猴头菌中甾醇物质的研究

猴头菌中甾醇物质的研究　　摘要：猴头菌被报道含有丰富的甾醇物质，具有良好的保健功能，和药用价值。本文采用高效液相色谱、紫外扫描光谱、红外光谱法和液质联用等现代化分析手段，鉴定了猴头菌中含有丰富的活性物质――麦角甾醇。　　关键词：猴头菌;活性物质;甾醇　　猴头菌肉嫩味美，营养丰富。猴头菌包括丰富的蛋白质、脂肪、纤维素、多糖，还含有16种氨基酸，其中有8种人体必需氨基酸，而且各种氨基酸的比例与人体需要接近[1]。猴头菌不仅食用价值高，而且在医学上具有极高的药用价值。猴头菇中含有丰富的甾醇物质，近年来国外有研究表明，甾醇类物质对胃粘膜有很好的保护作用[2]，此外由于麦角甾醇在人体内可转化为维生素D2，维生素D2在调节生命代谢功能上有重要作用[3]，所以猴头菌中的甾醇类活性物质具有很好的生理保健功能。　　本研究的目的是采用现代的分析检测方法证实猴头菇中的甾醇物质的存在。　　1资料与方法　　1.1资料、试剂与仪器无水乙醇、盐酸、甲醇、石油醚(30～60℃)、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氢氧化钾(以上均为国产分析纯);甲醇(色谱纯)。　　HPLC色谱仪，美国waters公司;UV-1700，紫外扫描仪，日本岛津公司;WD-9403，紫外分析仪，北京市六一仪器厂;Agilent，1100LC/MSDTrap液质联用仪，美国安捷伦公司;多功能粉碎机，永康市帅通工具有限公司;GZX-9240MBE数显鼓风干燥箱，上海博讯有限公司医疗设备厂;HH-2恒温水浴锅，金坛市瑞杰尔电器有限公司。　　1.2测定方法[4]甾醇类物质的提取工艺：准确称取猴头菌粉末0.5g，加入pH7.4的磷酸盐缓冲溶液2.5ml和15%的KOH-乙醇溶液6ml，混匀，80℃水浴加热皂化60min，离心，向上清液中加入6mL的石油醚(30～60℃)提取3次，合并提取液，加水6mL洗涤2次，石油醚层于60℃水浴蒸干，溶于1ml甲醇中待测。　　1.2.1甾醇提取物的紫外吸收光谱测定甾醇提取液用甲醇稀释到10ml，在250～350nm进行紫外扫描，观察在270～300nm之间的紫外吸收。　　1.2.2甾醇提取物的红外光谱测定甾醇提取液用甲醇稀释到10ml，吸取100μL均匀涂在红外液体模具窗片上，晾干后采用红外光谱仪扫描分析，波长范围为4000cm-1～400cm-1，观察吸收峰，确定其基团类型。　　1.2.3猴头菌甾醇提取物的HPLC测定　　1.2.3.1HPLC色谱仪美国Waters公司;色谱柱：HypersilBDSC18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm);流动相：甲醇;检测波长：282nm;流速：0.8mL/min;柱温：30℃。　　1.2.4主要色谱峰的HPLC-MS测定　　1.2.4.1HPLC仪器型号Agilent1100seriesLC;流动相：甲醇-水(95-5);流速：0.4ml/min;检测波长：282nm;进样量：5μL。　　1.2.4.2MSD仪器型号Agilent1100seriesLC/MSDTrap;离子源：电喷雾电离(ESI);正离子检出模式;干燥器流速：8L/min;干燥器温度：300℃;喷雾压力：30.0psi;毛细管电压：4000V;分子量扫描范围：300amu～700amu。　　2结果与分析　　麦角甾醇作为猴头菌中一种重要的活性物质，本实验对猴头菌甲醇提取物进行了液相色谱、紫外吸收光谱、红外光谱检测以及液质联用分析。　　2.1猴头菌甾醇化合物HPLC的鉴定以甲醇为溶剂，制备猴头菇甾醇提取液，采用HPLC法进行检测，结果见图1所示。　　由图1可知，甲醇提取液在16min的时候出峰，且整个运行过程中没有杂峰出现。经与其他文献对比，基本上可以确认16min的这个峰应该是甾醇。　　2.2猴头菌甾醇化合物紫外图谱的鉴定猴头菌甲醇提取液，采用紫外光谱的方法进行鉴定，甾醇提取物的紫外吸收光谱结果如图2所示：　　由图2中可以看出，在271、282和293nm处有典型吸收峰，其中最强特征吸收峰在282nm处，与麦角甾醇的文献报道一致[5]，符合麦角甾醇的紫外吸收光谱特征。　　2.3猴头菌甾醇化合物红外图谱的鉴定猴头菌甲醇提取液，采用红外光谱的方法进行鉴定，甾醇提取物的红外吸收光谱结果如图3所示：　　由图3看出，3301cm-1为活泼质子羟基(O-H)伸缩振动的特征吸收，2941、1448cm-1为-CH3的吸收，符合甾醇吸收峰的特征。　　2.4猴头菌甾醇化合物液质联用图谱的鉴定猴头菌甲醇提取液，采用液质联用的方法进行鉴定，猴头菇提取物主要色谱峰的HPLC-MS测定结果见图4、图5所示。　　由图4、5可以知道，甲醇提取物有几种化合物组成，其中保留时间为2.195～2.726min的峰值最高。质谱数据分析其分子量为579，可以认为是由麦角甾醇酯化一个葡萄糖分子，并且带一个钠离子组成(395+162+22)。由此可以认为保留时间为2.195～2.726min的峰是麦角甾醇酯化合物。　　3结论　　近年来国外有研究表明，甾醇类物质对胃粘膜有很好的保护作用，本文通过HPLC、紫外扫描、红外、液质联用等现代的分析方法，共同证明了猴头菌中含有丰富保健的活性物质～麦角甾醇。　　：　　[1]袁亚宏，岳田利，王云阳，等.猴头菇营养液提取工艺研究[J].中国食品学报，2005，2(5)：65-68.　　[2]PratsN，LopezS，DomingoM，etal.ProlongedPersistenceofListeriaMonocytogengsAfterIntragastricInfectionInCorticosteroid-TreatedMice[J].VetMicrobiol，1997，58(l)：79.　　[3]何秀萍，张博润.微生物麦角甾醇研究进展[J].微生物学通报，1998，25(3)：166.　　[4]李洁莉.猴头菌药效成分研究和猴头菌属的分子生物学鉴定[D].南京师范大学学位论文，2002：04.　　[5]高虹，谷文英.三波长光度法测定姬松茸中麦角甾醇含量[J].分析化学研究简报，2007，(4)：586-588.