主动免疫治疗复发型人乳头瘤病毒感染

主动免疫治疗复发型人乳头瘤病毒感染 ------精品文档!值得拥有～------ 主动免疫治疗复发型人乳头瘤病毒感染 作者:张菊 闫小君 曹云新 段杰 严泉剑 候瑜 苏成芝 【关键词】免疫疗法 免疫疗法;乳头状瘤病毒，人;尖锐湿疣;复发 关键词: 摘要:目的观察以树突细胞疫苗为主的主动免疫Medicine治疗，对人乳头瘤病毒感染致反复复发生殖器尖锐湿疣的临床疗效.将39例反复复发3次以上，顽固型尖锐湿疣患者，按知情同意原则，随机分为治疗组和对照组，两组均首先行冷冻或高频电刀治疗，以去除大部分疣体组织，随后对照组用干扰素、抗病毒药物治疗，治疗组则采用主动免疫治疗.结果治疗组复发率为20%，复发间期平均4wk，细胞免疫功能有显著改善;对照组复发率80%，复发间期7d.结论主动免疫治疗方法对于反复复发、顽固型人乳头瘤病毒感染的生殖器尖锐湿疣有显著疗效，其机制有待进一步研究. Keywords:immunotherapy;papillomavirus，human;condy-lomaacuminata;recurrence Abstract:AIMToinvestigatewhetherimmunotherapyhavethecapacitytos timulateimmunoresponseagainstcondylomaacuminatum(CA)causedbyhumanpapillomavirus(HPV)， ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ andwhethertheimmunotherapyiseffectivetorecurrentCA.METHODSThirty-ninecasesofrecurrentCAwereran-domlydividedintotwogroups:thetreatmentgroupandthe controlgroup.Theformercontained19casesandthelater20cases.Allcasesinbothgroupsweregivenlaserorfreezingtherapyatfirst， thencasesincontrolgroupadditionallyac-ceptedINF-α andanti-virusdrug， casesintreatmentgroupadditionallyacceptedimmunotherapyonly.RESULTSRe-currentrateinthecontrolgroupwas80%， butinthetreat-mentgroup，therecurrentratewasonly20%， thetimebe-tweentreatmentandrecurrentbeing7daysinthecontrolgroupbut4weeksinthetreatmentgroup(P0.05)，andtheimmunefunctionsCD3， CD4，CD8wereimprovedinthetreatmentgroup (P0.05).CONCLUSIONImmunothera-pyincludingdendriticcellscanreducerecurrentrate， extendrecurrenttimeofCAcausedbyHPVandimprovepatients’ immunefunction. 0引言 随着社会活动的增加，人乳头瘤病毒感染有日益增多趋向.人乳头瘤 病毒感染与人类疾病，特别是恶性肿瘤及癌前病变也密切相关.临床观察 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 证实，顽固难治、反复复发型生殖器尖锐湿疣癌变率较高，危害性大，但目前，临床尚无有效的治疗方法.我们对难治性复发3次以上的生殖器尖锐湿疣患者，用主动免疫治疗方法治疗，较普通疗法取得良好疗效. 1和方法 1.1对象1998-01/1999-06收治的复发3次以上，难治性人乳头瘤病毒感染阳性的生殖器尖锐湿疣患者，符合条件者按知情同意原则，随机分为治疗组及对照组:治疗组患者19(男9，女10)例，平均发病年龄26岁，平均病程(12?3)mo，平均复发次数4次;对照组患者20(男8，女12)例，平均发病年龄27岁，平均病程(13?4.1)mo，平均复发次数4次.既往有心肾疾病、糖尿病或其他免疫系统缺陷疾病者不列入本研究，两组患者性别、年龄、病程、病情(包括发病部位及疣体面积). 经统计学处理，均无显著差异(P>0.05). 1.2方法两组患者均首先予以激光或冷冻治疗，以去除大部分肉眼可见的疣体组织，保留个别疣体作为治疗观察的靶皮损.然后，对照组用基因工程重组干扰素治疗，100,300万Ud-1，全身或局部应用，同时输注或服用抗病毒药物，疗程1mo;治疗组则采用主动免疫治疗方法，留取少许疣体组织提取抗原，同时抽患者外周血10,20mL，提取单个核细胞，常规方法培养树突细胞,1,，用相应的抗原诱导，活化致敏后，于发病部位皮 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 下注射，每周治疗1次，疗程为1mo.疗程结束时切取保留疣体组织送病检.全部病例随访6mo以上.结果判断包括:?临床指标:a.治疗后复发率，复发时间及次数;b.复发程度:面积，部位，疣体数量;c.并发症与转归.?实验室检测指标:a.人乳头瘤病毒聚合酶链方法(PCR)检测;b.细胞免疫功能检测CD3，CD4，CD8，CD4/CD8;c.病lixue理学检测. 2结果 2.1临床病情变化全部病例随访6mo后，治疗组19例中未复发者16例，占全部治疗组80%，3例复发者分别在疣体去除后6，4和3wk时复发，但复发程度较轻，仅又长出1,3个较小疣体，平均复发间期为4wk.再次切除及继续治疗后，未见复发.对照组20例中未复发者6例，占全部对照组30%，14例复发者在疣体去除后3d,4wk内复发，疣体生长较快，数目多且体积较大，随访观察期间需多次高频电刀切除，平均复发间期为7d，两组间复发间期有显著差异(P0.05). 2.2实验室检测指标变化?人乳头瘤病毒聚合酶链方法(PCR)检测结果变化:治疗组、对照组分别于治疗前及治疗1mo后，采用人乳头瘤病毒通用型引物，取病变部位皮肤组织或局部分泌物，于PCR扩增仪上做聚合酶链反应，PCR产物经20gL-1琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外分析仪下观察记录结果:治疗组病毒DNA转阴11例，占全部治疗组60%;对照组转阴者4例，占全部对照组20%.2mo后，再次复查，治疗组又有6例转阴，对照组则又有1例阴性者转阳.?于第1次治疗及最后1次治疗时取患者 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 抗凝静脉血1mL，用荧光抗体于流式细胞仪检测细胞免疫功能:CD3，CD4，CD8，用Excel软件分别对治疗组与对照组患者治疗前后数据做t检验.治疗组治疗前CD3，CD4，CD8，CD4/CD8较治疗后CD3，CD4，CD8，CD4/CD8， 而对照组治疗前CD3，CD4，CD8，CD4/CD8两组差异显著(P0.05，Tab1). 与治疗后CD3，CD4，CD8，CD4/CD8比较，两组无显著差异(P>0.05).治疗组部分患者主诉治疗局部有搔痒、灼热感，一般在注射细胞1d后即消失，无其他不适，血液中人乳头瘤病毒DNA的聚合酶链反应监测一直呈阴性，明无血行传播.而对照组因多次反复高频电刀切除，局部出现感染者有7例，有的患者同时出现抗病毒药物的毒副作用，如头痛，恶心，发热，停用药物后可缓解.?病理学检测:治疗组、对照组分别于治疗前及治疗3mo后，取病变部位皮肤组织送病检，HE染色可见治疗组皮损部位空泡细胞及紊乱血管扩张现象，在治疗后显著缓解或消失;对照组80%患者，则有乳头瘤样增生皮损复发. 表1治疗前后细胞免疫功能 略 3讨论 人乳头瘤病毒的感染十分普遍，它可通过直接或间接接触等途径传播，引起人皮肤、粘膜的多种乳头瘤和疣.据大量文献报道，近年我国人乳头瘤病毒感染所致生殖器尖锐湿疣，已占性传播疾病的第二位.研究表明，人乳头瘤病毒的感染与男性外生殖器癌、食管癌、宫颈癌和喉癌等发 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 病也密切相关,2-9,.与其他常见的病原体不同，由于病毒自身的结构及代谢特点，HPV仅仅局限于感染部位皮肤，极少或不入血，无系统感染相，病毒抗原与免疫细胞的接触机会少，极少发生抗原释放及抗原呈递，只能刺激机体产生轻微的免疫应答，故病毒不易被免疫系统清除，易致感染潜伏而反复发作，并且，普通的免疫调节药物效应欠佳,10-14,.近年来，对乳头瘤病毒感染相关癌症DNA，肽及细胞疫苗的研究取得了较大进展,15-26,.1999年vanDriel等,27,以HPV16型E7肽免疫宫颈癌患者，对早期病变患者取得一定疗效.陈必良等,28-30,采用反义寡核苷酸对HPV感染阳性的宫颈癌细胞起到抑制作用.目前认为，免疫反应的产生首先是由抗原提呈细胞捕获抗原，加工处理，传递后，引发一系列的特异性免疫应答，因此，抗原与抗原提呈细胞相互作用，是机体有效免疫应答的首要关键一步.树突细胞是功能最强的抗原提呈细胞，它能够显著刺激纯真型T细胞增殖，是机体免疫反应的始动者，在免疫应答的诱导中占独特地位.1998年，Ludewig等,1,应用淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒特异性肽GP33-41冲击树突细胞，诱导特异性抗病毒免疫取得成功.章卫平等,31,应用肿瘤细胞冲击的树突细胞回输体内，也获得明显的抗肿瘤效应.Schoell等,32,在体外实验，也获得了对有特异杀伤作用的免疫效应细胞.我们实验室将疣体抗原冲击过的树突细胞，输注于接种了疣体细胞的裸小鼠，也获得满意疗效. 我们发现，采用经抗原致敏活化的树突细胞为主的主动免疫治疗方法，对人乳头瘤病毒感染导致的反复复发，难治型生殖器尖锐湿疣，有令人满意的治疗效果.能够将普通疗法的复发率从80%降低至10%，大大改善患者细 ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ 胞免疫功能，防止进一步发生恶性病变.由于治疗中，采用患者自身细胞及疣体作为效应细胞及抗原，因此副作用小，费用低.我们还发现2例接受免疫治疗后复发的患者，经再次治疗后，未再复发.治疗组中，复发间期较以往显著延长，由原来的平均7d，延长为1,2mo，其确切机制尚有待进一步研究，可能与皮损局部显著改善的细胞免疫状态有关.我们的研究再次证明，细胞免疫功能在人乳头瘤病毒感染的转归中起至关重要的作用，而改善患者细胞免疫功能，则有助于清除病毒，防止机体细胞的进一步损害，大大提高疗效. 参考文献: ,1,LudewigB，EhlS，KarrerU，OdermattB，HengartnerH，ZinkernagelRM.Dendriticcellsefficientlyinduceprotectiveantivira ):3812-3818. limmunity,J,.JVirol，1998;72(5 ,2,QieHW，ChenWQ，LiHZ.Expressionofhumanpapillo-mavirusDNAinprimarylungcancertiss ue,J,.Di-siJunyiDaxueXuebao(JFourthMilMedUniv)，1999;20(9):759-761. ,3,DeVilliersEM，LavergneD，ChangF，SyrjanenK，TosiP，CintorinoM，SantopietroR，SyrjanenS.Aninterlaboratorystudytodeterminethepresenceofhumanpa pillomavirusDNAinesophagealcarcinomafromChina,J,.IntJCancer，1999;81(2):225-228. ------珍贵文档!值得收藏～----- ------精品文档!值得拥有～------ ,4,HuangPL，LuLG，ShiZY，YinKZ，ZhangXM.Detectionof humanpapillomavirusDNAincolorectalneoplasmsbyinsituhybridizationwithdigoxinlabelledDNAprobes,J,.HuarenXiaohuaZazhi ):771-773. 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