高迁移率族蛋白蛋白与胃癌周围神经浸润的关系研究

高迁移率族蛋白蛋白与胃癌周围神经浸润的关系研究 　　高迁移率族蛋白在其他组织中则主要集中在细胞核，释放入细胞外可参与介导炎症反应，下面是搜集的一篇高迁移率族蛋白蛋白与胃癌神经浸润关系探究的，欢迎阅读参考。 　　胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，无论经过手术或是联合治疗，预后均较差，五年生存率较低，究其原因主要在于2/3的胃癌患者在发现时已出现局部或远处转移。周围神经浸润(PNI)是指肿瘤侵犯邻近的神经，肿瘤细胞包绕神经纤维，或进入神经束膜内沿其扩展的局部浸润转移现象。最近研究发现PNI是肿瘤的局部扩散方式之一，可能会成为腹部肿瘤继直接转移、种植转移、淋巴道及血道转移之后的第五个独立存在的转移途径，对肿瘤的预后判断有重要的作用。 　　高迁移率族蛋白(HMGB1)是一种非组蛋白染色体结合蛋白，在真核生物细胞内参与基因转录、DNA损伤修复等多种生物学行为，被分泌到细胞外可参与炎症反应，可诱导细胞的增殖、分化、迁移及神经轴突的生长，目前已发现它与多种肿瘤的侵袭转移有关。有研究显示血清中的HMGB1水平可用于胃癌的早期诊断，并且有助于胃癌的分期和预后评估,可能作为胃癌早期诊断的靶点。本研究旨在通过HMGB1蛋白与胃癌周围神经浸润的关系，探讨其在胃癌神经浸润中的作用及其对胃癌患者侵袭转移的影响。 　　1材料和方法 　　1.1材料保定市第一中心医院病理科2008年1月—2012年12月胃癌患者存档蜡块，筛选出伴有周围神经浸润胃癌50例和未伴有周围神经浸润胃癌40例(对照组)，正常胃组织30例均取自胃癌根治术(距癌组织边缘≥5cm)，切除胃组织经病理确诊为正常组织。所选病例均有完整病历资料，术前均未接受过放化疗或免疫治疗。临床分期采用2010年第7版国际抗癌联盟TNM分期，组织病理学分级采用Bloom-Richardson系统Nottingham改良方案。 　　1.2方法 　　1.2.1主要试剂鼠单克隆抗体HMGB1(购自北京博奥森生物技术有限公司)，二抗(快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物)、DAB、PBS等实验试剂均购自福州迈新公司。 　　1.2.2免疫组织化学方法采用EnVision二步法,以PBS替代一抗作为阴性对照。石蜡包埋的组织4μm连续切片;二甲苯脱蜡，梯度酒精逐级水化;3%双氧水(H2O2)、甲醇室温下作用30min，以阻断内源性过氧化物酶活性;乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液抗原热修复90s;按免疫组化试剂盒说明书操作，加上一抗HMGB1,4℃孵育过夜，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗;Envision二抗室温下孵育30min;二氨基联苯胺(DAB)光镜控制下显色，苏木精复染，脱水，风干，中性树脂封片。 　　1.2.3结果判断细胞阳性达以细胞内出现棕色颗粒为标准，随机选取10个视野，切片中超过20%的肿瘤细胞出现棕色染色为阳性表达。 　　1.3统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行分析，各组间HMGB1阳性率分析采用χ2检验，组间差异的显着性检验采用t检验，P≤0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1HMGB1在各组中的表达情况HMGB1蛋白表达阳性呈棕色，位于细胞质或细胞核内。 　　HMGB1在伴有周围神经浸润胃癌组织中的表达阳性率为76.0%(38/50)，高于未伴有周围神经浸润胃癌组织55.0%(22/44)和正常胃组织30.0%(9/30)中的表达(P<0.05)。 　　2.2HMGB1表达与伴有周围神经浸润胃癌临床病理学参数的关系伴有周围神经浸润胃癌组织中HMGB1阳性表达与临床分期、有无淋巴结转移及肿块大小呈正相关(P<0.05);而与患者的年龄无明显相关性(P>0.05)。 　　3讨论 　　HMGB1是HMG家族成员之一，它是在1973年由Goodwin等发现的一种非组蛋白DNA结合蛋白，主要存在于细胞内，在肝和脑组织中主要集中于胞质，在其他组织中则主要集中在细胞核，释放入细胞外可参与介导炎症反应。有研究证实，在病理情况下，细胞内的HMGB1可主动被分泌到细胞外，而释放到胞外的HMGB1可被表达RAGE、TLR、TLR4、TLR9等识别受体的细胞识别参与免疫反应，另外还可参与多种生物学效应，如恶性肿瘤的发生转移、细胞的增殖分化、神经突触生长等。 　　HMGB1在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。在消化道肿瘤患者中，HMGB1呈高表达，与其受体的共表达及肿瘤的浸润深度、淋巴结转移密切相关，且预后均较差，在肝癌患者的研究中还发现HMGB1与临床分期、分级密切相关。 　　肿瘤转移是一个多步骤复杂的过程，也是恶性肿瘤的生物学特征之一，严重影响患者的治疗和预后。周围神经浸润是新近被发现的影响肿瘤局部扩散的一种新途径，对肿瘤的预后判断有重要作用，有研究发现PNI阳性与肿瘤组织的恶性程度、淋巴结转移及肿块大小等多种病理学参数相关。 　　本研究发现，HMGB1在伴有周围神经浸润胃癌组织中阳性表达率为76.0%，显着高于未伴有周围神经浸润胃癌组织(55.0%)和正常胃组织(30.0%)，与伴有周围神经浸润胃癌组织淋巴结转移、临床分期呈正相关，与年龄无关，提示HMGB1可能会通过促进胃癌周围神经生成影响胃癌的侵袭转移，该作用与HMGB1促进肿瘤周围神经的生成有关。 　　胃癌的预后是一个多因素、多步骤协调的复杂过程，抑制周围神经的生成是目前恶性肿瘤临床治疗研究的热点，寻求抗胃癌周围神经生成的有效靶点具有重要意义。HMGB1在胃癌的发生发展过程中具有重要作用，并且对胃癌的早期诊断及预后评估有重要意义，且研究证实HMGB1与神经突触生长有关。国内外许多研究表明HMGB1是一个潜在的靶抗原,靶向干预HMGB1活性在胃癌生物治疗中具有良好应用前景。本研究显示HMGB1在伴有周围神经浸润胃癌组织中表达高于未伴有周围神经浸润胃癌组织，有望在胃癌的靶向治疗及预后评估中发挥一定作用。 　　 　　[1]Starzyn'skaT.Molecularepidemiologyofgastriccancer[J].DigDis,2007,25(3):222-224. 　　[2]ABilici,MSeker,BBasak,etal.Prognosticsignificanceofper-ineuralinvasioninpatientswithgastriccancerwhoundergoingcu-rativeresection[J].SurgOncol,2010,17(8):2037-2044. 　　[3]OhYJ,YounJH,JiY,etal.HMGB1isphosphorylatedbyclassicalproteinkinaseCandissecretedbyacalcium-dependentmecha-nism[J].JImmunol,2009,182(9):5800-5809. 　　[4]EllermanJE,BrownCK,deVeraM,etal.Masquerader:highmo-bilitygroupbox-1andcancer[J].ClinCancerRes,2007,13(10):2836-2848. 　　[5]MullerS,ScaffidiP,DegryseB,etal.NewEMBOmembers‘review:thedoublelifeofHMGB1chromatinprotein:architec2turalfactorandextracellularsignal[J].EMBOJ,2001,20(16):4337-4340. 　　[6]ChungHW,LeeSG,KimH,etal.Serumhighmobilitygroupbox-1(HMGB1)iscloselyassociatedwiththeclinicalandpathologicfea-turesofgastriccancer[J].JTranslMed,2009,7:38.