反相高效液相色谱法测定奋乃静片含量

反相高效液相色谱法测定奋乃静片含量 [摘要] 目的,建立测定奋乃静片含量的HPLC法。方法, 采用Diamonsil TM C18色谱柱,4.6 mm×250 mm,5 μm,, 流动相为0.09 mol/L醋酸铵,pH 3.0,-甲醇,30?70,,流 速为1.0 ml/min ,检测波长为256 nm,柱温为40?。结果, 奋乃静在0.01,0.50 mg/ml范围内线性关系良好,r=0.999 9,n=5,,平均回收率为90.0%,RSD为1.8%,n=9,。结 论,本方法简便、快速、准确,专属性好,可用于奋乃静片 的含量测定。 [关键词] 奋乃静片,HPLC,含量测定 [中图分类号]R927.2 [文献标识码]A [文章编 号]1673-7210,2009,06,c,-054-03 Content determination of Perphenazine Tablets by HPLC WANG Xiao’e (People′s Hospital of Youxian, Youxian 412300, China) [Abstract] Objective: To develop an HPLC method for the determination of the content of Perphenazine Tablets. Methods: Diamonsil TM C18 column(4.6 mm×250 mm, 5 μm) wasused, the mobile phase was 0.09 mol/L 1 ammonium acetate (with acetic acid to pH 3.0)-methanol(30?70) at the flow rate of 1.0 ml/min. The UV detection wavelength was 256 nm, and the column temperature was 40?. Results: The linear range was 0.01-0.50 mg/ml(r=0.999 9, n=5) and the average recoveries was 99.0%(n=9) for perphenazine. Conclusion: The method proposed for determination of the content of Perphenazine Tablets was simple, rapid, accurate and specific, and can be used to determine the content of Perphenazine Tablets. [Key words] Perphenazine Tablets; HPLC; Content determination 奋乃静,perphenazine,为化学合成的吩噻嗪类抗精神 病药。抗精神病作用较氯丙嗪强5,10倍,而镇静、安定作 用较弱,主要用于精神分裂症症状性精神病,临床上除应用 于严重精神病患者的治疗外,还用于镇吐、抗组胺以及帕金 森综合征的治疗[1]。虽然其药理作用尚未完全清楚,但普遍 认为奋乃静的作用机制主要与其阻断中脑边缘系统及中脑 皮层通路的多巴胺受体有关。《中国药典》2005版分别采用 滴定法和分光光度法对奋乃静原料药和片剂进行分析[2],还 可采用流动注射化学发光法、褶合光谱法、极谱法、二阶导 数光谱法、毛细管电泳法-安培检测法、分子印迹-后化学发 2 光法、高效液相色谱法等方法[3-7]进行分析。本文在文献报道的色谱系统的基础上进行优化,建立了反相高效液相色谱法测定奋乃静片含量的方法,该方法灵敏、准确、简便、快速,为更好地控制该药品的质量提供了依据。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Alliance高效液相色谱仪,包括Waters 2695分离单元,四元梯度洗脱的溶剂输送系统,四通道在线真空脱气机,可容纳120个进样瓶的自动进样系统,,Waters 2996二级管阵列检测器,柱温箱,Empower色谱工作站,Mettler AE163电子分析天平,PS-100超声仪,Millipore Q超纯水仪,MP200 pH计,UV-1三用紫外分析仪。 1.2 试药 奋乃静对照品,中国药品生物制品检定所,批号为100133-200602,,奋乃静片,苏州天力士帝盟药业有限公司,批号为200805181,江苏黄河药业股份有限公司,批号为061226,广东彼迪制药有限公司,批号为20080701D,规格均为2 mg/片,,色谱纯甲醇,天津市四友精细化学品有限公司,,分析纯醋酸铵及冰醋酸,广州化学试剂厂,,水为Millipore18兆净化的超纯水。 2 方法与结果 2.1 色谱条件及相关考察 3 2.1.1 色谱条件的考察 2.1.1.1 检测波长的选择从紫外二极管阵列检测器提取的光谱图,图1,可见,奋乃静在255.7 nm波长处有最大吸收,因此选择256 nm波长作为检测波长。 图1 奋乃静的紫外光谱图 Fig.1 UV spectra for Perphenazine 2.1.1.2 流动相系统的优化文献[6]采用0.03 mol醋酸铵-甲醇,23?77,的色谱分离系统测定奋乃静的含量。本文在该色谱条件的基础上进行优化,应用于奋乃静的测定,效果良好,重点考察pH值和盐浓度对分离分析的影响,以优化最佳色谱系统。 ?pH值的影响,用磷酸调节0.03 mol/L的磷酸二氢钾溶液至不同的pH值,3.0、3.5、4.0、5.0、6.8,,分别与甲醇配成流动相。固定流动相配比为0.03 mol醋酸铵-甲醇,30?70,,流速为1.0 ml/min,柱温为40?。分别进样,记录色谱图,比较流动相的pH值对保留时间、峰形,拖尾因子,和柱效,理论塔板数,的影响,1,。结果显示,随着流动相pH值的增大,奋乃静峰的保留时间延长,拖尾因子增大,理论塔板数减小,考虑到色谱柱对pH值的耐受程度,选择流动相的pH值为3.0。 表 1 流动相的pH值对保留时间、峰形和柱效的影响 Tab.1 The effect of pH on retention time, peak shape 4 and column efficiency ?盐浓度的影响,配制不同浓度的醋酸铵溶液,0.01、0.03、0.06、0.09、0.10 mol/L,,用冰醋酸调节pH值至3.0,并分别与甲醇配成流动相。固定流动相配比为醋酸铵-甲醇,30?70,,流速为1.0 mol/L,柱温为40?。分别进样,记录色谱图,比较醋酸铵浓度对保留时间、峰形,拖尾因子,和柱效,理论塔板数,的影响,表2,。结果显示,醋酸铵浓度对保留时间影响较小,拖尾因子随着醋酸铵浓度的增加而降低,而理论塔板数则随之增大,综合考虑色谱柱的寿命及拖尾因子,不采用0.1 mol/L的浓度,因此选择醋酸铵的浓度为0.09 mol/L。 表 2 流动相的醋酸铵浓度对保留时间、峰形和柱效的影响 Tab.2 The effect of concentration of ammonium acetate on retention time, peak shape and column efficiency 5 2.1.2 色谱条件色谱柱为Diamonsil TM C18,4.6 mm×250 mm,5 μm,,流动相为0.09 mol/L醋酸铵,用醋酸调至pH 3.0,-甲醇,30?70,,流速为1.0 ml/min,检测波长为256 nm,柱温为40?。 2.2 系统适用性试验 精密称取对照品适量,加甲醇制成浓度为0.1 mg/ml的溶液,在上述色谱条件下进样20 μl,记录色谱图,图2,,理论板数大于2 000。 2.3 专属性试验 2.3.1 酸破坏溶液取奋乃静对照品1 mg,加甲醇1 ml使溶解,加1 mol/L盐酸1 ml,放置30 min,加1 mol/L氢氧化钠溶液1 ml,用甲醇定容至10 ml。 2.3.2 碱破坏溶液取奋乃静对照品1 mg,加甲醇1 ml使溶解,加1 mol/L氢氧化钠1 ml,放置30 min,加1 mol/L盐酸溶液1 ml,用甲醇定容至10 ml。 2.3.3 氧化破坏溶液取奋乃静对照品1 mg,加甲醇1 ml使溶解,加1%过氧化氢溶液1 ml,放置30 min,用甲醇定容至10 ml。 2.3.4 高热破坏溶液取奋乃静对照品1 mg,加甲醇定容至10 ml,于90?加热放置2.5 h。 2.3.5 光照破坏溶液?取奋乃静对照品1 mg,于紫外光下照射8 h,加流动相定容至10 ml。?取奋乃静对照品1 mg, 6 加流动相定容至10 ml,于紫外光下照射2.5 h。 取上述溶液,按“2.1”项色谱条件分别进样20 μl,记录色谱图,以考察奋乃静峰与杂质峰的分离情况。结果表明,各破坏条件下的降解产物峰对奋乃静峰无干扰,分离效果良好,说明该方法专属性良好,图3,。从图中也可以看出,奋乃静对酸、碱和热均较稳定,无杂质峰出现,氧化破坏后,有杂质峰出现,说明奋乃静对氧化剂不稳定,应避免其氧化,固体奋乃静经光照破坏8 h后,无杂质峰产生,而奋乃静溶液经光照破坏后,出现明显的杂质峰,说明奋乃静溶液对光极不稳定,应避光保存。 2.4 线性关系考察 避光操作,以下实验均避光操作,。精密称取奋乃静对照品约100 mg于100 ml容量瓶中,加甲醇60 ml使溶解并稀释至刻度,作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液1、5、1、5、5 ml于100、100、10、25、10 ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成0.01、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/ml的奋乃静对照品溶液,分别进样20 μl,记录色谱图,以浓度C,mg/ml,对峰面积A进行线性回归,得线性方程为A=98 953 254C+259 369,r=0.999 9。结果表明,奋乃静的浓度在0.01,0.50 mg/ml范围内与峰面积线性关系良好。 2.5 精密度试验 7 取同一份对照品溶液连续进样6次,峰面积RSD为0.2,。 2.6 重复性试验 取同一批号供试品溶液6份,按“2.10”项下操作,平均含量为96.2%,RSD为0.9%。 2.7 回收率试验 精密称取奋乃静对照品约100 mg,置100 ml容量瓶中,加甲醇60 ml使溶解并稀释至刻度,作为对照品溶液。取供试品50片,精密称定,研细,精密称取适量,约相当于奋乃静5 mg,,置100 ml量瓶中,共9份。分别精密量取对照品溶液3、5、7 ml各3份于供试品量瓶中,各加入甲醇60 ml使溶解,并稀释至刻度,按“2.10”项下条件测定,测得平均回收率为99.0 %,RSD为1.8%,n=9,。 2.8 稳定性试验 取同一份样品溶液,分别于0、1、2、3、4、5、6、8 h取20 μl进样,记录色谱图,奋乃静的峰面积基本不变,RSD为0.7%。结果表明,奋乃静注射液在8 h内稳定性良好。 2.9 检测限和定量限 以信噪比为3?1,测得系统的最低检测浓度为0.2 μg/ml,即最低检测限为4 ng,以信噪比为10?1,测得系统的最低定量浓度为0.6 μg/ml,即最低定量限为12 ng。 2.10 样品含量测定 8 精密称取奋乃静对照品约10 mg,置100 ml容量瓶中,加甲醇60 ml使溶解并稀释至刻度,作为对照品溶液。取供试品20片,精密称定,研细,精密称取适量,约相当于奋乃静5 mg,,置50 ml量瓶中,加甲醇60 ml使溶解并稀释至刻度,作为供试品溶液。取上述两种溶液各20 μl分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,结果厂家为苏州天力士帝盟药业有限公司、江苏黄河药业股份有限公司、广东彼迪制药有限公司的供试品含量测定结果分别为94.9%、97.5%、96.0%。 3 讨论 奋乃静在水中几乎不溶,因此配制对照品和供试品溶液时,选用甲醇使溶解并定容。本文建立的色谱系统具有流动相组成简单,对色谱柱损伤小的优点,用于奋乃静的含量测定,快速、准确、专属性强。 [参考文献] [1]汪洋,陈太友.齐拉西酮与奋乃静治疗精神分裂症的临床疗效及安全性比较[J].中国药房,2008,19(26):2048-2050. [2]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:328-329. [3]弋景峰,韩小年,于春玲,等.奋乃静药物的流动注射化学发光测定方法的建立[J].西安交通大学学报,2006,27(5):513-516. 9 [4]AM Galvez, JVG Mateo, JM Calatayud, et al. Simultaneous dissolution profiles of two rugs, sulfadiazine-trimethoprim and amitriptyline-perphenazine, in solid oral dosage forms by a FIA manifold provided with a single spectrophotometric detector[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2002(30):535-545. [5]牛卫芬,吕九如.高锰酸钾-鲁米诺化学发光体系分子印 迹-后化学发光法测定奋乃静[J].分析化 学,2007,35(2):281-284. [6]朱军,黄伟桥,刘伟忠,等.反相高效液相色谱法测定人血 浆奋乃静浓度[J].医药导报,2007,26(7):733-734. [7]邱颖,,赵佩莲,李玉兰.反相高效液相色谱法测定奋乃 静片的含量[J].中国药师,2008,11(12):1470-1471. ,收稿日期,2009-03-20, 10