【doc】注射用盐酸大观霉素细菌内毒素检测方法的研究

【doc】注射用盐酸大观霉素细菌内毒素检测的研究 注射用盐酸大观霉素细菌内毒素检测方法 的研究 嚣拳期Jox~rnalof帙Suz道hou师Rti.1w院ayT,eac.h报erlC—o-1.1egel999年8月VD】+16No'4Aus.1999 7D一]注射用盐酸大观霉素 细菌内毒素检测方法的研究 沈春莹 (瞢强苏州删药有限公司.苏州215011) f{\ 聊, 摘要:参照美国药典)?I版厦中国药典1995年版二部细茸内毒素检查法中 干扰试验的基本原理,对注射用盐酸大观霉素SpectinomycinHydrochlorideforIn. jeetion(筒称SP)进行了细茵内毒素检查法的研宛,实验结果明,浓度为1.88u/ml 的样品溶液对鲎试验不存在干扰固素,可用细茵内毒素检查法作为谊药品的发热物 质检查. 关麓词:盐酸大现霉素,细茸内毒素,热原检列 从1995年版中国药典正式收载细菌内毒素检查法以来,这一方法在我国逐步得到推广. 与热原检查法相比,细菌内毒素检查法具有简便,快速,准确性高,重复性好的优点,能更好地 符合GMP的要求,注射用盐酸大观霉素的发热物质检查部颁标准规定用热原检测叫,根据文 献[2,3]细菌内毒素检查法的基本原理,笔者对样品进行了稀释,当稀释浓度为1.88Hmt时, 既不存对鲎试荆的干扰因素,又可检出内毒素,且与理论计算值相符. 1实验部分 1.1仪置,试赉I与试药 恒温水浴锅(Precision公司,型号183),微量可调移液器(RAININ公司,25ot,I),旋涡混合 器(Therornlyne公司,型号MaxiMixI). 鲎试剂(AssociateDfCapeCod),灵敏度0.125EU/ml,批号597—02-007,有效期2002年2 月;无热原水(湛江中美生物有限公司),批号961108,内毒素含量<o.03EU/ml;细菌内毒素 国家参考标准品(USP),含量10000EU,批号G. 测试样品:注射用盐酸大观霉素(普强苏州制药有限公司)2g/瓶,批号199810023. 199810024,199810025,热原检查合格. 1.2计算 SP的细菌内毒素限值L的计算:参照SP的热原试验家兔注射荆量lml/kg[']~l我国细菌 内毒紊标准的内毒素反应阕值5EU/kg嘲,计算L值,L=K/M5EU/ll1I. sP的最大有效稀释倍数MVD的计算:MVD=L一{{;40倍. 收疆B期t1999-O3-22收崔B期1999-06-21 ::=f 4期沈春莹星旦垒堕叁堕蔓盘塑堇圭盘壁型查鲞堕盟塞!! SP的最小有效稀释浓度MVC的计算:MVc一一一1.88u/ml. 其中c.为SIP的家兔热原试验注射浓度75u/mlm,经过计算,以浓度为1.88u/ml的样品 溶液进行干扰试验. 1.3操作 样品溶液的制备:取批号为199810023的样品(2g/瓶)一瓶,加10.67mi无热原水,振摇溶 解后得到188u/ml的样品溶液,吸取该溶液1.Owl,加入至去热原的lOOml容量瓶,加入无热 原水至刻度,在旋涡混合器上混合3O秒,得到浓度为1.88u/ml的样品溶液. 取细菌内毒素国家参考标准品(1OOOOEU/瓶)一瓶,加入5.0ml无热原水,在旋涡混合器 上混合2O分钟,得到200OEU/rIll的内毒素溶液. 用无热原水按下列方法稀释内毒素,得到0.25,0.125,0.0625,0.03125EU/rIll的内毒素 标准溶液.吸取2000EU/m]的内毒素溶液0.2mI,加入至已有3.8mI无热原水的试管中,在旋 ,得到100EU/rnl的内毒索标准溶液吸取100EU/ml的内毒涡混合器上混合30秒 素标准溶液 0.2m1,加入至已有3,8ml无热原水的试管中,在旋涡混合器上混合3o秒,得到5EU/rIll的内 毒素标准溶液.吸取5EU/的内毒素标准溶液0.5ml,加入至已有4.5ml无热原水的试管 中,在旋涡幌合器上混合3o秒,得到0.EU/TIlI的内毒素标准溶液.吸取0.5EU/IIlI的内毒素 标准溶液1.0ml,加入至已有1.0wl无热原水的试管中,在旋涡混合器上混合3O秒,得到0. 25EU/的内毒素标准溶液.吸取0.25EU/rIll的内毒素标准溶液1.Oral,加入至已有1.Oral 无热原水的试管中,在旋涡混合器上混合30秒,得到0.125EU/ml的内毒素标准溶液.吸取0. 125EU/的内毒素标准溶液1.0m],加入至已有1.Oml无热原水的试管中,在旋涡混合器上 ,得到o'0625EU/rIll的内毒素标准溶液.吸取0.0625EU/ml的内毒素标混台3O秒 准溶液1. Oral,加入至已有1.Ond无热原水的试管中,在旋涡混台器上混合3O秒,得到0.03125EU/ml 的内毒素标准溶液.取16只去热原的lOX75mm试管,按每个浓度4管,分别加入内 毒素标准溶 液,每管0.1ml.另取2管,各加入无热原水0.1ml,作为阴性对照管. 2000EU/ml等lOOBS/ml等5EU/ml等0.5EU/ml等0.5EU/rnl等 0.25EU/nd?0.125EU/nd?0.0625EU/nd?0.03125EU/ml 用1.88u/ml样品溶液代替无热原水,按上述方法稀释内毒素,得0.25,0.125,0.0625, 0.03125EU/nd的内毒素样品溶液.分别按每个浓度4管加入至16支试管中,每管0.Iml,轻轻 混匀,同时置于37士1?水褡培养60~2分钟,观察结果,观察方法见文献[3]. 按上述步骤取批号为199810024,199810025的样品进行干扰试验 2结果与讨论 三次干扰试验中均在0.0625~0.25EU/fIll之间,说明所用鲎试剂的灵敏度符合规定, 试验有效试验中Et均在0.0625~0.25EU/ml之间,且Es/Et的比值在0.5,2之间,说明浓 度为1.88u/ml的样品溶液对鲎试验无干扰作用.适宜作细菌内毒素检查.三批样品溶液均为 阴性,说明样品的细菌内毒索小于限值,样品合格与热原检查法结果一致.由此可见,这三次干 扰试验结果合格. 铁道师院199 三批样品的干扰试验结果合格后,除非鲎试剂,样品的来源,配方或生产工艺有变化时,必 须重复进行干扰试验外,否则在进行日常的细菌内毒紊检查时,只需准备反应管5 只,样品管2 只,阴性对照管1只,阳性对照管1只,样品阳性对照管1只(即浓度为0.25EU/ml的内毒紊样品 溶液).与兔热原法相比,细菌内毒素检查法具有操作简便,快速的优点. 表1干扰试验结果 样品批号1998100~31998loo241995l0025 0.25+上上+I+上上上上上上上 0.125上+上上上上上上上上上上内毒素标 mO625准溶蕞反 m?125 应结果 (EI.,TImD反应终0. 1250.125n125n125n125ml2s0.125点浓度0.1250.1250.1250.I250.125 EIml250.1250,125 m25上上上上上上上上上上上上 内毒素标ml2s上上上?'?上上上上上上上上 no625上准溶穗反 o.03125 应结果 'l=U,血I)反应罄 点}担度吼l25m1290.1250.1250.1250.1290I1290.10.t390.1290.129ml25 El吼1250.1250.125 样品f 胡性对照臂 其中EI,E1分别溶藏反应鳃点的几何平均值. 参考文献 WS-242(X-202)一93 UsF彻版p1696 中国琦典1995年版二部附录 V,/S-241(X-201)一93 夏摄民.药品细菌内毒素捡查的限值.茹暂分忻杂志,1995,I5(3)54 StudyofBacterialEndotoxinTestinSpectinomycin HydrochlorideforInjection ShenChunying (UpjohnSuzhouPharmaceuticalCo.Ltd.,Suzhou215011) 【Abstract】AccordingtOtheprincipleofinterferencetestinBacterialEndotoxinin USP23rdeditionandChinesePharmacopoeia1995,SpectinomycinHydrochloridewasstud. 1edwithbacterialendotoxintestusingLALmethod.Theresultsshowedthattherewasll0 interferencefacloton0.125EU/fI1lLaLinconcentrationof1.88u/m1.Inconclusion.LAL methodwouldbeusefulinpyrogentestofspectinomycinhydrochlorideforinjection. 【Kcywerds】SpectinomycinHydrochloride,BacterialEndotoxin,Pyro~en [责任编辑谢金舂]