鹅大肠杆菌的分离鉴定

鹅大肠杆菌的分离鉴定 试验研究 鹅大肠杆菌的分离鉴定 周宏伟,施万富,孙如林 (1.金宇保灵生物药品仃限公司,内蒙占呼和浩特010030;2.利拉伐(上海)乳业机 械有限公司内蒙占办事 处,内蒙I呼和浩特010010;3.内蒙占艾迪动物标识技_术有限公司,内蒙古呼和浩 特010030) 鹅大肠杆菌病是一种原发或继发性的鹅肠道 传染病,一年阴季均可发生和流行,且流行地区相 当广泛,多为慢性经过该病主要侵害鹅的生殖器 官,发病率和死亡率高,常造成巨大的经济损失, 严重危害养鹅业的发展.笔者从陕西某鹅场病鹅 体内分离到一株细菌,将分离菌通过培养特性,菌 体形态,菌落形态,染色特性,生化试验等一系列 的系统鉴定,并进行实验窒诊断,确定该菌为鹅 大肠杆菌.动物试验证明,该菌株对雏鹅有很高的 感染率和致死率. 1材料 1.1病料来源 病料采集于陕西关中地区疑似鹅大肠杆菌感 染的鹅场.采集病鹅的脾脏,肝脏,心血和腹水,4 保存备用. 1.2培养基 鲜血琼脂,普通琼脂,麦康凯琼脂,半固体糖 发酵培养基,普通肉汤,M—R,V—P,靛基质,硝酸 盐利用试验,柠檬酸盐利用试验等培养基,按文献 [1]方法制作. 1.3主要试剂 M—R,V—P,靛基质,氧化酶,接触酶,硝酸盐还 原试验应用试剂以及革兰氏染色液,美蓝染色液 等,均按文献[2]方法配制. 1.4试验动物 20日龄雏鹅购于西北农林科技大学畜牧站: 1.5微量糖发酵管 微量糖发酵管由上海医学化验所试剂厂生 产,批号20060802 收稿日期:2007一l2—24 作者简介:周宏伟(1977一),女,助理兽医师,主要 从事疫苗质量监督工作. /j .?箜塑一 \\,二/// 摘要:鹅大肠杆菌病是一种原发或继发性 的鹅的肠道传染病,主要侵害鹅的生殖器 官,发病率和死亡率高.该试验从病鹅体内 分离到一株细菌,对分离菌通过培养特性, 菌体形态,菌落形态,染色特性,生化试验等 一 系列的系统鉴定,并进行了实验室诊断, 确定该菌为鹅大肠杆菌.动物试验证明,该 菌株对雏鹅有很高的感染率和致死率. 关键词:分离;鉴定;大肠杆菌;鹅 中图分类号:$858,335,12文献标识码:A 文章顺序编号:l672—5190(2008)O3,oo32—02 2方法 2.1发病情况 . 某鹅场有不同日龄的雏鹅及青年鹅1.2万只 青年鹅首先发病,随后雏鹅开始发病,其余3批随 后也发病,发病数随时间呈递增状态,1周时问共 死亡1100只鹅发病鹅表现为精神不振,羽毛蓬 乱,缩颈,闭目呆立,排黄白色稀粪,粪便玷污肛门 周围利毛.食欲减少或废绝,饮水增多.部分雏鹅 可见结膜发炎,眼睑肿胀,流泪,有的上下眼睑粘 连,严重者头部,眼睑,下颌部分出现波动感,尤以 下颌部明显..有的鹅当天死亡,有的发病后5,6d死 亡,产蛋母鹅表现精神沉郁,产蛋减少或停产,产软 壳蛋,行动缓慢,常蹲伏于地,离群落后;病鹅肛门 周围玷污发臭的排泄物,排泄物中混有蛋清,凝固 的蛋白或卯黄小块;病鹅体温升高,食欲减少或废 绝,渴欲增加,呼吸难,气喘,喜卧,站立不稳. 2.2细菌分离 无菌采取病鹅的睥脏,肝脏,心血和腹水于鲜 血琼脂平板上划线分离,37有氧条件培养24h, 可疑菌落接种于普通肉汤,再划线于鲜血琼脂平 畜牧与饲料科学’rn.dnm)【@《一_c0暑 板上,挑取单个菌落经涂片,染色,镜检,证实为纯 培养物,将其接种于鲜血琼脂斜面上进行培养,得 到纯培养物 分离菌接种于普通琼脂平板,鲜血琼脂平板, 麦康凯琼脂平板,j三糖铁琼脂斜面,普通肉汤等培 养基中,37?培养,并观察其生长表现. 2.3分离细菌形态观察及培养特性观察 取初次分离及纯培养的细菌.涂片,染色,镜 俭,观察分离菌在同培养基的生长情况及菌落 情况采集具有典型病变器官作为细菌分离材料. 无菌取病料直接在麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼 脂平板上划线培养,置37?恒温箱培养24h,在 麦康凯琼脂平板上可生成亮红色菌落,菌落较大, 表面光滑,边缘整齐.在伊红美蓝琼脂平板上生长 的菌落大多为呈特征性黑色闪光的较大菌落.每 个病例都可从琼脂上挑取3,5个疑似菌落,分别 接种作纯培养,以供菌属确定. 2.4生化试验 用分离菌纯培养物进行糖发酵试验,靛基质 试验,M—R试验,V—P试验,柠檬盐利用试验,硫化 氢产生,接触酶试验,氧化酶试验,硝酸盐还原试 验等’引 2.5增菌纯培养 对生化试验鉴定为大肠杆菌的菌株,无菌接 种普通肉汤培养基培养,置37?温箱20hI5. 2.6动物试验 l5只20日龄雏鹅随机分为2组.第1组l0 只,腹腔注射0.2mL/只24h肉汤培养物(含菌量 1.5×10efu/mL);第2组5只,为空白对照组,腹 腔注射0.2mL/只灭菌普通肉汤.注射后隔离饲 养,观察其发病及死亡情况,对死亡鹅立即解剖, 无菌采取肝脏,脾脏病料涂片,革兰氏染色,镜检, 并在麦康凯琼脂平板上划线分离培养. 2.7回归动物后分离菌株的生化试验 用接种菌液后死亡的雏鹅肝脏和脾脏中分离 的菌落作生化试验. 3试验结果 3.1剖检结果 鼻腔内有叮挤出的黏液,口腔中有黏稠的分 泌物;股内侧皮下出现点状或斑块状出血.喉头点 状或块状出血,气管黏膜充血,气管环状出血,气 管内有黄白色黏液;肺充血,淤血,气囊混浊,有 黄白色块状于酪样物质存在;肝脏表面附有纤维 素性渗出物;肠道有卡他性炎症,肠黏膜充血,出 表1生化试验结果 试验研究 注:0表示产酸产气. 血,有大量的溃疡灶,十二指肠和直肠出血尤为严 重,盲肠扁桃体水肿,出血,坏死;泄殖腔条状出 血;大脑,小脑有时有充血,出血的变化. 3.2分离培养和镜检 无菌分别接种普通营养琼脂,麦康凯和鲜血 琼脂培养基,37?培养,24h后观察,形成圆形,表 面光滑湿润,边缘整齐,灰白色半透明的中等大小 的菌落;鲜血培养基上有一种与上述菌落相似并 且呈B溶血;在麦康凯琼脂平板上形成圆形,表面 光滑,湿润,边缘整齐的红色小菌落.在营养肉汤 中生长呈均匀混浊,管底有絮状沉淀,振摇则呈絮 状分散,液面有菌环.培养物涂片,经革兰氏染色 镜检可见革兰氏阴性,中等大小的杆菌,两端略 圆,多单个存在.也有成双或聚集成团.美蓝染色 无两极着色现象. 3.3生化鉴定 能分解葡萄糖,乳糖,麦芽糖,不产生硫化氢, M—R试验阳性,V—P试验阴性,不液化明胶,不 分解尿素,不能利用柠檬酸盐.该菌在三糖铁琼脂 斜面上培养后,使其斜面,底部均变黄,且有气泡 产生(见表1). 3.4致病性试验 腹 郁 检 有 的 麦 凯 4 集 体 的 菌 试验研究 不同形态氮肥对桂牧一号杂交 象草农艺性状和产量的影响 刘小飞,唐晓玲,阳素兰 (湖南环境生物职业技术学院,湖南衡阳421005) 桂牧一号是禾本科牧草中的优良品种,是广 西畜牧兽医研究所于1992年采用杂交狼尾草 (Pennisetumamericanurri~Purpureum)为母本和矮 象草(Ppurpureumc.Mott)为父本进行有性杂 交,经多年选育获得的新型杂交象草.该草具有 很强的杂种优势,产量高,质量好,质地柔软,适 口性好,适于饲喂牛,羊,鹅,兔,鱼等草食动物. 近几年来,在我国南方大面积推广利用,广西,广 东,湖南,江西等省,自治区种植面积约为3.33万 hm,已成为我国南方丘陵,湖区的主要多年生当 家草种之一.但是,关于桂牧一号的产量和品质 受外界环境影响的研究报道甚少,特别是在我国 南方的土壤,气候条件下应如何施氮肥尚未报 道.因此,笔者研究了不同氮肥种类及水平对桂 牧一号产量和农艺性状的影响,以期找准氮肥种 类,实现减少肥料用量,提高肥料利用率,稳定牧 草产量,改善牧草品质,提高种草的经济效益,形 摘要:研究刈割后施不同形态和用量的氮 肥对桂牧一号杂交象草农艺性状和产草量 的影响.试验采用完全随机区组设计,根据 每次刈割后施氮肥不同而分为7个处理. 结果表明,同一施氮水平下,施碳铵有更利 于株高和叶长的增长,施尿素有利于叶宽 的增长,施碳铵和尿素之间分蘖数差异不 大;平均叶长随着施氮量的增加而下降;株 高随着施氮量的增加而增加;分蘖数随着 施氮量的增加呈现出先上升后下降的趋 势;试验组鲜草和干草产量均比对照组有 所增加. 关键词:桂牧一号杂交象草;尿素;碳铵;农艺性状; 产草量 中图分类号:Q949.714,2文献标识码:A 文章顺序编号:1672—5190(2008)03—0034-04 收稿日期:2008—0I-2I 基金项目:湖南环境生物职业技术学院院长基金成一个科学,经济,易被广大农民 接受的施肥模 (YJ07-05).式,对指导湖南省乃至整个亚热带红黄壤地区桂 作者简介:刘小飞(9--),女,在读硕士研究生,牧一号杂交象草生产,提高种草的科 技含量.具有 主要研究方向为牧草的研究与开发.特别重要的意义 . .....址.......址.....St..............龇.......1l上....1l上. 20日龄雏鹅腹腔感染发病死亡,出现与自然病例 相似的临床症状和病理变化],这表明大肠杆菌感 染鹅和雏鹅,其致病性强,病程短,死亡快. 参考文献: [1]陈一兵,刘建风,印继华,等,鹅感染多杀性巴氏杆菌 和大肠杆菌的分离鉴定[J]动物医学,2004,(8):54— 56. [2]李健强,李六金,兽医微生物学实验实习指导[M]西 安:陕西科学技术出版社,1999.44—48. 廖延雄兽医微生物实验诊断手册[M]北京:中国农 业大学出版社,1995.8l—ll4 朱明,等.盐城地区鹅大肠杆菌的分离与鉴定[J].中 国兽医杂志,2003,(2):24—25. 韩文瑜,何昭阳,刘玉斌.病原细菌学检查技术[M]. 24 长春:吉林科技出版社,1998.23— 曹澎泽,郭玉瑛兽医微生物学及免疫学技术[M]. 北京:北京农业大学出版社,1992.1—53. 黄缨,范根成.鸡大肠杆菌病的特征及防制[J],动物 科学与动物医学,2002,l9(5):52.口 ,j,J,J 畜牧与饲料科学’dnm)(ky@vb【)m 期 3一 第一 年一吣一加一