饲料中霉菌的检测方法

饲料中霉菌的检测方法 1． 本标准规定了饲料中霉菌的检测方法 本标准适用于饲料中霉菌的检验 2 根据霉菌生理特性，选择适宜于霉菌生长而不适宜于细菌生长的培养基，采用平皿计数 方法，测定霉菌数。 3 3．1天平：感量1g，最大秤量1000g。 3．2显微镜：1500×。 3．3温箱：25~28?1?。 3．4冰箱：普通冰箱。 3．5高压灭菌器：2.5?. 3．6干燥箱：50~250?1?。 3．7水浴锅：45~77?1?。 3．8振荡器：往复式。 3．9微型混合器：2900r/min。 3．10电炉。 3．11酒精灯。 3．12接种捧：镍铬丝。 3．13温度计：100?1?。 3．14载玻片。 3．15盖玻片。 3．16乳钵。 3．17试管架。 3．18玻璃三角瓶：250，500mL。 3．19试管：15×150?。 3．20平皿：直径9?。 3．21吸管：1，10 mL。 3．22玻珠：直径5?。 3．23广口瓶：100，500 mL。 3．24金属勺、刀等。 3．25橡皮乳头。 4 4． 1高盐察氏培养基。 4．2稀释液。 4．3试验室常用消毒药品。 5 霉菌检验程序如下： 检样 粉状饲料 磨碎 块状饲料 谷物饲料原料 加无菌稀释液10倍稀释振荡30 min 做成几个适当倍数的稀释液 选择3个适当稀释度，各以1 mL加入灭菌平皿内 每皿加入适量高盐察氏培养基 25~28?1?培养1周 菌落计数 报告 6 6．1采样 采样时必须特别注意样品的代性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样 工具，如牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀，在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品，样 品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。 根据饲料仓库、饲料垛的大小和类型，分层定点采样，一般可分为三层五点或分层随 机采样，不同点的样品，充分混合后，取500 g左右送检，小量存贮的饲料可使用金属小勺 采取上、中、下各部位的样品混合。 海运进口饲采样：每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样 混合，如船仓盛饲料超过10000ｔ，则应加采一个样品。必要时采取有疑问的样品送检。 6．2以无菌操作称取样品25g（25 mL），放入含有225 mL灭菌稀释液的玻塞三角瓶中，置 振荡器上，振荡30 min，即为1：10的稀释液。 6．3用灭菌吸管吸取1：10稀释液10 mL，注入带玻璃珠的试管中，置微型混合器上混合3 min，或注入试管中，另用带橡皮乳头的1 mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子分散开。 6．4取1 mL1：10稀释液，注入含有9 mL灭菌稀释液试管中，另换一支吸管吹吸5次，此液为1：100稀释液。 6．5按上述操作顺序作10倍递增稀释液，每稀释一次，换一支1 mL灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择三个合适稀释度，分别在作10倍稀释的同时，吸取1 mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度作两个平皿，然后将凉至45?左右的高盐察氏培养基注入平皿 中，充分混合，待琼脂凝固后，倒置于25~28?1?温箱中，培养3d后开始观察，应培养观 察一周。 6．6计算方法 通常选择菌落数在30~100个之间的平皿进行计算，同稀释度的2个平皿的菌落平均 数乘以稀释倍数，即为每克（或每mL）检样中所含霉菌数。 6．7报告 每克（或每mL）饲料中含霉菌数以个/g（个/mL）表示。 A （补充件） 除特殊规定外，本标准所用化学试剂为分析纯或化学纯；生物制剂为细菌培养用；水 为蒸馏水。 A1 A1.1成分 硝酸钠(GB 636) 2 g 磷酸二氢钾(GB 1274) 1 g 硫酸镁(MgSO?7 HO，GB671) 0.5 g 42 氯化钾(GB 646) 0.5 g 硫酸亚铁(GB 664) 0.01 g 氯化钠(GB 1266) 60 g 蔗糖(HG 3—1001) 30 g 琼脂 20 g 蒸馏水 1000 mL A1.2制法 加热溶解,分装后,115?高压灭菌30 min.必要时,可酌量增加琼脂。 A2.1成分 氯化钠（GB 1266） 8.5 g 蒸馏水 1000 mL A2.2制法 加热溶解,分装后,121?高压灭菌30 min. 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。 本标准由中国兽药监察所负责起草。 本标准主要起草人李公喆、杨玮云。