内耳琥珀酸脱氢酶组织化学方法探讨

内耳琥珀酸脱氢酶组织化学方法探讨 | 第19卷第6期河北医科大学Vo1.19No.6 1998年l1月JOURNALOFHEBEIMEDICALUNIVERSITYNov.1998 弓内耳琥珀酸脱氢酶组织化学方法探讨 康文华王朝 /赵春芳 ..,—-'_, _—?_一 基础医学院组胚学教研室(050017) 关键词迷路/酉孽学;琥珀酸脱氢酶;组织化学技术_-,?'一,一————-.,,—'_ ——'.一 中图号R322.923 开展对内耳的微细结构研 由于技术原因, 究,尤其是内耳的组织化学方面,一直难以获得 满意的结果.显示琥珀酸脱氢酶,习惯用冰冻 切片和明胶封片的方法,虽然可以定位,但保存 二甲膳反应颗粒.时间短,分瓣力差,作者以采 用常规石蜡包埋切片方法,从技术上加以改进. 对显示内耳酶活性反应获得了较满意结果,报 道如下. l材料与方法 1.1取材:豚鼠16只,快速断颈处死,沿外耳 颞侧暴露出内耳,取出螺旋器.此步要快,3分 钟内完成.在迅速将螺旋器投入孵育液之前, 先从蜗底以5号针穿刺打开一个小孔,吸取适 当孵育液自蜗顶注入膜蜗管内;然后放人37? 振荡水浴内,恒温保持2小时,再用等渗盐水漂 洗. 1.2固定与锐钙:用1%福尔马林固定2,3 小时,然后蒸馏水洗3次,每次5分钟,放人 5%乙二胺四乙酸二钠脱钙液,放置5天,中间 换2次新脱钙液,蒸馏水洗,递度乙醇脱水,常 规石蜡包埋,切片厚度为7,8btm,常规脱蜡后 不用复染,光镜观察. 2结果 琥珀酸脱氢酶的二甲腊颗粒呈蓝紫色,大 1勺 小均匀,主要定位于Corti器毛细胞,螺旋神经 节细胞以及血管纹,至于支持细胞,柱细胞,前 庭膜等呈偶见细微小粒,但一般可列为阴性. 未见任何扩散现象,故定位准确. 3讨论 内耳的酶组织化学定位,一直是研究者关 心的课题,琥珀酸脱氢酶反映着细胞的功能状 态,它是细胞呼吸,氧化供能和三羧酸循环的必 要成份,该酶的变化可为内耳的有关病变机制 提供线索.然而由于内耳的组化技术难点,一 直阻碍着对这一领域的深入探讨.作者对内耳 进行了酶组织化学方法研究.取得了较好效果. 其经验为:?取材快速准确;?向内耳淋巴内注 入孵育液时注意使液体布满全管,但不能压力 过强,以免导致微细结构改变;?孵育时间适 当,过短酶反应较差;过长酶会出现扩散;?充 分水洗去除游离钙质,保证制片质量.本技术 最大改进.是琥珀酸脱氢酶反应完全采用石蜡 包埋切片技术,若按照传统的方法,皆采用冰冻 切片和甘油明胶封片法,颗粒酶保存时间短,且 切片不能长期保存,易褪色,切片厚度10, 15btm,分辨力差,易出现冰晶.采用石蜡包埋 法,弥补了上述不足,有利于对该酶进行深入研 究. 1998—03(—16收稿) , 厶 7, ^j ?./