浓缩当归丸 中图分类号:0657.72文献标识码:B文章编号:1006—3757(2007)03-021I-O4 浓缩当归丸为《卫生部药品标准》中药成方制 剂第二十册收载的品种,其功能为养血活血,调经止 痛.主要用于血虚所致的月经不调,经来腹痛等症. 原标准中目前尚无含量测定之规定,为了提高该制 剂的质量标准,更好的控制药品质量,建立了用 HPLC法测定该制剂中的主要有效成分之一阿魏酸 的方法. 1仪器与试药 SCL-10AVP高效液相色谱仪,工作站版本为 C1assVP5.2,日本岛津制作所. 乙腈,甲醇为色谱纯,其余磷酸,盐酸均为分析纯. 阿魏酸对照品(含量测定用),由中国药品生物 制品检定所提供,批号:110773-9910. 浓缩当归丸,由兰州佛慈制药股份有限公司提供. 2色谱条件 色谱柱:TSK_GELDDS-Cl8(4.6mm×150 mm,5m);流动相:甲醇一水一磷酸(30:70:0.3, V/V/V);流速:1.0mL/min;检测波长:320nm;柱 温:40?;理论板数按阿魏酸峰计算不低于5000. 对照品,样品及阴性对照色谱图见图1. 3方法与结果 3.1对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每 收稿日期:2007-05-30;修订日期:2007—07—12. 作者简介:邵玉玲(1973一),女,工程师,从事药品检验工作. 1mL含10g的溶液,摇匀,即得. 3.2测定波长的选择 取阿魏酸对照品溶液,在200,4O0nm进行光 谱扫描,结果在320nm处有最大吸收,所以选择 320nm作为检测波长. 3.3供试品溶液的制备及提取条件的选择 取本品,研细,取细粉约0.4g,精密称定,置具 塞锥形瓶中,精密加入90甲醇溶液一盐酸(100: 1,V/V)的混合溶液10mL,称定重量,超声处理 (功率120W,频率40kHz)30rain,放冷至室温,再 称定重量,用上述混合溶液补足减失的重量,摇匀, 用微孔滤膜滤过,取续滤液,即得. 经查阅有关资料[1],供试品提取溶媒多采用 甲醇中加少许盐酸.本实验选用不同的提取溶媒和 提取方法,经对同一批次的样品,(批号:20060244) 进行对比试验.结果以90甲醇溶液一盐酸(100: 1,V/V)的混合溶液为溶媒,超声处理30rain,阿魏 酸的提取效果最佳,试验结果见表1. 3.4标准工作曲线,线性范围及检测限 精密吸取对照品溶液(0.006mg/mL)1,5,10, 15,20,25L依法进样,测定峰面积,以进样量(L) 为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果见 表2.求得回归方程为: Y一4564754X一3882.699.r一0.9999 阿魏酸在0.006,O.15g范围内呈良好的线 性关系. 分析测试技术与仪器第13卷 衰1供试品提取溶媒及提取方法的选择 Table1Theoptimizationof extractionsolventandextractionmethod 衰2线性关系考察 Table2Theresultsoflinearrelationship 进样量/g峰面积积分值 0.006 O.O3 O.O6 O.O9 O.12 O.15 根据中国药典(2005年版一部附录X?A)中药 质量标准分析方法验证指导原则的规定,用一系列 已知浓度的供试品进行分析,测得阿魏酸最低检测 限为1.1×10mg/mL(信噪比S/N=3). 3.5精密度试验 取同一份阿魏酸对照品溶液(O.012mg/mL), 连续进样5次,测定峰面积,求得RSD为0._67, 结果见表3. 衰3精密度试验 Table3Theresultsofprecisiontest 3.6稳定性试验 取浓缩当归丸样品(批号:20060244),依法制备 供试品溶液,并于0.5,1.0,2.O,3.0,4.O,5.0h分 别依法进行测定,求得峰面积的RSD为1.11,结 果见表4. 衰4供试品溶液的稳定性试验 Table4Theresultsofstabilitytest 3.7重复性试验 按供试品溶液的制备方法,对同一批(批号: 20060244)供试品进行了6次平行制备和测定,试验 结果见表5.结果表明该方法重复性良好. 衰5重复性试验结果 Table5Theresultsofrepeatabilitytest 3.8重现性试验 在兰州佛慈制药股份有限公司研究所与质量部 2个不同的试验室内(每个试验室进行3次测定), 分别由不同的人员,按上述供试品溶液的制备方法 及色谱条件,重复测定同一批浓缩当归丸(批号: 20060244)6次,试验结果见表6. 衰6重现性试验结果 Table6Theresultsofreproducibletest 粼 曲? 第3期邵玉玲.等HPLC法测定浓缩当归丸中阿魏酸的含量213 3.9加样回收试验 精密称取已知含量的同一批样品(批号: 20060244,阿魏酸含量:0.1939mg/g)6份,分别加 入一定量的阿魏酸对照品,按样品含量测定项下方 法测定,计算回收率,结果见表7. 3.1O专属性 取不含当归的浓缩当归丸处方药材,按浓缩当 归丸制备制备阴性样品,并按上述供试品溶液 的制备方法制备阴性对照品溶液,依上述色谱条件 进行检测,结果表明阴性样品在与阿魏酸峰相同保 留时间处无相应峰出现,说明阴性对照对阿魏酸的 检测无干扰,高效液相色谱图见图1. 3.1l5批样品中阿魏酸含量测定结果 取5批浓缩当归丸样品,按上述方法进行供试 表7加样回收试验 TaMe7Theresultsofrecoverybest 序号取样量/g原有量/mg加入量/mg测定量/mg回收率/%平均值/%RSD/ 0.2021 0.2074 0.2034 0.2011 0.2042 0.2053 0.0392 0.0402 O.O394 O.O39O O.O396 0.O398 0.041 0.041 0.041 0.041 0.041 0.041 0.0788 0.0805 0.0802 0.0778 0.0788 0.0795 t]min Cmin (b)浓缩当归丸样品 圈1膏效液相色谱圈 Fig.1ThemapofHPLC 品溶液的制备,分别精密吸取对照品溶液和供试品 溶液和1OL,注入液相色谱仪,依上述色谱条件测 定,结果见表8. 4讨论 (1)在进行流动相的选择时,分别对:?乙腈一 t]min (c)浓缩当归丸当归阴性样品 0.085磷酸(17:83);?甲醇一水一磷酸(3O:70: 0.3);?甲醇一水一乙酸(33:66:1);?甲醇一水一磷 酸(35:65:0.5)等不同组分,不同比例的流动相进 行了比较,认为以甲醇一水一磷酸(3O:70:0.3)为流动 相进行检测时,阿魏酸峰可获得良好的分离效果. (2)本方法简单,稳定,为浓缩当归丸的质量控 7 6 ? 1 1 9 ?6 9 991313 525668 ??????689456 999999 214分析测试技术与仪器第13卷 表8样品含量测定结果 Table8Theresultsofsampledetermination 制提供了一种有效的分析方法. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(2005年版一 [2] [3] [4] [5] 部)[M].北京:化学工业出版社,2005. 王春艳,李尚禹.浓缩当归丸的提取工艺研究[J].分 子科学,2005,21(3):21,24. 刘志勤.HPLC测定十五味箩蒂明目丸中阿魏酸的含 量[J].中成药,2005,27(11):1359,1361. 尹华,董晓烨.当归药材的质量标准研究[J].中医药 学刊,2005,23(8):1501,1503. 胡杰,冯丽莉,崔福德.当归川芎中阿魏酸提取的研究 [J].时珍国医国药,2004,15(11):732~733. DeterminationofFerulicAcidinNongsuoDangguiPillsbyHPLC SHAOYu—ling,QIANGBai-jie,LIUZhuan-zhuan,YANGYu—hua,MADe-ping (LanzhouFo—ciPharmaceuticalLimmitedCompany,Lanzhou730046,China) Abstract:Ahighperformanceliquidchromatographywasdevelopedforthedeterminationofferalicacidin NongsuoDangguiPills.HPLCwasperformedonflTsk-GelC18column(4.6× 150mm,5m)using methanol—wate卜 phosphoricacid(30:70:0.3,V/V/V)asthemobilephaseatflflowrateof1.0mL/ min.and320nmasthedetectionwavelength.Thismethodshowedagoodlinearrelationship,themean recoverywas96.91.ThismethodcanbeusedforthequalitycontrolofNongsuoDangguiPills. Keywords:HPLC;ferulicacid;NongsuoDangguiPills Classifyingnumber:0657.7叶'2