提高机采血小板血浆氧含量对血小板功能影响的探讨

提高机采血小板血浆氧含量对血小板功能影响的探讨 提高机采血小板血浆氧含量对血小板功能影响的探讨 [字体:大 中 小] 作者:詹彤，肖建宇，陶靖，缪锡凤，刘衍春，唐荣才 【摘要】 为了探讨提高机采血小板血浆中的含氧量对血小板功能的 影响 ， 将机采血小板样品分为实验和对照2组。实验组在无菌条件下提高机采血小板 血浆中含氧量(溶解氧)后，两组同时放置(22?2)?水平振荡的血小板振荡仪 器中保存。分别在血小板保存0、1、2、3、4、5天检测血小板量数量、血小板 聚集反应功能、血小板液乳酸含量和血小板CD62p达量。结果显示: 2组的 血小板数量、血小板聚集反应功能均随保存时间延长而下降;2组间比较，血 小板数量无显著性差异(P>0.05)，血小板聚集反应功能实验组在保存2-3天明 显好于对照组(P<0 05)。2组的血小板乳酸含量、血小板CD62p表达量均随保 存时间延长而升高;2组间比较，实验组的血小板乳酸含量和血小板CD62p表 达量在保存1-3天时低于对照组(P<0.05);机采血小板的含氧量在0天时实验 组显著高于对照组(P<0.01)。结论:提高血小板血浆中的含氧量(溶解氧)可 弥补保存袋中血小板代谢的供氧不足，提高血小板的有氧代谢和血小板的保存 质量。 【关键词】 血小板; 溶解氧; 乳酸; CD62p Influence of Raising Oxygen Content on Function of Platelet Concentrate During Preservation Abstract To explore the influence of raising oxygen (dissoved oxygen) content on function of platelet concentrate，the platelet concentrate was prepared by a CS-3000 plus blood cell separator. Experiments were divided into 2 groups: test group and control group. After raising oxygen content in platelet plasma under sterile operation，the platelet samples of two groups were preserved in oscillator with horizondal oscillation at 22?2?. The platelet count，platelet aggregation rate，lactic acid content and CD62p expression level of platelet were detected on 0，1，2，3，4，5 days of platelet preservation. The results showed that the platelet count and platelet aggregation rate decreased with prolongation of preserved time，while the lactic acid content and CD62p expression level of platelet increased gradually. Compared with control group，there were significant diffrerences in aggregation rate of platelet preserved for 2-3 days，and in CD62p expression level of platelet preserved for 1-3 days，while significant diffrerence was found in lactic acid content of platelet preserved for 1-3 days. It is concluded that raising content of oxygen in platelet plasma can provide more oxygen to compensate oxygen supply deficiency for platelet metabolism and improve the efficiency of platelet oxygenic metabolism and the quality of platelet during preservation. Key words platelet; dissolved oxygen; lactic acid; CD62p 血小板输注是成分输血的重要组成部分，输注血小板对各种原因引起的血小板减少性和(或)功能障碍性出血具有不可替代的 治疗 作用。 目前 ，血小板常规22?振荡保存，同时采用透气性好的保存袋，改善呼吸环境，既可提高血小板保存质量，又减少血小板的功能损伤。我们根据这一作用机理，采取振荡保存的同时提高保存袋中机采血小板血浆中的含氧量(溶解氧)， 研究 血小板在保存期中的变化，现将结果报道如下。 材料和 方法 设备与材料 Baxter CS-3000 plus 血细胞分离机及配套的全密闭塑料套材(美国Baxter产品)，Sysmex Kx-21 血细胞 仪及配套稀释液 (日本产品)，Heraeus primoR低温台式离心机(德国产品)，LG-PABER-?血小板聚集仪。FACS Calibur 流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司产品)。血气分析仪(AVL LIST GmbH Medizintechnik KlEiststraBe 48，8020 Graz，奥地利)。氧苏TM 医用自动充氧器(含99.9%的医用活性氧，经Co60灭菌，吉药管械(准) 字2000第2560068号)。 机采血小板 由江苏省血液中心成分室提供。血小板按CS-3000 plus 血细胞分离机操作规程采集，ACD-A:全血=1?10抗凝，血小板采集量约为2.5×1011/袋。 血小板处理保存 血小板产品充分摇匀后，取30 ml血小板制品，分装在2个保存袋中，1袋为对照组(Cc组)，1袋为实验组(Tc组)，放置无菌室，用氧苏TM 医用自动充氧器在无菌条件下将充氧器钢针插入保存袋的联接管中，按指示标向轻轻拧动充氧器阀体，调整适当气量后进行充氧10分钟，在提高机采血小板血浆内溶解氧含量后，用热合机热合联接管并分别放置于(22?2)?水平振荡的血小板振荡仪保存。 血氧溶解度测定 于充氧前、后即刻从机采血小板血浆保存袋内各取0.5 ml样品，放入血气分析仪芯片中进行血气溶解度测定，作复管，取均值。 血小板计数 于保存前(0天)和保存后1、2、3、4和5天，分别从振荡的血小板保存袋内各取1 ml样品，摇匀后，抽取100 μl，用稀释液作5倍稀释，用Sysmex Kx-21血细胞分析仪计数，作复管，取均值。 , 1 , 2 , 下一页 2, 欢迎浏览更多首页 ? 医学论文 ? 其它医学论文文章 [字体:大 中 小] 血小板聚集功能的测定 分别从保存0、1、2、3、4、5天的样本中取样，将已加入250 μl的PPP血浆的测试杯放入血小板聚集仪(LG—PABER—?型)中，测定PPP血浆的OD值，将样品PRP血浆加入测试杯中，加入测试球，预温2分钟后，用加样器吸取没食子酸丙酯溶液CPG(美国ACS公司)加入测试杯中，使终浓度为300 μmol/L，开始检测，最大测定时定为360秒，测定最大血小板聚集率。 血小板液乳酸含量测定 以NAD+为氢受体，LDH催化乳酸脱氢产生丙酮酸，使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物，呈色物的吸光度在530 nm时与乳酸含量呈线性关系。试剂盒由南京建成生物 研究 所提供，操作按说明进行。分别对保存0、1、2、3、4、5天的样本测定。 血小板CD62p表达量测定 分别对保存0、1、2、3、4、5天的血小板取样稀释，处理后取100 μl样品于测试管中，设置对照，在FACS Calibur 流式细胞仪进行CD62p表达量检测。 统计学处理 各测定值组间均数比较用t检验。 结 果 表1的数据显示了实验组和对照组在0天的机采血小板血浆中的含氧量(溶解氧)。由表1可见，实验组含氧量显著高于对照组(P<0.01)。表2的数据显示了实验组和对照组的血小板计数、血小板聚集反应功能、血小板液乳酸含量、血小板CD62p表达量在1-5天保存期内的变化。由表2可见，随着浓缩血小板保存时间的延长，两组血小板计数均呈下降趋势，两组之间的血小板计数比较无显著性差异(P>0.05)。血小板液乳酸含量均不断上升，两组之间比较，保存1-3天的乳酸含量实验组明显低于对照组 (P<0.05)，而4-5天段无显著性差异(P>0.05)。血小板聚集反应功能均呈下降趋势，两组之间比较，在2-3天差异有显著性(P<0.05)。血小板CD62p表达量变化随保存时间呈上升趋势，实验组在保存1-3天时段明显低于对照组(P<0.05)。Table 1. Contents of dissolved oxygen in the platelet concentrates of two groups at day 0 (略) 讨论 目前 ，对血小板保存 方法 主要有3种,1,，其中常规的方法是在22?条件下振荡保存;随着透气性差、气体交换差的旧的血小板保存袋被透气性好的PVC袋取代，保存过程中乳酸聚集下降，血小板的保存时间及保存效果有了明显提高,2,。 血小板在保存过程中的能量代谢是十分活跃的，能量主要来源于无氧酵解、有氧酵解及6G旁路。血小板代谢中产生的ATP为101 μg/(g?h)，其中来源于无氧酵解占46%，三羧酸循环41%，6G旁路占13%,3,。目前在保存浓缩血小板时，随着保存时间的延长，由于保存体系仍然存在供氧不足，导致糖无氧酵解加强，大量乳酸聚集，使保存体系的pH值下降,4,。普遍认为:如果新鲜血小板体系中pH值下降至6.7以下，血小板的功能出现损伤，pH值下降至<6.3时，血小板的损伤将不可逆转,2,。本试验结果说明，乳酸含量随着血小板保存时间的延长均在增加，实验组的含量要低于对照组，且在保存期1-3天时间段差异有显著性(P<0.05)。 GMP-140(CD62p)是血小板活化的标志物之一,5,，Neumller等,6,的研究发现，在血小板被活化时CD62p是释放最多的糖蛋白。当血小板破坏后，其胞浆内CD62p糖蛋白进入血浆，CD62p含量与血小板破坏程度呈正相关。在保存浓缩血小板时，存在多种激活或破坏因素:首先是血小板浓度的升高，导致血小板相互间的接触增多,7,，其次由于血小板的代谢活性较高，保存袋的透气性差，耗氧增加时供氧不足，使大量乳酸堆积，酸度升高,8,。我们在试验中也证明，血小板CD62p表达量两组都随保存时间延长而不断上升，实验组的表达量要低于对照组，且在保存期1-3天时间段差异有显著性(P<0.05)。 血小板在保存中损伤使血小板的功能下降甚至完全丧失。有实验检测表明，保存5天的血小板ADP诱导的聚集反应性下降为原来的29%，并随保存时间延长而继续下升,9,。在本实验中，由CPG诱导的血小板聚集反应功能随着保存时间延长、乳酸含量堆积、CD62p表达量上升而下降，但实验组要好于对照组，且保存2-3天时间段差异有显著性(P<0.05)。 因此我们认为，提高机采血小板血浆中的含氧量(溶解氧)可以弥补血小板保存袋对代谢的供氧不足，提高血小板的有氧糖代谢，降低无氧酵解及乳酸的产生量，使pH值的快速降低减缓，从而减少血小板活化和减弱血小板聚集反应功能的下降，有利于血小板功能的保存，特别是在前3天的保存。 对于提高含氧量(溶解氧)程度、充氧途径以及其它作用，有待以后做进一步的深入研究。 【 参考 文献 】 1 曹伟，韩颖. 冷冻干大柔保存血小板的研究进展. 中国 输血杂志， 2003;16: 361-363 2 Bertolini F，Porretti L，Lauri E， et al. 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Vox Sang， 1994; 67:154-159 . , 上一页 , 1 , 2 1, 欢迎浏览更多首页 ? 医学论文 ? 其它医学论文文章