人乳头状瘤病毒感染型别与子宫颈上皮内瘤变的关系

人乳头状瘤病毒感染型别与子宫颈上皮内瘤变的关系 人乳头状瘤病毒感染型别与子宫颈上皮内 瘤变的关系 卜海学2006年第29卷第11期 人乳头状瘤病毒感染型别与子宫颈 上皮内瘤变的关系 李怀芳朱新贤王昕李莉 ?775- ? 论着? 【摘要】目的采用聚合酶链反应(PCR)一寡核苷酸微流芯片进行人乳头状瘤病毒(HPV)分型,并研究子宫 颈上皮内瘤变(CIN)与HPV感染型别的关系.方法对335例临床病例进行筛查,细胞学分级并分组,活检标 本通过寡核苷酸微流芯片上特异性探针进行HPV分型.结果335例患者中,HPV阳性率为22.1宫颈良 性疾病组的HPV阳性率为10.9,CINI,CIN1I,CIN?和宫颈鳞癌组分别为47.2,66.7,68.4%和 75.0,均显着高于宫颈良性疾病组(P值均<0.05).结论随着CIN级别的升高,高危HPV型感染比例增加, 寡核苷酸微流芯片检测能区分多种HPV型别,可用于临床宫颈上皮内瘤变的HPV筛查. 【关键词】人乳头状瘤病毒;子宫颈上皮内瘤变;寡核苷酸微流芯片 Studyontherelationshipbetweenhumanpapillomavirustypesandintraepithelialcervicalne oplasiaLIHuai fang,ZHUXinxian,WANGXin,LILi.Departmento, fObstetricsandGynecology,TongjiHospital. TongjiUniversity,Shanghai200065,China [Abstract]ObjectiveTostudytherelationshipbetweenintraepithelialcervicalneoplasia(ClN)andtypesof Humanpapillomavirus(HPV)infection.Methods335caseswerecollectedandgroupedbycervicalcytologic analysis.TheHPVofCINlesionswastypedbymicrofluidchip.ResultsOfthe335patients,thetotalHPVposi— tiveratewas22.1(74/335).Theprevalenceofbenigncervicalsquamousepitheliumgroupwas10.9(28/ 256).Outof36CINIlesions,17wereHPVDNApositive(54).InCIN11group,66.7(10/15)wasassoci— atedwithHPVinfeetion.68.4(13/19)of(:INIlllesionswerepositiveforHPVwhereas75(6/8)ofcervical carcinomashowedHPVpositive.Theyshowedsignificantincreasesinprevalenceascomparingwithcervicalaqua— mousepitheliumgroup(P<0.05).ConclusionThepercentageofHPVinfectionincreaseswithincreaseofCIN grade,demonstratingthattheOligoDNAmierofluidchipassaycandiscriminatemanytypesofHPVandcanbeap— pliedforHPVscreeningofclinicalCIN.(ShanghaiMedJ,2006,29:775—777) [Keywords]CINlesion;HumanPapillomaVirus;(.)ligoDNAmicrofluidchip 人乳头状瘤病毒(HPV)感染与子宫颈上皮内 瘤变(CIN)和官颈癌有密切关系.HPV感染具有 潜在恶变能力,可视为与CIN相关的早期病变,官 颈癌在某种意义上是一种感染性疾病[1l.HPV 病毒型别繁多,有100个类型以上,其中约20种与 人类生殖器皮肤黏膜病变有关.HPV感染可分 低危和高危两大组,低危组HPV型有6,11,40 和42型等,与性病湿疣有关,较少恶变;高危致瘤 HPV型有16,18,31,33,35,39,45,51,52, 作者单位;200065上海,同济大学附属I司济医院妇产科(李 怀芳,朱新贤,李莉);同济大学附属东方医院妇产科(王昕) 56和58型.鉴于HPV型别多种多样,新型不断 被发现,不同型别的致病作用存在差异,因此在对 HPV检测的同时必须分型[zI.本研究采用寡核 苷酸微流芯片技术,通过HPV基因对HPV分型, 探讨宫颈癌,CIN与HPV感染型别间的关系. 资料与方法 一 ,样本来源及分组 收集我科2001年12月至2004年6月门诊及 手术患者335例,年龄25,72岁,中位数为47.8 岁,根据病变程度分为宫颈良性疾病组及CINI, ?,?组.宫颈良性疾病组包含一般宫颈慢性疾 病如宫颈中,重度糜烂和慢性宫颈炎,官颈息肉, 宫颈湿疣,产后宫颈裂伤.CIN工,?,?级及原 位癌,浸润癌组织细胞学分组按TBS分类系统 (1hebethesdasystem)分类_3_3. 宫颈活检术:选择阴道镜所见病变最严重处 进行多点活检;正常转化区则常规取移行带12点 和6点两处;宫颈接触性出血严重,阴道镜检查不 满意者,多取病变最严重的部位.行移行带上移 行官颈管刮取术(ECC)8例.73例活检组织学符 合以下条件:?慢性宫颈炎且以重度糜烂为特征;? 官颈湿疣并累及多个象限;?CINI,?,?级和原位 鳞癌.其中45例行宫颈环形电切术(LEEP)治疗, 因兼具宫颈活检与I.EEP两次组织学检查,取其诊 断级别较高者作为组织学的最后诊断. 二,标本处理及DNA提取 组织活检标本或生殖道刮片标本研成匀浆 后重悬于200/,I消化液(100mmol/l氯化钠, 10mmol/L三羟甲基甲烷盐酸缓冲液(Tris HCI),0.5十二烷基磺酸钠(SDS),200/,g/mL 蛋白酶K)中,37?彻底消化2h.采用苯氯仿异 戊醇抽提3次,无水乙醇沉淀DNA,沉淀用TE缓 冲液El0mmol/LTris—HCI,1mmol/l乙二胺四 乙酸(EDTA),pH8.O]重新溶解[. 三,HPV微流芯片分析 在Southernblot检测技术和微流层析杂交方 法基础上,采用DNA芯片方式检测,最终通过扫 描仪扫描及数据的处理分析确定HPV型别,检测 过程包括聚合酶链反应(PCR)扩增,DNA变性,微 流杂交,底物显色和结果判断等.操作方法见参 考文献[5]. 四,统计学处理 采用)c'检验. 结果 本组335例标本中,HPV阳性率为22.1 (74/335例).宫颈良性疾病组的HPV阳性率为 10.9g00(28/256例),其中低危HPV型感染占 64.3.CINl组的HPV阳性率为42.2(17/ 36例),显着高于宫颈良性疾病组(P<0.05);其 中HPV6与HPV45合并感染】例,高危HPV感 染13例,占76.5.CIN11组的HPV阳性率为 66.7(1o/15例),显着高于官颈良性疾病组 ShanghaiMedJ,2006,Vol29,No11 (P<0.05),高危HPV感染9例,占90.0,其 中HPV16和HPV18合并感染1例.CINIII组的 HPV阳性率为68.49/6(13/19例),显着高于宫颈 良性疾病组(P<0.05),高危HPV感染11例, 占84.6,其中HPV18合并HPV51感染1例. 宫颈鳞癌组的HPV阳性率为75.0oA(6/8例), 显着高于宫颈良性疾病组(P<0.05),高危 HPV感染5例,占83.3,其中HPV58感染3 例.见1. 讨论 从官颈癌前病变发展成宫颈癌,是一个时间 较长的过程,大约为1O年.宫颈非典型增生发病 5年内约,lo可逆转为正常,1O发展为原位癌, 其余维持非典型增生阶段,但级别有所改变_6_6. 因此,官颈癌是一种可预防,可治愈的疾病,关键 是进行筛查,防忠于未然.及时发现早期宫颈癌, 及时恰当地处理,治愈率几乎达1000.4.可见及早 准确的诊断和治疗宫颈炎,宫颈糜烂以及CIN,对 CIN的转归和预防宫颈癌发生具有非常重要的意 义.尤其是宫颈慢性疾病损害部位组织中(包括 分泌物和刮片上皮组织)高危因素的确立与检测, HPV感染检测对官颈癌高危人群的筛查具有非 常重要的意义.本研究结果显示,宫颈良性疾病 组256例中,以低危HPV型感染为主,占64.30A; CIN工组共36例,17例(47.20.4)HPV为阳性,高 危HPV感染13例,占76.50,4;CINlI组15例,1O 例(66.7)HPV为阳性,高危HPV占90.0; cIN?组19例,有13例(68.4)HPV为阳性,高 危HPV占84.6;宫颈鳞癌组8例,有6例 (75.0)HPV检测为阳性,5例高危HPV感染, 占83.3.值得注意的是,其中出现3例HPV58 阳性,占高危病例半数以上,说明官颈鳞癌与 HPV58感染更为密切,值得进一步探讨.随着 CIN级别的升高,高危HPV型感染比例增加,说 明ClN病变与HPV感染相关. 从感染的人群分布看,HPV6,l1,16和18 感染依然占主导地位,占总感染数的71,尽管如 此,其他HPV型别包括31,33,39,58,59等感 染占29%,必须引起重视这也充分反映了微流 芯片多型同时检测的优势.HPV微流芯片分型 方法可对宫颈慢性疾病进行筛查,监测高危型HPV 海医学2006年第29卷第11期 表l335例标本HPV分型检测结果及分布(例) 0含HPV6与HPV45合并感染l例;0含HPV16和HPV18合并感染1例;0含HPV18 合并HPV51感染l例;与官颈良性疾病组比 较:?P<0.05 感染的高危人群,为宫颈癌的早期预防提供了一 种有效的诊断手段.但由于方法中依然引用PCR 放大技术,样本DNA的抽提效率,PCR反应的灵 敏度等会直接影响检测结果,即无法消除PCR相 关的干扰因素对结果的影响,因此检测试剂组成 和操作的性尚需提高[. 治疗中根据宫颈病变程度,CIN级别和HPV 感染类型规范治疗手段的同时,还要考虑患者的 状况(年龄,婚育,范围和孕期等),做到治疗个体 化.低危HPV疣体的治疗,一般根据疣体的大 小,数量和部位等选择中药治疗或5咪喹霜等 外涂高危HPV感染可根据感染程度选择局部 破坏性治疗(激光,冷冻,微波,电凝)及手术切除 治疗,药物局部治疗采用5一氟尿嘧啶,a一干扰素 栓(6万U/粒阴塞).因15的CINI患者存 在继续发展的可能,一般建议CIN患者进行物 理治疗,术后进行细胞学检查,3,6个月定期检 查,监测. 参考文献 l郎景和.于官颈上皮内瘤变的诊断与治疗.巾华妇产科杂志, 200I,36:26l263. 2王淑珍,孙建衡.子宫颈上皮内瘤样变的转归及监测.巾华妇 J科杂志,l999,34:754756. 3MeijerCJ,WalboomersJM.Cervicalcytologyafter2000: wheretogo?JClinPathol,2000,53:4143. 4朱沛轩,主编.PCR检验技术.成都:蹦JII大学出版社.l995.8. 5朱新贤.李怀芳.叶元康.PCR一寡核苷酸微流芯片用于人乳头 状瘤病毒分型检测.生殖与避孕,2002,22:9498. 6DillnerJ.Trendsovertimeintheincidenceofcervicalneopla siaincomparisontotrendsovcrtimeinhumanpapillomavirus infection.JClinVirol,2000,l9:723. 7GrceM.HusnjakK.SkerlevM.eta1.Detectionandtyping ofhumanpapillomavirusesbymeansofpolymerasechainreac tionandfragmentlengthpolymorphisminmalegenitalle— sions.AnticaneerRas.2000.20:20972lO2. (收稿日期:2005-01—24) (本文编辑:王小燕)