黑曲霉菌种传代培养操作规程

黑曲霉菌种传代培养操作规程 标 准 操 作 规 程 ( S O P) 题目:黑曲霉菌种传代培养操作 编号:SOP05-TY038-? 分发号: 规程 颁布部门:质量保证部 分发部门:质量控制部 生效日期: 起草人: 审核人: 批准人: 起草日期: 审核日期: 批准日期: 分发范围:菌种室 1、 目的与适用范围 建立黑曲霉菌种传代培养操作规程，菌种传代培养操作，确保菌种传代技术成功，保证产品质量的安全、稳定。 于菌种的传代培养操作。 本规程适用 2、 菌种室人员对本规程实施负责。 3、 内容 3.1 备料 3.1.1 菌种室人员根据接种菌株发育情况，待菌株发育良好，具备传代要求条件时，菌种室人员按照一次传代培养荃配方，填好领料单报总经理批准，送仓储部备料，仓储部不具备情况下，可派专人购买符合标准的培养荃。 3.2 传代培养操作前的准备工作 3.2.1 一次传代培养荃配方 原料名称 数量 规格 原料名称 数量 规格 蛋白胨 0.5% 药用 K2HPO4 0.03% 药用 琼脂 2% 药用 MgSO4?7H2O 0.01% 药用 CaCO3 4% 药用 葡萄糖 3% 药用 (NH4)2HPO4 0.023% 药用 水 1000mL 纯化水 3.2.2 一次传代培养荃的制备 按配1000ml的量，将上表中的配方原料精确称取，投入有刻度的1000ml三角烧瓶中加纯化水，使成1000ml，用玻璃棒搅拌均匀后，分别装入20支斜面培养荃试管 第 1 页 共 1页 标 准 管 理 规 程 ( S M P) 题目:黑曲霉菌种传代培养操作规程 编号:SMP05-TY038-? 中。然后放入消毒罐中，加热至120?保温灭菌半小时，取出冷却至室温，然后送入接种室进行无菌接种。 3.2.3 按进入万级洁净室一更后，脱鞋、戴帽、更衣，搞好人的清洁、消毒，搞好洁净室的清洁、消毒，并做好相关用具、洁具的准备工作。 3.3 传代接种操作。 操作人员进入二更，在100级层流操作台上，按无菌操作要求进行传代接种操作。操作人员将接种针在酒精灯火焰上消毒一分钟后，放冷，从恒温培养箱中取出已接种培养的菌种，用接种针分别刮下已生长发育的菌体，分别移植到20支装有一次传代培养荃的斜面培养荃试管中，用无菌药棉和经消毒的塞密闭试管，然后，放入25?-28?的恒温培养箱中培养。 3.4 接种毕，做好清洁卫生和清场工作，并做好接种操作记录。 3.5 待培养5天后，在洁净室内取出菌种，用1万级显微镜观察菌株发育情况，待发育良好时，再进行二次传代培养，并做好菌种发育观测记录。 3.6 菌种的二次至四次传代培养操作，按照一次传代培养荃的配方，将一次传代培养的菌种按一次传代培养操作，扩大10倍进行二次传代培养;同样，按一次传代培养荃的配方，将二次传代培养的菌种，按一次传代培养的接种操作，扩大10倍进行三次传代培养;同样，按一次传代培养荃的配方，按一次传代培养的接种操作，将三次传代培养的菌种扩大10倍进行四次传代培养。 不进行下一次传代培养的菌种，可将培养的菌种从25?-28?培养箱中取出，贮藏在5?-10?的冷藏箱中，控制其菌种的发育。 3.7 菌种的五次传代培养 3.7.1 备料 菌种室根据车间生产和五次传代培养菌种贮存数量情况，需做五次传代培养时，先按五次传代培养荃配方填好领料单，申报总经理直接批准，送仓储部领料，或提前告知供应部采购合格培养荃。 3.7.2 五次传代培养荃配方 第 2 页 共 3页 标 准 管 理 规 程 ( S M P) 题目:黑曲霉菌种传代培养操作规程 编号:SMP05-TY038-? 原料名称 数量 规格 麸皮 1000g 食用 葡萄糖 50g 食用 碳酸钙 10g 药用 水 1000ml 纯化水 3.7.3 五次传代培养荃的制备 按上表配方比例，每次总量按1000ml配制，精确称取培养荃原料，加净化水，使成1000ml培养荃，搅拌均匀，装入斜面扁形培养瓶中，然后将斜面扁形培养瓶放进消毒罐，加热到120?，保温灭菌半小时，冷却后取出放冷，送洁净室进行无菌接种。 3.7.4 五次传代接种操作 3.7.4.1 按规定进入成绩级洁净室一更后，操作人员脱鞋、鞋帽、更衣，搞好人的清洁、消毒，搞好洁净室的清洁、消毒，并做好相关用具、洁具的准备工作。 3.7.4.2 操作人员进入二更，在100级层流操作台上，按无菌操作要求进行五次传代接种操作。 将接种针放在酒精灯火焰上消毒1分钟后放冷，从恒温培养箱中取出四次传代培养的菌种，视菌落发育情况，按扩大8-10倍的比例进行五次传代培养，用接种针分别刮下已生长发育的菌体，分别移植到已装有五次传代培养荃的斜面扁形培养瓶中，用无菌药棉和已消毒的塞子将斜面扁形培养瓶口盖紧，密闭放入25?-28?的恒温培养箱中培养。 3.7.4.3 接种毕，做好清洁卫生和清场工作，并做好接种操作记录。 3.7.4.4 待培养四天后逐日观察菌落发育情况，一般情况培养5天后进行检测，并做好菌种发育良好，即可投入车间放大培养，投入生产使用。 不投入车间生产的五次传代培养菌种，从培养箱中取出，放入5?-10?的恒温冷藏箱中冷藏侍用。 第 3 页 共 3页